活化的Treg細胞對NKT細胞遷移的調節(jié)作用
發(fā)布時間：2020-12-08 20:02
目的探討Treg細胞活化后對NKT細胞遷移的調控作用。方法分離純化小鼠脾臟Treg細胞及NKT細胞后,通過病毒感染的方式制備Foxp3修飾的Treg細胞;驗證Treg細胞的活化情況。體外共培養(yǎng)活化的Treg細胞和NKT細胞,流式細胞儀檢測NKT的數量; RT-PCR及ELISA分析NKT細胞胞內因子的分泌水平（IL-4、IFN-γ）。制備卵清白蛋白（OVA）致敏哮喘小鼠模型,體內觀察Foxp3修飾的Treg細胞對NKT細胞體內遷移的影響。結果經Foxp3修飾后的Treg細胞（Le-Foxp3組）中Foxp3的表達明顯增加; CFSE標記法檢測顯示Le-Foxp3組細胞可顯著抑制自體CD4+CD25-T效應T細胞的增殖;同時ELISA檢測結果顯示相較于空載體轉染組（Le-scr組）,Le-Foxp3組細胞上清液中IL-10及TGF-β的水平顯著升高。經transwell培養(yǎng)板體外共培養(yǎng)Treg細胞和NKT細胞后,流式細胞儀檢測下室中NKT細胞的數目結果顯示Le-Foxp3組為（221.15±79.36）,Le-scr組為（649.38±153.97）;同時IL-4及IFN-γ的水平顯著下...
【文章來源】：中華肺部疾病雜志(電子版). 2019年05期 第601-605頁
【文章頁數】：5 頁
【部分圖文】：
表達Foxp3對Treg細胞功能的影響;注:A:CFSE標記法檢測Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細胞因子IL-10和TGF-β的水平
細胞由Le-scr組的649．38±153．97減少至221．15±79．36(P＜0．05)。ＲT-PCＲ和ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-4和IFN-γ的水平，結果顯示(圖3):相較于Le-scr組，Le-Foxp3組共培養(yǎng)體系上清液中IL-4和IFN-γ的水平顯著降低，差異具有統計學意義。圖2表達Foxp3對Treg細胞功能的影響;注:A:CFSE標記法檢測Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細胞因子IL-10和TGF-β的水平圖3ＲT-PCＲ(A)和ELISA(B)檢測表達Foxp3的Treg細胞對NKT細胞胞內因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響本實驗進一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達Foxp3后Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響。結果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數量顯著升高。因實驗過程中發(fā)現，OVA組和OVA+Le-scr組結果不具有顯著差異，故結果中未顯示OVA+Le-scr組數據。圖4OVA哮喘模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響討論本文首先檢測了體外構建的Foxp3病毒載體的轉染效率，結果顯示Treg細胞中轉入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達顯著升高，證明所構建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細胞的特征標志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達的Foxp3與Treg細胞免疫抑制功能之間有良好的相關性［13-14］。本文進一步檢測了直接通過病毒載體表達Foxp3對Treg細胞功能的影響。結果?
?Treg細胞對NKT細胞胞內因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響本實驗進一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達Foxp3后Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響。結果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數量顯著升高。因實驗過程中發(fā)現，OVA組和OVA+Le-scr組結果不具有顯著差異，故結果中未顯示OVA+Le-scr組數據。圖4OVA哮喘模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響討論本文首先檢測了體外構建的Foxp3病毒載體的轉染效率，結果顯示Treg細胞中轉入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達顯著升高，證明所構建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細胞的特征標志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達的Foxp3與Treg細胞免疫抑制功能之間有良好的相關性［13-14］。本文進一步檢測了直接通過病毒載體表達Foxp3對Treg細胞功能的影響。結果發(fā)現表達Foxp3可提高Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制率，同時促進Treg細胞分泌細胞因子IL-10和TGF-β。結果提示通過體外構建Foxp3表達載體可直接活化Treg細胞，促進其功能的發(fā)揮。早期有研究提示Treg細胞及NKT細胞在哮喘發(fā)病過程中存在相互調控作用［10-11］。故而本實驗通過體外共培養(yǎng)Treg細胞和NKT細胞，研究Treg細胞對NKT細胞功能的影響。Transwell共培養(yǎng)的結果顯示，轉染Foxp3后，遷移到下室的NKT細胞數量明顯減少，提示活化的Treg細胞可抑制NK
