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吳茱萸堿聯(lián)合吉西他濱對人舌鱗癌荷瘤裸鼠模型的抑制作用及其機制研究

發(fā)布時間:2020-11-12 23:07
   背景和目的:傳統(tǒng)手術(shù)及放化療等治療手段對舌癌患者帶來的致殘性和全身毒副反應(yīng)等尚不能達到理想的治療效果。本實驗的目的在于研究中藥吳茱萸堿聯(lián)合西藥吉西他濱對舌鱗癌裸鼠移植瘤生長的影響,初步探討兩藥聯(lián)合作用的機制,并分析用藥的安全性。方法:通過皮下接種Cal-27腫瘤細胞建立人舌鱗癌荷瘤裸鼠模型。建模成功后采用灌胃及腹腔注射法給予吳茱萸堿、吉西他濱單獨及聯(lián)合對荷瘤裸鼠進行藥物干預(yù)。觀察中藥吳茱萸堿聯(lián)合西藥吉西他濱對Cal-27舌鱗癌荷瘤裸鼠一般狀態(tài)的影響;監(jiān)測裸鼠體質(zhì)量、瘤體體積、進食量、進水量,及對外界刺激的應(yīng)激反應(yīng)變化;稱量瘤體重量并計算抑瘤率;HE染色法觀察移植瘤組織中腫瘤細胞形態(tài)變化;肉眼觀察裸鼠心、肝、肺、脾、腎臟組織的腫瘤轉(zhuǎn)移情況;HE染色法觀察各臟器形態(tài)變化;透射電鏡下觀察移植瘤組織中腫瘤細胞超微結(jié)構(gòu)改變;Western blot定量分析移植瘤組織中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax、Bcl-2以及Bcl-xl的蛋白表達,并計算Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值;免疫組化法定性分析移植瘤組織中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax以及Bcl-2的蛋白表達。結(jié)果:聯(lián)合組的瘤體生長速度顯著慢于模型對照組、吳茱萸堿組、吉西他濱組。聯(lián)合組瘤體質(zhì)量明顯比模型對照組、吳茱萸堿組、吉西他濱組要小。四組中各臟器未發(fā)現(xiàn)可疑轉(zhuǎn)移灶。聯(lián)合組病理性核分裂像的數(shù)目明顯少于模型對照組、吳茱萸堿組及吉西他濱組。模型對照組腫瘤細胞體積大,核膜清晰、完整,呈現(xiàn)惡性腫瘤特征,藥物干預(yù)組的腫瘤細胞體積減小,染色質(zhì)發(fā)生凝集、邊聚,出現(xiàn)凋亡形態(tài)改變,聯(lián)合組凋亡表現(xiàn)尤為典型。聯(lián)合給藥組較模型對照組及單藥組其裸鼠進食量、進水量及應(yīng)激反應(yīng)下降要慢。各組裸小鼠的心、肝、肺、脾、腎組織結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯病理性改變。藥物干預(yù)組都可不同程度的降低Bcl-2蛋白的表達,升高Bax蛋白的表達,表現(xiàn)為Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax的比值減小,其中聯(lián)合組凋亡率減小最為顯著。與模型對照組相比,吳茱萸堿組和聯(lián)合組均能顯著抑制NF-κB/p65的表達,促進Ik-βα的表達。結(jié)論:吳茱萸堿及吉西他濱均具有抗舌鱗狀細胞癌生長作用,聯(lián)合應(yīng)用時具有協(xié)同抑制作用,其作用機制可能是吳茱萸堿通過抑制舌鱗癌組織中NF-κB信號通路的激活、抑制Bcl-2/Bcl-xl的表達,促進Bax的表達,從而降低Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值,最終增強吉西他濱對舌鱗癌的促凋亡作用。此外,在實驗期間,兩者聯(lián)合用藥未對實驗動物產(chǎn)生明顯的毒副作用,說明用藥方法及劑量均在安全范圍內(nèi)。
【學(xué)位單位】:蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類】:R739.86;R-332
【部分圖文】:

