發(fā)布時(shí)間：2020-12-12 06:22

　　研究背景急性移植排斥是導(dǎo)致移植器官或組織功能喪失及衰竭的主要原因之一。急性排斥反應(yīng)主要是以T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主。作為對外周T細(xì)胞分化發(fā)育以及功能都很重要的Notch信號(hào)途徑,具有潛在的調(diào)節(jié)急性移植排斥反應(yīng)的可能。但是其再同種異基因免疫應(yīng)答中的作用,目前還不甚清楚。方法及結(jié)果:通過應(yīng)用同種異基因移植模型,即皮片移植和異位頸部心臟移植,以及T細(xì)胞中特異性RBP-J缺失小鼠,本實(shí)驗(yàn)研究了Notch/ RBP-J通路在體內(nèi)同種異基因應(yīng)答中的作用。同野生型C57BL/6小鼠相比,T細(xì)胞中特異性剔除轉(zhuǎn)錄因子RBP-J的轉(zhuǎn)基因小鼠所表現(xiàn)出的急性排斥反應(yīng)明顯加劇,其移植物存活時(shí)間及存活率也相對降低。移植物存活的降低與RBP-J缺失的轉(zhuǎn)基因小鼠受體中抗原特異性T細(xì)胞增殖的增強(qiáng),以及輔助性Th1、Th2、Th17細(xì)胞數(shù)目的增多有關(guān)。此外,雖然條件性基因剔除小鼠受體中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比率未發(fā)生明顯變化,但是在體外實(shí)驗(yàn)中,其抑制效應(yīng)性T細(xì)胞（Teff）免疫應(yīng)答的作用有一定減弱。結(jié)論:這些研究結(jié)果,提示Notch/... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
    T細(xì)胞和移植排斥反應(yīng)
    Notch 信號(hào)途徑
    Notch 對造血干細(xì)胞發(fā)育和維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)作用
    Notch與T細(xì)胞發(fā)育
    Notch對外周T細(xì)胞的分化和功能的影響
    Notch信號(hào)與Th1細(xì)胞
    Notch與Th2細(xì)胞
    Notch信號(hào)和Th17細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞
    小結(jié)
實(shí)驗(yàn)一 在同種異體移植免疫中外周T細(xì)胞NOTCH信號(hào)分析
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑
        1.3 主要儀器
        1.4.Real-time PCR引物
    2 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2 皮片移·植
        2.3 分離受體小鼠脾臟T 淋巴細(xì)胞
        2.4 Q-PCR 檢測Notch 信號(hào)上下游分子
    3 結(jié)果
    4 討論
實(shí)驗(yàn)二 RBP-J 條件性基因小鼠的培育鑒定及其外周淋巴細(xì)胞分析
    A. 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑
        1.3 儀器
        1.4 引物
    2. 方法
        2.1 培育并鑒定小鼠基因型
        2.2 外周淋巴細(xì)胞分析
    3. 結(jié)果
        3.1 小鼠基因型鑒定結(jié)果
        3.2 外周淋巴細(xì)胞分析
    4. 討論
實(shí)驗(yàn)三 受體條件性阻斷T 細(xì)胞NOTCH 信號(hào)對移植物及T 淋巴細(xì)·胞
    1. 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2. 方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2 皮片移植
        2.3 心臟移植
        2.4 受體外周T 淋巴細(xì)胞亞群增殖的檢測
        2.5 外周血液中Th 細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)監(jiān)測
        2.6 脾臟及淋巴T 細(xì)胞分析
        2.7 胞內(nèi)細(xì)胞因子染色
        2.8 HE 染色
    3. 結(jié)果
        3.1 存活時(shí)間
        3.2 移植物病理切片HE 染色
        3.3 脾臟和引流淋巴結(jié)細(xì)胞分析
        3.4 BrdU檢測細(xì)胞增殖情況
        3.5 輔助性T 細(xì)胞（Th）檢測
    4. 討論
實(shí)驗(yàn)四 體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)分析NOTCH 信號(hào)對T 細(xì)胞增殖及TREG 功能影響
    1. 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2. 方法
        2.1 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLR）
            2.1.1 stimulator 細(xì)胞制備
            2.1.2 效應(yīng)T 細(xì)胞獲取
            2.1.3 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞分離
            2.1.4 效應(yīng)性T細(xì)胞CFSE標(biāo)記
            2.1.5 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 體外增殖實(shí)驗(yàn)
    3. 結(jié)果
        3.1 Tregs 的抑制功能實(shí)驗(yàn)
        3.2 Teff 的增殖實(shí)驗(yàn)
    4. 討論
小結(jié)
展望
參考文獻(xiàn)
附錄
個(gè)人簡歷和研究成果
致謝



本文編號(hào)：2912021