發(fā)布時(shí)間：2018-02-12 02:23

  本文關(guān)鍵詞： 花粉 重組變應(yīng)原 克隆 表達(dá)　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：近數(shù)十年以來，世界范圍內(nèi)各種變態(tài)反應(yīng)病發(fā)病率明顯增加，，尤其在工業(yè)化程度較高的發(fā)達(dá)國家，各種過敏性疾病嚴(yán)重影響居民生活質(zhì)量，提高醫(yī)療費(fèi)用，造成經(jīng)濟(jì)損失，已經(jīng)成為世界性衛(wèi)生問題。人群中約有五分之一屬于過敏體質(zhì)，有可能發(fā)生過敏性疾病。世界衛(wèi)生組織已將此類疾病列為“21世紀(jì)重點(diǎn)研究和預(yù)防的疾病”。 花粉是最常見的氣傳吸入性過敏原之一，可引起多種過敏性疾病，如過敏性鼻炎、支氣管哮喘、過敏性結(jié)膜炎等�！盎ǚ郯Y”即季節(jié)性變應(yīng)性鼻炎，又稱枯草熱。 二球懸鈴木花粉是近年來發(fā)現(xiàn)的我國南方地區(qū)常見的引起特應(yīng)性體質(zhì)者發(fā)生過敏反應(yīng)的過敏原，對其變應(yīng)原組分和分子生物學(xué)特點(diǎn)的研究開始受到研究者重視。 用基因工程制備人工重組變應(yīng)原具有天然變應(yīng)原提取物不可比擬的優(yōu)越性，國外已開始研制常見變應(yīng)原的人工重組蛋白，逐步應(yīng)用于臨床診斷和特異性免疫治療。 目的：提取天然二球懸鈴木花粉總RNA，制備其主要變應(yīng)原的編碼基因克隆，誘導(dǎo)表達(dá)人工重組蛋白，鑒定其生物學(xué)活性和免疫學(xué)特異性。 方法：采集二球懸鈴木花粉，Trizol法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。設(shè)計(jì)其主要變應(yīng)原編碼基因的特異性引物，用PCR擴(kuò)增目的片段。將擴(kuò)增的目的片段用雙酶切法與質(zhì)粒pET32a連接，用CaCl_2法轉(zhuǎn)入工程菌DH5α制備基因克隆。提取基因克隆導(dǎo)入工程菌BL21a(DE3)，堿裂解法提取
[Abstract]:Background: in recent decades, the incidence of allergy diseases has increased significantly worldwide, especially in the highly industrialized developed countries, which seriously affect the quality of life of residents and increase medical costs. Causing economic losses, it has become a worldwide health problem. About 1/5 of the population belong to allergic constitution, which may lead to allergic diseases. The World Health Organization has listed these diseases as "diseases focused on research and prevention in 21th century". Pollen is one of the most common airborne inhaled allergens, which can cause many allergic diseases, such as allergic rhinitis, bronchial asthma, allergic conjunctivitis and so on. The pollen of Suzuki mongolica is a common anaphylaxis found in southern China in recent years. The study of its allergen components and molecular biological characteristics has attracted more and more attention. The preparation of artificial recombinant allergens by genetic engineering has incomparable advantages over natural allergen extracts. Foreign countries have begun to develop artificial recombinant proteins of common allergens, which have been gradually used in clinical diagnosis and specific immunotherapy. Objective: to extract the total RNA of pollen from the natural two-ball suspension of Suzuki Suzuki, prepare the encoding gene clone of its main allergen, induce and express the artificial recombinant protein, and identify its biological activity and immunological specificity. Methods: the total RNAs were extracted by Trizol method and reverse transcripted as cDNA.The specific primers of the main allergen encoding genes were designed and amplified by PCR. The amplified fragments were linked with plasmid pET32a by double enzyme digestion. The gene clone was obtained by transferring DH5 偽 into engineering bacteria by CaCl_2 method. The gene clone was extracted and introduced into the engineering bacterium BL21a DE3, and extracted by alkali lysis method.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：1504567