發(fā)布時間：2018-02-15 14:14

  本文關(guān)鍵詞： 神經(jīng)炎癥 老化 前炎癥細(xì)胞因子 干擾素-γ 腫瘤壞死因子-α 星形膠質(zhì)細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞 Bcl-2　出處：《中南大學(xué)》2006年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的：1．探討小鼠腦實質(zhì)，尤其是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對于兩種前炎癥細(xì)胞因子丙種干擾素和腫瘤壞死因子(IFN-γ和TNF-α)的混合物誘導(dǎo)的急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)以及這種反應(yīng)是否隨著年齡的改變而變化；2．探討前炎癥細(xì)胞因子對神經(jīng)元存活的影響；3．探討神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在對抗炎癥反應(yīng)時二者的相互關(guān)系。 方法：將不同年齡的動物C57BL／6J小鼠，分成三個組：2.3-3.5個月作為青年組，10-11個月作為中年組，19-22個月作為老年組。依賴立體定位技術(shù)，于小鼠右側(cè)側(cè)腦室內(nèi)注射兩種前炎癥細(xì)胞因子的混合物(IFN-γ2μl+TNF-α2μl，生物活性均為500單位／每微升)4μl。PBS作為實驗對照組。動物分別存活1、2和4天。使用GFAP免疫組織化學(xué)法檢測小鼠腦實質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP的表達(dá)變化；用F4／80和CD11b兩種小膠質(zhì)細(xì)胞表面抗原的免疫組織化學(xué)法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞F4／80和CD11b的表達(dá)變化；用抗凋亡蛋白Bcl-2的免疫組織化學(xué)法檢測神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的Bcl-2的表達(dá)變化，并采用Western blot技術(shù)對其進(jìn)行定量分析。Fluoro Jade B染色和Tunel染色，檢測在前炎癥細(xì)胞因子的作用下，神經(jīng)元是否有凋亡或者壞死；免疫熒光雙重標(biāo)記技術(shù)，觀察神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與Bcl-2陽性神經(jīng)元之間的相互關(guān)系。 結(jié)果：GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞分布在梨狀皮質(zhì)和內(nèi)嗅皮質(zhì)、隔、整個海馬結(jié)構(gòu)、紋狀體、杏仁核、皮質(zhì)下白質(zhì)及主要的纖維束。PBS注射的對照組動物，腦室周圍的腦實質(zhì)內(nèi)GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞展示出靜息的形態(tài)特征：胞體小，分支細(xì)長，染色淡。細(xì)胞因子處理2天后，三個年齡組動物腦實質(zhì)內(nèi)GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活，表現(xiàn)出肥大的形態(tài)特征：細(xì)胞胞體相對增大，突起肥大，尤其在海馬內(nèi)明顯。持續(xù)到注射后4天。與青年和中年組比較，老齡動物腦星形膠質(zhì)細(xì)胞的這種變化尤為明顯。定量分析表明，細(xì)胞因子處理2天后，老年組與中、青年組相比，海馬CA1區(qū)、紋狀體內(nèi)GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和光密度比較，差異有顯著性(P＜0.001)。 PBS注射24小時后，三個年齡組小鼠腦室周圍的腦實質(zhì)內(nèi)F4／80陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞展示出靜息的形態(tài)特征：胞體較小，，突起細(xì)長。細(xì)胞因子處理24小時后，與對照組比較，腦室周圍的腦實質(zhì)內(nèi)有大量的F4／80陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞被激活，展示出肥大的(胞體增大，突起短粗)、阿米巴樣或者桿形細(xì)胞等不同激活狀態(tài)下的形態(tài)特征。激活的小膠質(zhì)細(xì)胞主要分布于腦室周圍的腦實質(zhì)結(jié)構(gòu)：海馬、隔、紋狀體、大腦皮質(zhì)、腦室周圍的丘腦結(jié)構(gòu)和前丘腦，同時深入腦實質(zhì)的深面。與青年和中年組動物比較，F(xiàn)4／80陽性小膠質(zhì)細(xì)胞的激活在老齡動物腦中增強；老齡動物腦實質(zhì)內(nèi)有較多的阿米巴樣小膠質(zhì)細(xì)胞，CD11b的免疫組化結(jié)果與F4／80的相似。 定量分析表明，細(xì)胞因子處理24小時后，在每個年齡組內(nèi)，對于腦實質(zhì)內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目和密度進(jìn)行Post-hoc檢測，差異有顯著性(P＜0.0001)；與青年和中年組動物比較，老齡動物腦實質(zhì)內(nèi)F4／80、CD11b陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目增加最為明顯，染色密度最高，差異有顯著性(P＜0.001)。 