發(fā)布時間：2020-11-17 10:14

　　 目的:研究固醇輔酶A去飽和酶1(SCD1)過表達后對骨髓間質(zhì)干細胞(BM-MSCs)成骨分化作用的影響,并利用基因芯片技術(shù)分析基因表達譜的變化。方法:利用已構(gòu)建成功的SCD1慢病毒轉(zhuǎn)染BM-MSCs,采用RT-PCR及C14技術(shù)檢測SCD1在BM-MSCs中過表達情況及其活性。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)BM-MSCs后,采用Western blot和茜素紅染色技術(shù)檢測骨鈣素(OC)等相關(guān)成骨指標,進一步運用全基因芯片檢測過表達SCD1對BM-MSCs成骨分化表達譜的影響。結(jié)果:SCD1在BM-MSCs中成功過表達,過表達組SCD1活性明顯高于對照組。成骨誘導(dǎo)7天、14天時,過表達組中的堿性磷酸酶(APL)活性和骨鈣素水平均明顯高于對照組(P0.05)。成骨誘導(dǎo)一周、兩周時,過表達組的堿性磷酸酶染色和茜素紅染色均多于對照組。基因表達芯片的結(jié)果顯示,過表達SCD1改變骨髓間質(zhì)干細胞表達譜,檢測出差異基因2896個�；�因通路分析提示干擾素通路為表達差異最顯著通路(P0.05)。結(jié)論:過表達SCD1可以促進BM-MSCs的成骨分化,可能通過作用于干擾素通路影響成骨分化功能。這一發(fā)現(xiàn)可能為骨折愈合提供重要的思路和潛在治療策略,值得深入研究。
【部分圖文】：

熒光染色結(jié)果（圖1A,B）和流式細胞儀分析結(jié)果(圖1C)表明SCD1慢病毒轉(zhuǎn)染率達94.0%，有效。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，與空載組相比，BM-MSCs在轉(zhuǎn)染SCD1慢病毒后，其SCD1 m RNA表達明顯上調(diào)（表2,P<0.05）。C14硬脂酸/C14軟脂酸轉(zhuǎn)化檢測表明，較于空載組，成功轉(zhuǎn)染的SCD1活性明顯增高（表2,P<0.05）。

我們運用IPA分析差異基因在疾病與功能分類中的富集情況，以深入研究SCD1過表達對骨髓間充質(zhì)干細胞基因表達的影響。分析結(jié)果表明，這些差異表達基因主要參與了細胞分化的生物學(xué)功能（表4）。圖3 茜紅素染色結(jié)果(過表達組：B D,對照組：A C)

茜紅素染色結(jié)果(過表達組：B D,對照組：A C)
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本文編號：2887387