【參考文獻】：
期刊論文
[1]NKT細胞與調節(jié)性T細胞在免疫調節(jié)中相互作用的研究進展[J]. 何青,聶漢祥,楊巧玉,劉琳琳. 免疫學雜志. 2016(06)
[2]特異性免疫治療對屋塵螨致敏哮喘小鼠NKT細胞的影響[J]. 盧燕鳴,曹蘭芳,李琛,趙瑜,陳偉,張文明. 現代生物醫(yī)學進展. 2012(07)
[3]支氣管哮喘兒童急性發(fā)作期誘導痰液T細胞亞群及自然殺傷T細胞的變化[J]. 惠郁,王曉明,周韻嬌. 中華哮喘雜志(電子版). 2010(01)
[4]支氣管哮喘患兒外周血自然殺傷T淋巴細胞的變化及臨床意義[J]. 盧燕鳴,曹蘭芳,薛海燕,李亞琴,李琛,趙瑜. 中華實用兒科臨床雜志. 2013 (10)
本文編號：2905607
【文章來源】：中華肺部疾病雜志(電子版). 2019年05期 第601-605頁
【文章頁數】：5 頁
【部分圖文】：
表達Foxp3對Treg細胞功能的影響;注:A:CFSE標記法檢測Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細胞因子IL-10和TGF-β的水平
細胞由Le-scr組的649．38±153．97減少至221．15±79．36(P＜0．05)。ＲT-PCＲ和ELISA檢測培養(yǎng)上清中IL-4和IFN-γ的水平，結果顯示(圖3):相較于Le-scr組，Le-Foxp3組共培養(yǎng)體系上清液中IL-4和IFN-γ的水平顯著降低，差異具有統計學意義。圖2表達Foxp3對Treg細胞功能的影響;注:A:CFSE標記法檢測Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制作用;B:ELISA檢測細胞因子IL-10和TGF-β的水平圖3ＲT-PCＲ(A)和ELISA(B)檢測表達Foxp3的Treg細胞對NKT細胞胞內因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響本實驗進一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達Foxp3后Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響。結果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數量顯著升高。因實驗過程中發(fā)現，OVA組和OVA+Le-scr組結果不具有顯著差異，故結果中未顯示OVA+Le-scr組數據。圖4OVA哮喘模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響討論本文首先檢測了體外構建的Foxp3病毒載體的轉染效率，結果顯示Treg細胞中轉入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達顯著升高，證明所構建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細胞的特征標志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達的Foxp3與Treg細胞免疫抑制功能之間有良好的相關性［13-14］。本文進一步檢測了直接通過病毒載體表達Foxp3對Treg細胞功能的影響。結果?
?Treg細胞對NKT細胞胞內因子IL-4和IFN-γ分泌的影響四、OVA致哮喘小鼠模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響本實驗進一步引入OVA致哮喘小鼠模型，檢測哮喘發(fā)病過程中表達Foxp3后Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響。結果顯示(圖4)，相較于OVA組，OVA+Le-Foxp3組小鼠肺組織中NKT的數量顯著降低，而外周血及脾臟中NKT的數量顯著升高。因實驗過程中發(fā)現，OVA組和OVA+Le-scr組結果不具有顯著差異，故結果中未顯示OVA+Le-scr組數據。圖4OVA哮喘模型中Treg細胞對NKT細胞體內分布的影響討論本文首先檢測了體外構建的Foxp3病毒載體的轉染效率，結果顯示Treg細胞中轉入Foxp3病毒載體后Foxp3的表達顯著升高，證明所構建的載體可用于后續(xù)實驗。Foxp3是Treg細胞的特征標志，也是其最重要的功能分子，大量研究表明高表達的Foxp3與Treg細胞免疫抑制功能之間有良好的相關性［13-14］。本文進一步檢測了直接通過病毒載體表達Foxp3對Treg細胞功能的影響。結果發(fā)現表達Foxp3可提高Treg細胞對Teff細胞的增殖抑制率，同時促進Treg細胞分泌細胞因子IL-10和TGF-β。結果提示通過體外構建Foxp3表達載體可直接活化Treg細胞，促進其功能的發(fā)揮。早期有研究提示Treg細胞及NKT細胞在哮喘發(fā)病過程中存在相互調控作用［10-11］。故而本實驗通過體外共培養(yǎng)Treg細胞和NKT細胞，研究Treg細胞對NKT細胞功能的影響。Transwell共培養(yǎng)的結果顯示，轉染Foxp3后，遷移到下室的NKT細胞數量明顯減少，提示活化的Treg細胞可抑制NK
【參考文獻】：
期刊論文
[1]NKT細胞與調節(jié)性T細胞在免疫調節(jié)中相互作用的研究進展[J]. 何青,聶漢祥,楊巧玉,劉琳琳. 免疫學雜志. 2016(06)
[2]特異性免疫治療對屋塵螨致敏哮喘小鼠NKT細胞的影響[J]. 盧燕鳴,曹蘭芳,李琛,趙瑜,陳偉,張文明. 現代生物醫(yī)學進展. 2012(07)
[3]支氣管哮喘兒童急性發(fā)作期誘導痰液T細胞亞群及自然殺傷T細胞的變化[J]. 惠郁,王曉明,周韻嬌. 中華哮喘雜志(電子版). 2010(01)
[4]支氣管哮喘患兒外周血自然殺傷T淋巴細胞的變化及臨床意義[J]. 盧燕鳴,曹蘭芳,薛海燕,李亞琴,李琛,趙瑜. 中華實用兒科臨床雜志. 2013 (10)
本文編號：2905607
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