FJB染色未發(fā)現(xiàn)FJB染色陽性的神經(jīng)元；TUNEL染色未發(fā)現(xiàn)TUNEL染色陽性的神經(jīng)元。Bcl-2陽性神經(jīng)元在實驗組和實驗對照組均有所見，它們主要分布在第一、二運動皮質(zhì)第ⅴ層和軀體感覺皮質(zhì)、隔、斜角帶核、海馬和中腦紅核等結(jié)構(gòu)。Bcl-2免疫反應(yīng)產(chǎn)物位于胞質(zhì)及突起內(nèi)，呈棕色，胞核不顯色。Bcl-2陽性神經(jīng)元在PBS注射后2天，與青年、中年組動物比較，老齡動物腦皮質(zhì)、海馬內(nèi)Bcl-2表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)。細(xì)胞因子注射2天后，與對照組比較，各年齡組動物皮質(zhì)、海馬內(nèi)Bcl-2表達(dá)均有上調(diào)，表現(xiàn)為胞質(zhì)及突起內(nèi)Bcl-2免疫反應(yīng)產(chǎn)物著色加深。這一變化可持續(xù)到注射后4天。與青年、中年組動物比較，老齡動物腦皮質(zhì)內(nèi)Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)目和光密度增加最為明顯，定量分析結(jié)果表明其差異均有顯著性(P＜0.01)。海馬內(nèi)Bcl-2的表達(dá)半定量結(jié)果與皮質(zhì)的相似。此外，在皮質(zhì)、海馬和胼胝體內(nèi)可見激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)抗凋亡蛋白Bcl-2；GFAP和Bcl-2免疫熒光雙標(biāo)記顯示：Bcl-2免疫熒光陽性神經(jīng)元周圍被GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起包繞或接觸。 實驗對照組和細(xì)胞因子處理組動物皮質(zhì)、海馬內(nèi)均有Bcl-2表達(dá)。Bcl-2為一分子量約為25-26KDa的單一蛋白帶。定量的分析表明，PBS注射4天后，老年組與青年組和中年組比較，皮質(zhì)和海馬內(nèi)Bcl-2蛋白質(zhì)的表達(dá)均明顯增加，差異有顯著性(P＜0.01)；細(xì)胞因子注射4天后，中年組與青年組、老年組與青年組及老年組與中年組比較，皮質(zhì)和海馬內(nèi)Bcl-2蛋白質(zhì)的表達(dá)均明顯增加，差異有顯著性(P＜0.01)。 結(jié)論：大腦腦室內(nèi)注射聯(lián)合細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的混合物4μl，能夠誘導(dǎo)腦實質(zhì)急性神經(jīng)炎癥的發(fā)生。細(xì)胞因子注射后24小時，小膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活，F(xiàn)4／80和CD11b的表達(dá)上調(diào)；2天后，星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯被激活，GFAP的表達(dá)上調(diào)；小膠質(zhì)細(xì)胞的活化早于星形膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的激活在老齡動物腦中最為明顯。表明激活的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可能參與腦內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)，老齡動物腦的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對于炎癥刺激的易感性增強。 此劑量的聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小鼠急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)，腦內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)已經(jīng)死亡和正在經(jīng)歷死亡的神經(jīng)元。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的小鼠腦實質(zhì)急性神經(jīng)炎癥反應(yīng)，三個年齡組動物皮質(zhì)、海馬內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)均有上調(diào)，提示神經(jīng)元內(nèi)上調(diào)的Bcl-2可能參與腦內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)性反應(yīng)；Bcl-2的表達(dá)在老齡動物腦中強于中、青年組，提示老齡動物腦的神經(jīng)元對于炎癥刺激的易感性增強。激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Bcl-2，可能參與其自身保護(hù)，Bcl-2陽性神經(jīng)元周圍被星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起包繞或接觸，提示神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞在參與腦內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)和保護(hù)性反應(yīng)中關(guān)系密切。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R363

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號：1513455