研究背景及目的卵巢功能異常是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)患者妊娠結(jié)局不佳的重要原因之一。EMS不孕患者卵泡液中孕酮(progesterone,P4)水平改變可引起卵泡發(fā)育障礙、卵母細(xì)胞質(zhì)量下降從而影響胚胎發(fā)育潛能。既往研究發(fā)現(xiàn)參與自噬調(diào)控的重要基因Beclin-1(BECN1)與EMS的發(fā)生發(fā)展之間存在密切的聯(lián)系,但BECN1在EMS卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)卵巢功能的影響目前尚不明確。因此,本研究旨在探討B(tài)ECN1對(duì)EMS不孕患者卵巢顆粒細(xì)胞孕酮合成的調(diào)控及其作用機(jī)制。研究方法1.選取26例腹腔鏡診斷EMS的不孕患者和29例單純輸卵管因素不孕的對(duì)照組患者納入研究,收集穿刺取卵抽吸出的卵泡液。2.通過臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,比較兩組患者的基本資料以及優(yōu)胚率。3.自卵泡液中分離純化顆粒細(xì)胞,采用蛋白質(zhì)印跡分析、電子顯微鏡、免疫熒光以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兩組患者顆粒細(xì)胞中BECN1的表達(dá)及自噬水平。4.通過電化學(xué)發(fā)光免疫分析(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)技術(shù)檢測(cè)兩組患者卵泡液中的孕酮濃度;采用蛋白質(zhì)印跡分析和...

【文章頁(yè)數(shù)】：141 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
中文部分
    緒論
    第一部分 自噬相關(guān)基因Beclin-1 在子宮內(nèi)膜異位癥患者卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)
        1.1 引言
        1.2 材料與方法
            1.2.1 主要試驗(yàn)儀器
            1.2.2 主要試劑和溶液
            1.2.3 研究對(duì)象
            1.2.4 卵泡液的收集和卵巢顆粒細(xì)胞的提取
            1.2.5 蛋白質(zhì)印跡分析
            1.2.6 電子顯微鏡
            1.2.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
            1.2.8 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
            1.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
            1.2.10 血清類固醇激素的檢測(cè)
            1.2.11 胚胎級(jí)別評(píng)定方法及優(yōu)胚率計(jì)算
            1.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 納入研究對(duì)象的一般情況與臨床結(jié)局
            1.3.2 EMS組和對(duì)照組卵巢顆粒細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平
            1.3.3 EMS組和對(duì)照組卵巢顆粒細(xì)胞中自噬溶酶體的數(shù)量
            1.3.4 EMS組和對(duì)照組卵巢顆粒細(xì)胞中LC3 的點(diǎn)狀聚集
            1.3.5 EMS組和對(duì)照組卵巢顆粒細(xì)胞中自噬相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二部分 Beclin-1 在子宮內(nèi)膜異位癥患者卵巢顆粒細(xì)胞孕酮合成中的作用及機(jī)制研究
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 主要試驗(yàn)儀器
            2.2.2 主要試劑和溶液
            2.2.3 研究對(duì)象
            2.2.4 卵泡液的收集和卵巢顆粒細(xì)胞的提取
            2.2.5 卵泡液和細(xì)胞培養(yǎng)上清液孕酮測(cè)定
            2.2.6 卵巢顆粒細(xì)胞的培養(yǎng)和處理
            2.2.7 總蛋白提取和蛋白質(zhì)印跡分析
            2.2.8 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 siRNA干擾實(shí)驗(yàn)
            2.2.10 細(xì)胞活性檢測(cè)
            2.2.11 膽固醇檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
            2.2.12 慢病毒感染實(shí)驗(yàn)
            2.2.13 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
            2.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 EMS組和對(duì)照組卵泡液中的孕酮水平和顆粒細(xì)胞孕酮合成關(guān)鍵酶的表達(dá)情況
            2.3.2 BECN1 敲低對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞孕酮合成的影響
            2.3.3 卵巢顆粒細(xì)胞中LDL誘導(dǎo)的孕酮合成及其關(guān)鍵酶的表達(dá)
            2.3.4 BECN1在LDL誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞孕酮合成中的調(diào)控作用
            2.3.5 BECN1 過表達(dá)對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞孕酮合成的影響
            2.3.6 BECN1與STAR mRNA和獲卵數(shù)相關(guān)性
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    全文總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
英文部分
    Introduction
    Part Ⅰ Expression of Autophagy-related Gene Beclin-1 in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        1.1 Introduction
        1.2 Materials and methods
        1.3 Results
        1.4 Discussion
        1.5 Summary
    Part Ⅱ The Roles and Mechanisms of Beclin-1 in Progesterone Synthesis in Granulosa Cells of Patients with Endometriosis
        2.1 Introduction
        2.2 Materials and methods
        2.3 Results
        2.4 Discussion
        2.5 Summary
    Conclusions
    References
致謝
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八年制學(xué)位論文要求



本文編號(hào)：4011458