發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 20:30

　　 背景：人類白細(xì)胞抗原I類分子HLA-G在體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)具有通過多種機(jī)制聯(lián)合作用致免疫耐受的特性,臨床上在器官移植術(shù)后患者病理標(biāo)本或者血清中HLA-G水平的升高與急性和慢性排斥的發(fā)生率的降低程度相關(guān)。國(guó)內(nèi)學(xué)者楊寧的研究表明,腺病毒HLA-G1轉(zhuǎn)染SD至Wistar大鼠受體存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。我們擬用慢病毒HLA-G轉(zhuǎn)染SD至Wistar大鼠保證持久而穩(wěn)定的表達(dá)HLA-G,測(cè)試作為干預(yù)因素對(duì)抗急性排斥的效果。既往的研究表明,靶細(xì)胞表達(dá)HLA-G能夠通過與NK細(xì)胞上的抑制性受體的結(jié)合,抑制細(xì)胞毒性顆粒的靶向釋放,也能夠通過含HLA-G的細(xì)胞膜片轉(zhuǎn)移到NK細(xì)胞,使得暫時(shí)獲得HLA-G的NK細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐种菩约?xì)胞抑制其他NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷。 方法：我們首先建立HLA-G慢病毒體系和SD至Wistar大鼠腎移植排斥反應(yīng)模型。腎移植模型的建立方法是腎動(dòng)靜脈原位吻合,輸尿管膀胱吻合,另外一側(cè)腎臟切除。在腎動(dòng)脈恢復(fù)血供前30分給予0.5ml含有107pfu的HLA-G慢病毒。我們?cè)O(shè)計(jì)的陽性對(duì)照組術(shù)后常規(guī)使用FK506抗排斥,陰性對(duì)照組以空白病毒轉(zhuǎn)染。術(shù)后第7天檢測(cè)受體大鼠的血清BUN和Cr值,取各組移植腎做病理組織學(xué)檢查,并測(cè)定HLA-G的表達(dá)水平。為了弄清HLA-G抑制NK細(xì)胞的殺傷作用在大鼠和人類間的作用方式和效應(yīng)水平的差異,我們采用大鼠內(nèi)皮細(xì)胞和人類血管內(nèi)皮細(xì)胞為靶細(xì)胞,在未轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒和轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒后,以大鼠NK細(xì)胞和人類的NK細(xì)胞作為攻擊細(xì)胞,測(cè)定四種組合情況下,其殺傷率的差異。 結(jié)果：輸注HLA-G慢病毒對(duì)于術(shù)后受體大鼠的生存期和改善腎功能的BUN與Cr指標(biāo)相對(duì)于空白病毒轉(zhuǎn)染的對(duì)照組沒有任何差別,但是明顯短于使用FK506的抗排斥的對(duì)照組�；�于Banff標(biāo)準(zhǔn)的病理組織學(xué)檢查顯示,術(shù)后7天在實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組存在嚴(yán)重的排斥反應(yīng),而使用FK506抗排斥的陽性對(duì)照組只有輕度排斥反應(yīng)。人NK細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞人內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒,殺傷率從74.8±14.1%顯著降低至21.2±4.7%(p0.05),而鼠NK細(xì)胞攻擊人內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G'漫病毒,殺傷率無明顯差別,從67.7±11.6%到65.8±10.9%(p0.05)。人NK細(xì)胞攻擊靶細(xì)胞大鼠內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLA-G慢病毒,殺傷率從85.3±16.3%降低至31.7±7.8%,而鼠NK細(xì)胞攻擊鼠內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染]HLA-G慢病毒,殺傷率無明顯差別,從25.8±6.5%到26.0±5.9%。 結(jié)論：我們的實(shí)驗(yàn)研究表明在SD至Wistar大鼠腎移植模型中表達(dá)HLA-G不能延長(zhǎng)受體大鼠的生存期或者改善移植腎的功能。HLA-G的有效發(fā)揮功能以攻擊細(xì)胞上有相應(yīng)的特異性受體為前提,人的免疫細(xì)胞上表達(dá)有相應(yīng)受體,而大鼠的免疫細(xì)胞上無相應(yīng)特異性受體或者這種對(duì)應(yīng)的受體有決定性的種屬差別。圖片19幅,表格10個(gè),參考文獻(xiàn)73篇。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

r條件（連接）：溫度為4。C，過夜保存。化連接好的產(chǎn)物，至DH5(X中。具體步驟詳見附錄。定。oRI、BamHI酶切鑒定結(jié)果如圖3-1,由圖可知，該克隆正確。

博士學(xué)位論文 3 HLA-G誘導(dǎo)大鼠腎移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究具體報(bào)告見下圖："pLVX-IRES-ZsGreen 1-HL AG-seq ￡ ab 1 ”。

移植賢修整前后圖
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉皎林;周洪瀾;王醫(yī)術(shù);臧崇森;王金國(guó);王遠(yuǎn)濤;;改良的血管端端吻合法建立大鼠原位腎移植模型[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2012年02期

本文編號(hào)：2891961