發(fā)布時(shí)間：2020-11-12 23:07

　　 背景和目的:傳統(tǒng)手術(shù)及放化療等治療手段對舌癌患者帶來的致殘性和全身毒副反應(yīng)等尚不能達(dá)到理想的治療效果。本實(shí)驗(yàn)的目的在于研究中藥吳茱萸堿聯(lián)合西藥吉西他濱對舌鱗癌裸鼠移植瘤生長的影響,初步探討兩藥聯(lián)合作用的機(jī)制,并分析用藥的安全性。方法:通過皮下接種Cal-27腫瘤細(xì)胞建立人舌鱗癌荷瘤裸鼠模型。建模成功后采用灌胃及腹腔注射法給予吳茱萸堿、吉西他濱單獨(dú)及聯(lián)合對荷瘤裸鼠進(jìn)行藥物干預(yù)。觀察中藥吳茱萸堿聯(lián)合西藥吉西他濱對Cal-27舌鱗癌荷瘤裸鼠一般狀態(tài)的影響;監(jiān)測裸鼠體質(zhì)量、瘤體體積、進(jìn)食量、進(jìn)水量,及對外界刺激的應(yīng)激反應(yīng)變化;稱量瘤體重量并計(jì)算抑瘤率;HE染色法觀察移植瘤組織中腫瘤細(xì)胞形態(tài)變化;肉眼觀察裸鼠心、肝、肺、脾、腎臟組織的腫瘤轉(zhuǎn)移情況;HE染色法觀察各臟器形態(tài)變化;透射電鏡下觀察移植瘤組織中腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變;Western blot定量分析移植瘤組織中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax、Bcl-2以及Bcl-xl的蛋白表達(dá),并計(jì)算Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值;免疫組化法定性分析移植瘤組織中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax以及Bcl-2的蛋白表達(dá)。結(jié)果:聯(lián)合組的瘤體生長速度顯著慢于模型對照組、吳茱萸堿組、吉西他濱組。聯(lián)合組瘤體質(zhì)量明顯比模型對照組、吳茱萸堿組、吉西他濱組要小。四組中各臟器未發(fā)現(xiàn)可疑轉(zhuǎn)移灶。聯(lián)合組病理性核分裂像的數(shù)目明顯少于模型對照組、吳茱萸堿組及吉西他濱組。模型對照組腫瘤細(xì)胞體積大,核膜清晰、完整,呈現(xiàn)惡性腫瘤特征,藥物干預(yù)組的腫瘤細(xì)胞體積減小,染色質(zhì)發(fā)生凝集、邊聚,出現(xiàn)凋亡形態(tài)改變,聯(lián)合組凋亡表現(xiàn)尤為典型。聯(lián)合給藥組較模型對照組及單藥組其裸鼠進(jìn)食量、進(jìn)水量及應(yīng)激反應(yīng)下降要慢。各組裸小鼠的心、肝、肺、脾、腎組織結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯病理性改變。藥物干預(yù)組都可不同程度的降低Bcl-2蛋白的表達(dá),升高Bax蛋白的表達(dá),表現(xiàn)為Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax的比值減小,其中聯(lián)合組凋亡率減小最為顯著。與模型對照組相比,吳茱萸堿組和聯(lián)合組均能顯著抑制NF-κB/p65的表達(dá),促進(jìn)Ik-βα的表達(dá)。結(jié)論:吳茱萸堿及吉西他濱均具有抗舌鱗狀細(xì)胞癌生長作用,聯(lián)合應(yīng)用時(shí)具有協(xié)同抑制作用,其作用機(jī)制可能是吳茱萸堿通過抑制舌鱗癌組織中NF-κB信號通路的激活、抑制Bcl-2/Bcl-xl的表達(dá),促進(jìn)Bax的表達(dá),從而降低Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值,最終增強(qiáng)吉西他濱對舌鱗癌的促凋亡作用。此外,在實(shí)驗(yàn)期間,兩者聯(lián)合用藥未對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生明顯的毒副作用,說明用藥方法及劑量均在安全范圍內(nèi)。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.86;R-332
【部分圖文】：

一種新型藥物-縮合-雙環(huán)4,6-取代的1,2,4-三唑并-1,3,4-噻二唑衍生物（CBTT）可以阻斷（通過時(shí)間依賴性方式）TNFα誘導(dǎo)的上游IκBα激酶的磷酸化，最終抑制NF-κB信號通路的活化和核易位。1.5 選題依據(jù)與思路我們課題組的前期體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)Evo聯(lián)合放射線能夠抑制舌鱗癌細(xì)胞（Tca-8113）及荷瘤裸鼠移植瘤的生長[57,58]。為求進(jìn)一步了解Evo聯(lián)合治療的作用療效，本研究首次將中藥Evo聯(lián)合西藥Gem對人舌鱗癌裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察中藥Evo聯(lián)合西藥Gem對荷瘤裸鼠移植瘤生長的影響，并探討聯(lián)合治療可能的作用機(jī)制，為Evo聯(lián)合化療藥物在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)，為TSCC的防治提供新的思路。1.6 技術(shù)路線

魎?醵勻松嗔郯┖閃雎閌竽Ｐ偷囊種譜饔眉捌浠?蒲芯?14實(shí)驗(yàn)分組、藥物干預(yù)過程、給藥濃度、劑量、方式及頻次見表2-5、圖2-1、圖2-2。腹腔注射（圖2-2A）方法為：首先用1 mL注射器吸取適量生理鹽水或吉西他濱溶液，排去氣泡，用左手拇指及食指固定小鼠頭部，小指固定尾部，腹部向上，使其頭呈低位，尾高位，用碘伏棉球擦拭消毒注射區(qū)域，右手持注射器于腹白線稍右側(cè)以15°刺入皮下，并進(jìn)針約0.5 cm，再將注射器擺至與皮膚呈45°角，穿透腹壁（可感知明顯落空感），回抽針?biāo)�無腹腔內(nèi)容物后注射藥物。灌胃給藥（圖2-2B）方法為：12號灌胃針頭配合1 mL注射器吸管吸取適量吳茱萸堿溶液，排去氣泡，用左手拇指及食指固定小鼠頭部，小指固定尾部，腹部向上

2.6 藥物干預(yù)期間觀察指標(biāo)2.6.1 裸鼠一般狀態(tài)如圖2-3，輕抓鼠尾，將動(dòng)物從籠中取出置于籠具上，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外觀、行動(dòng)、精神狀態(tài)、排便、排尿、死亡等情況。圖 2-3 裸鼠一般狀態(tài)觀察。2.6.2 腫瘤體積腫瘤體積（Volume）通過電子游標(biāo)卡尺測定。每3天測量一次移植瘤的最長徑及最短徑，由公式1進(jìn)行計(jì)算，并繪制腫瘤體積變化曲線。腫瘤體積(V) cm3=[1 -（（長徑×短徑2）×100%] （1）22.6.3 動(dòng)物體重用電子天平每3天測量一次裸鼠體質(zhì)量，并繪制體重變化曲線。
【參考文獻(xiàn)】

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1 李潔;張凱亮;胡成琦;漢媛媛;康正強(qiáng);孫芹芹;王靜;;吳茱萸堿聯(lián)合放射治療對舌鱗癌細(xì)胞Tca-8113裸鼠移植瘤生長的抑制作用[J];腫瘤;2014年02期

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本文編號：2881356