實(shí)驗(yàn)?zāi)康?骨組織受到包括神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的諸多因素影響與調(diào)節(jié)。近來研究證實(shí),軸突導(dǎo)向因子3A(Semaphorin3A)是一種具有調(diào)節(jié)骨量功能的化學(xué)趨化因子。但其調(diào)節(jié)骨組織的機(jī)制尚不清晰。施旺細(xì)胞作為參與神經(jīng)損傷后修復(fù)的重要成員,在許多生理病理?xiàng)l件下與軸突導(dǎo)向蛋白相互作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是初步探究神經(jīng)細(xì)胞在軸突導(dǎo)向因子3A促進(jìn)成骨分化的過程中的作用與機(jī)制,從而進(jìn)一步了解神經(jīng)組織在骨組織動(dòng)態(tài)變化中的具體作用與其影響因素,為骨相關(guān)性疾病的治療與預(yù)防提供理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法:1.構(gòu)建人成骨樣細(xì)胞MG63與人施旺細(xì)胞共培養(yǎng)體系,測(cè)定共培養(yǎng)后第1天,3天,5天的細(xì)胞增殖情況,篩選出最佳的細(xì)胞共培養(yǎng)比例。2.確定最佳共培養(yǎng)比例后,將軸突導(dǎo)向因子3A分別加入至MG63,施旺細(xì)胞以及最佳比例共培養(yǎng)體系中,構(gòu)建梯度濃度(0,25,50,100 ng/m L)的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,培養(yǎng)1天,3天,5天后,觀察細(xì)胞活力并檢測(cè)細(xì)胞凋亡,以鑒定設(shè)定濃度下的軸突導(dǎo)向因子3A是否會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞產(chǎn)生促進(jìn)/抑制細(xì)胞增殖或細(xì)胞凋亡的作用。3.將軸突導(dǎo)向因子3A分別加入至MG63,施旺細(xì)胞以及最佳比例共培養(yǎng)體系中,構(gòu)建梯度濃度(0,25,5...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
引言
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 研究背景與現(xiàn)狀
    1.1 骨重塑與骨系細(xì)胞
        1.1.1 骨基本多細(xì)胞單元
        1.1.2 成骨細(xì)胞與骨重塑
        1.1.3 破骨細(xì)胞與骨重塑
        1.1.4 成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的相互調(diào)控與骨重塑
    1.2 神經(jīng)系統(tǒng)與骨重塑
        1.2.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)與骨重塑
        1.2.2 周圍神經(jīng)系統(tǒng)與骨重塑
    1.3 軸突導(dǎo)向因子與骨重塑
        1.3.1 軸突導(dǎo)向因子家族
        1.3.2 軸突導(dǎo)向因子與骨
        1.3.3 軸突導(dǎo)向因子 3A與骨重塑
    1.4 施旺細(xì)胞及神經(jīng)損傷修復(fù)
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及共培養(yǎng)體系的建立
            2.2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)條件
            2.2.1.2 共培養(yǎng)體系的建立
        2.2.2 Sema3A對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響與細(xì)胞毒性
            2.2.2.1 細(xì)胞增殖檢測(cè)
            2.2.2.2 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.2.2.3 細(xì)胞毒性測(cè)定
        2.2.3 Sema3A受體表達(dá)檢測(cè)
            2.2.3.1 總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.3.2 實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
            2.2.3.3 DNA凝膠電泳
        2.2.4 成骨基因表達(dá)檢測(cè)
        2.2.5 堿性磷酸酶檢測(cè)
        2.2.6 細(xì)胞外基質(zhì)礦化染色
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 共培養(yǎng)體系的建立
    3.2 Sema3A對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡的影響及其細(xì)胞毒性
    3.3 Sema3A受體表達(dá)
    3.4 成骨相關(guān)基因表達(dá)
    3.5 堿性磷酸酶檢測(cè)及細(xì)胞外基質(zhì)礦化染色
第四章 討論
    4.1 共培養(yǎng)體系建立及Sema3A對(duì)細(xì)胞增殖代謝的影響
    4.2 Sema3A受體表達(dá)
    4.3 Sema3A抑制MG63成骨分化
    4.4 Sema3A促進(jìn) 1：1 共培養(yǎng)成骨分化
    4.5 Sema3A在口腔治療的潛力
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：4056139