發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 19:38

　　目的評(píng)估自主研發(fā)培養(yǎng)基QS作為首選培養(yǎng)基用于凍干人用狂犬病疫苗（雞胚成纖維細(xì)胞）生產(chǎn)過程的可行性。方法分別制備基于自主研發(fā)培養(yǎng)基QS和其他3種商業(yè)化培養(yǎng)基（X1、X2、X3）的雞胚成纖維細(xì)胞懸液,觀察和比較細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特性;以Flury HEP株接種雞胚成纖維細(xì)胞（MOI=0.003）,分別通過直接免疫熒光法、蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）比較不同培養(yǎng)基條件下收獲液中病毒滴度和G蛋白含量。結(jié)果在細(xì)胞濃度1×10⁶個(gè)/mL條件下,4種培養(yǎng)基培養(yǎng)的雞胚成纖維細(xì)胞在形態(tài)上均無(wú)顯著區(qū)別;但是自主研發(fā)培養(yǎng)基QS和X2的病毒收獲液的G蛋白含量在第4天時(shí)分別為0.66 IU/mL和0.63 IU/mL,高于X1的0.5 IU/mL和X3的0.3 IU/mL。在第6天時(shí)分別為0.92 IU/mL和0.88 IU/mL,高于X1的0.64 IU/mL和X3的0.52 IU/mL,說明基于自主研發(fā)培養(yǎng)基QS和X2的病毒收獲液在G蛋白含量方面具有明顯優(yōu)勢(shì)。結(jié)論自主研... 

【文章來源】：微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2020年01期 第56-62頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

4種不同培養(yǎng)基在兩種細(xì)胞濃度下不同時(shí)間細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

Flury HEP株在4種培養(yǎng)基條件下的多步生長(zhǎng)曲線能夠客觀的反映4種環(huán)境中病毒的生長(zhǎng)特性。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4種培養(yǎng)基病毒滴度均在種毒后3 d達(dá)到峰值,而后呈緩慢下降趨勢(shì)直到6 d。種毒后3 d,QS和X2收獲液中RABV 滴度含量均為8.17 lg CCID50/mL,略高于X1的7.72 lg CCID50/mL和X3的7.83 lg CCID50/mL,見圖2。2.3 不同培養(yǎng)基條件下雞胚成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察

病毒感染1～3 d時(shí),各培養(yǎng)基條件下的細(xì)胞均無(wú)顯著病變和脫落;隨著時(shí)間的推移,細(xì)胞脫落增加,細(xì)胞的纖維收縮明顯,直到感染后第6 天,4種培養(yǎng)基條件下種毒細(xì)胞的狀態(tài)都沒有明顯區(qū)別,見圖4。圖4 4種培養(yǎng)基在種毒后第6天細(xì)胞脫落情況鏡檢

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞胚細(xì)胞培養(yǎng)狂犬病病毒工藝的優(yōu)化[J]. 郭采平,王春華,周蘭貞,劉永娣,羅姍,張劍平,周維.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2015(06)
[2]德國(guó)產(chǎn)和印度產(chǎn)人用狂犬病疫苗(雞胚細(xì)胞)瑞必補(bǔ)爾~的臨床安全性和免疫原性研究[J]. 朱鳳才,伍傳宏,孟繁岳,晉梅,閆萌.  中國(guó)疫苗和免疫. 2009(05)
[3]狂犬病毒鼠腦復(fù)壯后的典型形態(tài)恢復(fù)及感染細(xì)胞內(nèi)的形態(tài)發(fā)生學(xué)[J]. 韓小虎,鄒嘯環(huán),江禹,宣華,涂長(zhǎng)春.  微生物學(xué)報(bào). 2008(06)
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本文編號(hào)：2903795