發(fā)布時(shí)間：2020-11-08 09:21

　　 目的探討西尼羅病毒(WNV)感染人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y后對(duì)p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑的影響,以及該途徑在WNV復(fù)制及應(yīng)激應(yīng)答、炎性應(yīng)答相關(guān)分子表達(dá)調(diào)控中的作用。方法 WNV分別短時(shí)孵育(5、15、30、60 min)和感染(12、24、48、60 h)SH-SY5Y細(xì)胞,用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表達(dá),用qRT-PCR檢測(cè)WNV感染細(xì)胞內(nèi)C/EBP同源蛋白(CHOP)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、活化轉(zhuǎn)錄因子6α(ATF6α)和干擾素刺激基因15(ISG15)mRNA表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化。用WNV感染p38 MAPK siRNA轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞,用qRT-PCR檢測(cè)WNV RNA水平及CHOP、IL-6、ATF6α和ISG15mRNA水平。結(jié)果與未孵育的細(xì)胞相比,WNV短時(shí)孵育細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK的磷酸化水平升高。WNV感染SH-SY5Y細(xì)胞12 h、24 h時(shí)激活了p38 MAPK途徑,而感染48 h、60 h時(shí)明顯抑制了p38 MAPK途徑。WNV感染促進(jìn)了CHOP、IL-6和ISG15 mRNA表達(dá)而抑制了ATF6αmRNA表達(dá)。與對(duì)照siRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比,p38MAPKsiRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞內(nèi)WNVRNA(P0.05)水平和ATF6αmRNA(P0.01)水平升高,而CHOP mRNA水平降低(P0.05)。結(jié)論 WNV感染早期激活了p38 MAPK途徑,該途徑的激活可能負(fù)反饋調(diào)控WNV的復(fù)制。WNV經(jīng)p38 MAPK途徑調(diào)控與應(yīng)激應(yīng)答相關(guān)的CHOP、ATF6α表達(dá)及與炎性應(yīng)答相關(guān)的IL-6表達(dá)。
【部分圖文】：

WNV感染細(xì)胞內(nèi)p38 MAPK磷酸化的變化

q RT-PCR檢測(cè)結(jié)果（圖5）顯示，與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，p38 MAPK si RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)IL-6(P<0.05）、ATF6α（P<0.01)m RNA水平升高；與對(duì)照si RNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，p38 MAPK s i R N A轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)ATF6αm R N A水平升高（P<0.01）、CHOP m RNA水平降低（P<0.05);ISG15 m R NA水平在各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明，WNV感染差異調(diào)控SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)CHOP、IL-6、ATF6α和ISG15的表達(dá)；W NV可經(jīng)p38 MAPK途徑調(diào)控與應(yīng)激應(yīng)答相關(guān)的CHOP、ATF6α表達(dá)和與炎性應(yīng)答相關(guān)的IL-6表達(dá)。圖4 WNV感染誘生SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)相關(guān)分子m RNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化

圖3 WNV在敲低p38 MAPK表達(dá)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)復(fù)制圖5 敲低p38 MAPK表達(dá)對(duì)WNV調(diào)控SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)相關(guān)分子m RNA表達(dá)的影響
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