背景和目的：心肌細(xì)胞(Cardiomyocytes,CMs)凋亡是多種心血管疾病的重要病理生理機(jī)制之一。microRNA是真核生物中一種長度約為22個(gè)核苷酸大小、參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼單鏈小分子RNA，可特異性識別靶信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的3’-非編碼區(qū)(3’-UTR)并與之結(jié)合，從而降解靶mRNA、抑制翻譯，發(fā)揮其對基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控，調(diào)節(jié)重要的細(xì)胞活動(dòng)，參與眾多疾病的病理生理過程。在眾多微小RNA(microRNA,miRNA)中，微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)不僅在心血管系統(tǒng)中呈高表達(dá)，而且還在許多心血管疾病如心肌梗死、心力衰竭、心臟肥大上呈差異性表達(dá)，參與各種心血管疾病的病理生理分子機(jī)制。迄今為止，研究發(fā)現(xiàn)miR-21介導(dǎo)的心血管效應(yīng)的靶基因有四個(gè)，分別是程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)，磷酸脂酶-張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)，Sprouty1(SPRY1)和Sprouty2(S...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 器材的滅菌、去RNA酶處理
        2.2.2 相關(guān)液體的配制
        2.2.3 乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
        2.2.4 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.6 pGC- FU-microRNA-21-GFP慢病毒載體轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞
        2.2.7 利用 TNF-α建立心肌細(xì)胞凋亡模型
        2.2.8 心肌細(xì)胞總RNA提取及檢測總RNA的濃度及純度
        2.2.9 qRT-PCR測定各組心肌細(xì)胞中microRNA-21及PTEN mRNA的表達(dá)
        2.2.10 心肌細(xì)胞總蛋白的提取及測定蛋白濃度
        2.2.11 Westernblot法檢測心肌細(xì)胞的PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
        2.2.12 心肌細(xì)胞增值及凋亡的檢測
        2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 乳鼠心肌細(xì)胞的生長特點(diǎn)及免疫鑒定結(jié)果
    3.2 構(gòu)建 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體并鑒定
    3.3 PGC-FU- microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入心肌細(xì)胞的結(jié)果
    3.4 qRT-PCR法檢測各組心肌細(xì)胞中 microRNA-21和PTEN mRNA的表達(dá)及Westernblot法檢測PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
        3.4.1 qRT-PCR法檢測各組心肌細(xì)胞中microRNA-21和PTEN mRNA的表達(dá)
        3.4.2 Westernblot法檢測PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
    3.5 Hoechst33342/PI及Annexin V-FITC法檢測各組心肌細(xì)胞凋亡率
        3.5.1 Annexin V-FITC法檢測各組心肌細(xì)胞凋亡率
        3.5.2 Hoechst33342/PI法檢測各組心肌細(xì)胞凋亡率
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3908234