第一部分體外預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊的培養(yǎng)和鑒定研究目的:分離和鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,并且在體外制備預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊。材料與方法:利用全骨髓貼壁法分離原代C57BL/6小鼠的骨髓來源間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),培養(yǎng)至第三代,通過流式細胞術(shù)(flow cytometry,FCM)鑒定其干細胞特征性表面標志的表達情況,利用對應(yīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基對細胞進行成骨、成脂向分化,并通過茜素紅和油紅O染色進行鑒定;隨后將第三代BMSCs接種至商用明膠海綿(Spongostan○R)(10⁶細胞/個),經(jīng)過一周的增殖培養(yǎng)基和四周的軟骨塊誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)后,利用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測肥大軟骨細胞特征性標志,并通過Safranin O染色觀察軟骨塊切片。實驗結(jié)果:流式細胞術(shù)結(jié)果顯示本研究分離的小鼠BMSCs特征性高表達CD44、CD29和Sca-1,同時基本不表達造血系細胞標志CD31和CD34;成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后茜素紅染色可見深紅...

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
論文創(chuàng)新點
中文摘要
Abstract
引言
文獻綜述
第一部分 體外預(yù)誘導(dǎo)軟骨塊的培養(yǎng)和鑒定
    實驗一 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的體外分離培養(yǎng)和鑒定
    實驗二 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)為軟骨塊
第二部分 清除受體小鼠的單核/巨噬細胞對軟骨塊皮下成骨成血管的影響..
    實驗一 清除小鼠血液循環(huán)中的單核/巨噬細胞
    實驗二 清除單核/巨噬細胞影響軟骨塊皮下成骨效應(yīng)
第三部分 軟骨塊植入正常小鼠后趨化的巨噬細胞的M2/M1 表型變化
    1 實驗材料和儀器
    2 實驗方法
    3 實驗結(jié)果
    4 討論
第四部分 軟骨塊與巨噬細胞相互作用的體外研究
    實驗一 軟骨塊對巨噬細胞極化的影響及機制
    實驗二 極化后的巨噬細胞對軟骨塊成骨成血管指標的影響
全文總結(jié)
參考文獻
攻博期間的科研成果
個人簡歷
附頁
致謝



本文編號：4005165