目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是炎癥性腸病的一種,病情長且易反復(fù)發(fā)作,嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。UC病人常伴有失眠和晝夜節(jié)律紊亂癥狀,這表明UC與生物鐘關(guān)聯(lián)密切。然而,UC是否受到生物鐘的調(diào)控及其作用機制目前尚不明確。本論文研究旨在解析生物鐘與UC之間的關(guān)聯(lián),闡明生物鐘核心蛋白REV-ERBα對UC的調(diào)控效應(yīng)及作用機制。具體研究目標(biāo)如下:(1)建立小鼠UC模型,測定結(jié)腸基因表達譜,考察時鐘基因表達變化;(2)建立生理型和基因型節(jié)律擾亂小鼠模型,評價節(jié)律擾亂對UC易感性的影響;(3)測定UC小鼠和節(jié)律擾亂小鼠中Rev-erbα的表達,并考察Rev-erbα基因敲除對UC易感性的影響;(4)明確REV-ERBα對UC的調(diào)控途徑,闡明調(diào)控機制;(5)采用小分子激動劑靶向激活REV-ERBα,探討REV-ERBα對UC的預(yù)防和治療作用。方法:1.以C57BL/6J小鼠為實驗對象,采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)構(gòu)建小鼠UC模型。采用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)測定UC模型小鼠和正常小鼠結(jié)腸基因在六個晝夜時點的表達。篩選UC小鼠和正常小鼠結(jié)腸的節(jié)律基因。進一步分析小鼠結(jié)腸中主要時鐘基因的變化趨勢,并采用熒光定量PCR(q ...

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1-2.生物鐘與疾病。

時辰治療學(xué)根據(jù)生理和病理的晝夜變化規(guī)律來尋找藥物(包括中藥)療效高,毒性低的治療時間。中醫(yī)很早就形成了“擇時用藥”理論,選擇在最優(yōu)的時間段用藥對疾病的治療大有裨益。2生物鐘蛋白REV-ERB

圖6-1.動物實驗方案圖。(A)野生型小鼠肝臟REV-ERBα的節(jié)律表達。(B)UC造模前給藥SR9009的動物實驗方案。(C)UC造模后給藥SR9009的動物實驗方案。

REV-ERBα蛋白在一天中于ZT8表達量最高(圖6-1A),因此SR9009給藥的時間點設(shè)置為ZT8。對于SR9009對小鼠UC預(yù)防作用實驗,先使用SR9009(50mg/kg)于ZT8每天經(jīng)腹腔給藥一次(圖6-1B)。SR9009連續(xù)給七天后,各組小鼠同時給予2.5%DSS....

圖6-2.REV-ERBα激活緩解小鼠UC病情。(A)給予DSS的四組小鼠的體重丟失情況檢測。(B)給予DSS的四組小鼠的DAI評分。(C)SR9009處理和對照小鼠的生存率(log-rank檢驗)。(D)給予DSS的四組小鼠的結(jié)腸長度。在解剖時測量結(jié)腸長度。(E)結(jié)腸H&E染色代表圖。比例尺=100μm。(F)給予DSS的四組小鼠的組織學(xué)病理評分。(G)小鼠于第8 天的結(jié)腸MPO活性。(H)qPCR檢測UC小鼠于第8 天的全結(jié)腸組織中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表達。(I)ELISA法檢測經(jīng)DSS喂養(yǎng)的小鼠于第8 天結(jié)腸IL-18蛋白水平。(J)免疫印跡法檢測UC小鼠于第8 天PMs或結(jié)腸中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表達。SR,SR9009。

我們首先評價了REV-ERBα激動劑SR9009對野生型小鼠UC的預(yù)防作用。野生型小鼠于DSS造模前連續(xù)給予SR9009(或溶劑對照)七天。與溶劑對照處理組的小鼠相比,SR9009處理組的小鼠體重損失更少、DAI評分更低、生存率更高,結(jié)腸長度更長(圖6-2A-D)。SR9009給....

圖6-3.SR9009對Rev-erbα敲除的UC小鼠無預(yù)防作用。(A)給予DSS,使用SR9009或溶劑對照處理的Rev-erbα-/-小鼠的體重丟失情況測量。(B)給予DSS,使用SR9009或溶劑對照處理的Rev-erbα-/-小鼠的DAI評分。(C)給予DSS,使用SR9009或溶劑對照處理的Rev-erbα-/-小鼠的的生存率(log-rank檢驗)。(D)給予DSS并經(jīng)SR9009或溶劑對照處理的Rev-erbα-/-小鼠的結(jié)腸長度。解剖后測量結(jié)腸長度。(E)結(jié)腸H&E染色代表圖。比例尺=100μm。(F)給予DSS,使用SR9009或溶劑對照處理的Rev-erbα-/-小鼠的組織學(xué)病理評分。(G)小鼠于第8 天的結(jié)腸MPO活性。(H)qPCR檢測UC小鼠于第8 天的全結(jié)腸組織中Nlrp3、IL-1β和IL-18的表達。(I)ELISA法檢測給予DSS的小鼠于第8天結(jié)腸IL-18蛋白水平。(J)免疫印跡法檢測UC小鼠于第8 天結(jié)腸中NLRP3、IL-1β和β-Actin的表達。SR,SR9009。

我們進一步評價了SR9009對Rev-erbα敲除小鼠UC發(fā)病的影響。Rev-erbα-/-小鼠于DSS造模前連續(xù)7天給予SR9009(或溶劑對照)。實驗結(jié)果表明,SR9009處理組和溶劑對照組在小鼠體重、DAI評分、生存率、結(jié)腸長度、組織病理學(xué)評分和MPO活性等指標(biāo)方面無明顯差....

本文編號：4035099