發(fā)布時間：2020-12-12 01:33

　　目的:制備并鑒定特異性抗人N端腦鈉肽前體（NT-proBNP）抗原表位的單克隆抗體。方法:通過Bepipred在線表位預測方法和Epitope Prediction System軟件預測人NT-proBNP B細胞抗原表位,綜合2種預測結果對比優(yōu)化選取合適的2個表位肽段P1和P2,偶聯(lián)KLH為免疫原,免疫BALB/c小鼠,選擇血清效價較高的小鼠脾細胞與SP2/0細胞融合;經(jīng)HAT篩選,間接ELISA法檢測和有限稀釋法進行亞克隆,得到陽性雜交瘤細胞株;采用體內誘生法制備腹水并用Protein G柱純化抗體;經(jīng)鑒定,對特異性最好的2株進行純度、效價、亞型及親和力的分析。結果:通過P2-KLH免疫獲得的陽性雜交瘤細胞株1F9和P1-KLH免疫獲得的陽性雜交瘤細胞株4H2能穩(wěn)定分泌抗NT-proBNP單克隆抗體,純度較高,能與NT-proBNP重組蛋白特異性結合,效價分別達到4×104、4×105,抗體亞型均為IgG1,相對親和力常數(shù)分別為1.14×107和1.6×107L/mol。結論:獲得2株特性良好的單克隆抗體,可為下一步研制NT-proBNP檢測試劑盒提供原材料。 

【文章來源】：生物技術通訊. 2019年06期 第762-767頁

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Bepipred預測表位結果

Epitope Prediction System預測表位結果

間接ELISA法檢測P1-KLH、P2-KLH免疫的小鼠血清效價分別達12 800、6400。通過P1-KLH完全抗原免疫獲得6株可分泌NT-proBNP抗體的細胞株2D5、2C8、2E1、4B9、4D3、4H2；通過P2-KLH完全抗原免疫獲得2株陽性雜交瘤細胞株1F9、5B5。對抗體進行鑒定，從P2和P1表位肽獲得的抗體中選擇特異性最好的1F9和4H2分別進行特性分析。2.4 單克隆抗體特性鑒定

【參考文獻】：
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本文編號：2911606