發(fā)布時間：2024-04-20 10:16

　　自2012年起,一種新型冠狀病毒——中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East Respiratory Syndrome coronavirus, MERS-CoV)持續(xù)在中東地區(qū)蔓延,已造成上百例感染病例,致死率高達50%。這是繼2003年爆發(fā)的嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus, SARS-CoV)、2004年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒NL63(Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63)以及2006年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒HKU1(Human Coronavirus HKU1, HCoV-HKU1)之后發(fā)現(xiàn)的又一個人類冠狀病毒家族的新成員,這表明冠狀病毒對人類健康的威脅始終存在,然而到目前為止,在世界范圍內(nèi)還沒有切實有效的能用于臨床治療MERS-CoV、SARS-CoV等冠狀病毒感染的疫苗或特效藥物。 冠狀病毒作為單股正鏈RNA病毒,編碼約16個非結構蛋白(non-structural proteins, nsps)介導自身的轉錄復制過程。這其中,nsp5(即主蛋白酶)參與將冠狀...

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
圖和附表清單
主要符號對照表
第一章 引言
    第一節(jié) 選題背景及意義
    第二節(jié) 冠狀病毒的研究簡史、分類和引發(fā)的疾病
        1.2.1 冠狀病毒的研究簡史
        1.2.2 冠狀病毒的分類
        1.2.4 冠狀病毒引起的疾病
        1.2.5 冠狀病毒引起的疾病的防治
    第三節(jié) 冠狀病毒的研究概況
        1.3.1 冠狀病毒的基因組結構
        1.3.2 冠狀病毒的生活周期
        1.3.3 冠狀病毒的復制轉錄機制
        1.3.4 冠狀病毒RTC的組成
    第四節(jié) MERS-CoV nsp5的研究意義
        1.4.1 冠狀病毒nsp5的研究意義
        1.4.2 冠狀病毒nsp5的研究現(xiàn)狀
        1.4.3 冠狀病毒nsp5抑制劑的研究現(xiàn)狀
        1.4.4 冠狀病毒nsp5及其抑制劑研究過程中的注意點
        1.4.5 MERS-CoV nsp5與N3復合物結構的研究意義
    第五節(jié) 本課題的研究內(nèi)容與意義
    第六節(jié) 論文結構安排
第二章 MERS-CoV nsp5與抑制劑N3的復合物晶體制備
    第一節(jié) MERS-CoV nsp5的基本信息
        2.1.1 MERS-CoV nsp5的基因序列
        2.1.2 MERS-CoV nsp5的生物化學信息
        2.1.3 MERS-CoV nsp5折疊情況預測
        2.1.4 MERS-CoV nsp5的同源蛋白分析
        2.1.5 小結
    第二節(jié) MERS-CoV nsp5基因的克隆與表達載體的優(yōu)化
        2.2.1 MERS-CoV nsp5基因的獲取
        2.2.2 表達系統(tǒng)的選擇
        2.2.3 表達載體的選擇
        2.2.4 重組質(zhì)粒的構建
    第三節(jié) MERS-CoV nsp5重組蛋白的表達與純化
        2.3.1 MERS-CoV nsp5重組蛋白的表達
        2.3.2 MERS-CoV nsp5重組蛋白的純化
    第四節(jié) MERS-CoV nsp5蛋白的晶體生長與初步數(shù)據(jù)收集
        2.4.1 蛋白質(zhì)結晶的基本原理
        2.4.2 MERS-CoV nsp5結晶條件的初步篩選和優(yōu)化嘗試
        2.4.3 MERS-CoV nsp5與N3復合物晶體的生長與優(yōu)化
第三章 MERS-CoV nsp5-N3復合物的結構功能研究
    第一節(jié) 結構解析原理簡介
        3.1.1 相位問題的存在
        3.1.2 常用結構解析方法簡介
    第二節(jié) MERS-CoV nsp5-N3復合物的結構解析
        3.2.1 數(shù)據(jù)收集和處理
        3.2.2 結構解析過程
    第三節(jié) MERS-CoV nsp5與N3復合物的結構分析
        3.3.1 MERS-CoV nsp5與N3的總體結構
        3.3.2 MERS-CoV nsp5與N3的結合情況分析
    第四節(jié) N3分子抑制MERS-CoV nsp5的酶活驗證實驗
        3.4.1 MERS-CoV nsp5的活性檢測原理
        3.4.2 MERS-CoV nsp5的酶活實驗方法
        3.4.3 N3對MERS-CoV nsp5的抑制活性
        3.4.4 小結
第四章 SARS-CoV nsp13的晶體學研究
    第一節(jié) SARS-CoV nsp13的研究進展及意義
        4.1.1 SARS-CoV nsp13的功能研究進展
        4.1.2 SARS-CoV nsp13結構生物學研究的意義
    第二節(jié) SARS-CoV nsp13重組質(zhì)粒的構建
        4.2.1 SARS-CoV nsp13基本信息分析
        4.2.2 SARS-CoV nsp13表達載體的選擇
        4.2.3 SARS-CoV nsp13表達載體的構建
    第三節(jié) pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表達、純化與結晶嘗試
        4.3.1 pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表達與純化
        4.3.2 pGEX-6p-1-nsp13野生型和突變體蛋白結晶嘗試
    第四節(jié) pET-28a-nsp13克隆的蛋白表達、純化與結晶
        4.4.1 pET-28a-nsp13克隆的蛋白表達與純化
        4.4.2 pET-28a-nsp13蛋白的結晶
    第五節(jié) pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表達、純化與結晶
        4.5.1 pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表達與純化
        4.5.2 pET-28a'-nsp13蛋白的結晶
    第六節(jié) pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白晶體制備與數(shù)據(jù)收集
        4.6.1 pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白表達與純化
        4.6.2 pET-28a-6×His-nsp13蛋白的結晶
        4.6.3 pET-28a-6×His-nsp13蛋白質(zhì)晶體的數(shù)據(jù)收集和處理
第五章 結論
附錄A MERS-CoV nsp5的編碼堿基與氨基酸序列
附錄B SARS-CoV nsp13的編碼堿基與氨基酸序列
參考文獻
致謝
個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果



本文編號：3959266