技術(shù)路線圖,聯(lián)合治療,西藥,移植瘤


一種新型藥物-縮合-雙環(huán)4,6-取代的1,2,4-三唑并-1,3,4-噻二唑衍生物(CBTT)可以阻斷(通過時間依賴性方式)TNFα誘導(dǎo)的上游IκBα激酶的磷酸化,最終抑制NF-κB信號通路的活化和核易位。1.5 選題依據(jù)與思路我們課題組的前期體內(nèi)外實驗研究已經(jīng)證實Evo聯(lián)合放射線能夠抑制舌鱗癌細胞(Tca-8113)及荷瘤裸鼠移植瘤的生長[57,58]。為求進一步了解Evo聯(lián)合治療的作用療效,本研究首次將中藥Evo聯(lián)合西藥Gem對人舌鱗癌裸鼠皮下移植瘤進行藥物干預(yù),觀察中藥Evo聯(lián)合西藥Gem對荷瘤裸鼠移植瘤生長的影響,并探討聯(lián)合治療可能的作用機制,為Evo聯(lián)合化療藥物在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ),為TSCC的防治提供新的思路。1.6 技術(shù)路線

注射器,排去,小指,食指


魎?醵勻松嗔郯┖閃雎閌竽P偷囊種譜饔眉捌浠?蒲芯?14實驗分組、藥物干預(yù)過程、給藥濃度、劑量、方式及頻次見表2-5、圖2-1、圖2-2。腹腔注射(圖2-2A)方法為:首先用1 mL注射器吸取適量生理鹽水或吉西他濱溶液,排去氣泡,用左手拇指及食指固定小鼠頭部,小指固定尾部,腹部向上,使其頭呈低位,尾高位,用碘伏棉球擦拭消毒注射區(qū)域,右手持注射器于腹白線稍右側(cè)以15°刺入皮下,并進針約0.5 cm,再將注射器擺至與皮膚呈45°角,穿透腹壁(可感知明顯落空感),回抽針?biāo)o腹腔內(nèi)容物后注射藥物。灌胃給藥(圖2-2B)方法為:12號灌胃針頭配合1 mL注射器吸管吸取適量吳茱萸堿溶液,排去氣泡,用左手拇指及食指固定小鼠頭部,小指固定尾部,腹部向上

狀態(tài)觀察,裸鼠


2.6 藥物干預(yù)期間觀察指標(biāo)2.6.1 裸鼠一般狀態(tài)如圖2-3,輕抓鼠尾,將動物從籠中取出置于籠具上,觀察實驗動物外觀、行動、精神狀態(tài)、排便、排尿、死亡等情況。圖 2-3 裸鼠一般狀態(tài)觀察。2.6.2 腫瘤體積腫瘤體積(Volume)通過電子游標(biāo)卡尺測定。每3天測量一次移植瘤的最長徑及最短徑,由公式1進行計算,并繪制腫瘤體積變化曲線。腫瘤體積(V) cm3=[1 -((長徑×短徑2)×100%] (1)22.6.3 動物體重用電子天平每3天測量一次裸鼠體質(zhì)量,并繪制體重變化曲線。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李潔;張凱亮;胡成琦;漢媛媛;康正強;孫芹芹;王靜;;吳茱萸堿聯(lián)合放射治療對舌鱗癌細胞Tca-8113裸鼠移植瘤生長的抑制作用[J];腫瘤;2014年02期

2 鄭立娟;馬衛(wèi)東;陳秉智;;纖維加強樹脂夾板固定下頜前牙應(yīng)力分布的有限元分析[J];實用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

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5 馮蕊;何津祥;國晉菘;孫科;楊小慧;王靜;;吳茱萸堿聯(lián)合射線對舌鱗狀細胞癌Tca-8113細胞增殖、黏附和遷移的影響[J];腫瘤;2011年05期



本文編號:2881356

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