發(fā)布時(shí)間：2024-07-10 19:44

　　甲型流感病毒(Influenza A virus)屬于正黏病毒科,流感病毒屬。作為負(fù)鏈RNA病毒,具有易突變的特性。流感病毒RNA聚合酶,核蛋白以及病毒基因組組成核糖核蛋白復(fù)合體,是病毒基因轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的最基本單元,蛋白的翻譯后修飾在病毒的生命周期中起著非常重要的作用。HDAC6作為組蛋白去乙�；�酶,能夠通過(guò)調(diào)控微管蛋白的細(xì)胞骨架,介導(dǎo)抗病毒免疫應(yīng)答或者直接調(diào)控病毒蛋白參與各種病毒的生命周期。因此本研究從流感病毒與宿主蛋白HDAC6的互作出發(fā),發(fā)現(xiàn)了流感病毒RNA聚合酶復(fù)合體PA蛋白的乙�；�修飾對(duì)聚合酶活性乃至病毒基因復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的影響,為研究蛋白修飾對(duì)流感病毒以及其它病毒RNA聚合酶的調(diào)節(jié)作用提供參考。1.HDAC6與流感病毒RNA聚合酶相互作用流感病毒利用宿主細(xì)胞內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及通過(guò)劫持宿主蛋白來(lái)維持自身的生命活動(dòng)。宿主蛋白HDAC6通過(guò)調(diào)控微管蛋白的乙酰化狀態(tài)抑制流感病毒蛋白的運(yùn)輸,而流感病毒則利用HDAC6介導(dǎo)的聚集體的形成促進(jìn)自身的脫殼過(guò)程,在此過(guò)程中,基質(zhì)蛋白M1,核蛋白NP能與HDAC6相互作用。而核蛋白NP與RNA聚合酶復(fù)合體緊密聯(lián)系在一起,所以本研究通過(guò)免疫共沉淀,GST...

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞(Abbreviations)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 甲型流感病毒
        1.1.1 甲型流感病毒的形態(tài)學(xué)特征
        1.1.2 甲型流感病毒蛋白
        1.1.3 甲型流感病毒的復(fù)制周期
        1.1.4 抗甲型流感病毒藥物
        1.1.5 甲型流感病毒感染過(guò)程中產(chǎn)生的免疫反應(yīng)
        1.1.6 流感病毒與宿主的互作
    1.2 組蛋白去乙酰化酶HDAC6的研究進(jìn)展
        1.2.1 組蛋白去乙�；�酶(HDACs)的分類(lèi)
        1.2.2 組蛋白去乙�；�酶HDAC6的結(jié)構(gòu)與生理功能
        1.2.3 組蛋白去乙�；�酶HDAC6的活性調(diào)節(jié)
        1.2.4 蛋白的乙酰化修飾
        1.2.5 HDAC6與應(yīng)激顆粒
        1.2.6 HDAC6與聚集體和自噬的產(chǎn)生
        1.2.7 HDAC6與病毒
    1.3 本研究的目的和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 HDAC6與流感病毒RNA聚合酶相互作用
    1. 材料與方法
        1.1 細(xì)胞系和病毒等相關(guān)材料
        1.2 相關(guān)試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 溶液的配制
        1.5 質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.6 免疫共沉淀試驗(yàn)
        1.7 GST pull-down試驗(yàn)
        1.8 共聚焦免疫熒光試驗(yàn)
    2. 結(jié)果
        2.1 HDAC6與流感病毒RNA聚合酶復(fù)合體互作
        2.2 HDAC6對(duì)流感病毒RNA聚合酶蛋白的調(diào)控作用
        2.3 HDAC6與病毒蛋白PA直接結(jié)合
        2.4 HDAC6與病毒蛋白PA在細(xì)胞質(zhì)中共定位
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 HDAC6使PA去乙�；�以促進(jìn)PA蛋白的降解
    1. 材料與方法
        1.1 細(xì)胞系和質(zhì)粒等相關(guān)材料
        1.2 相關(guān)試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 溶液的配制
        1.5 乙�；�和泛素化位點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定
        1.6 HDAC6以及PA突變體的構(gòu)建
        1.7 病毒蛋白PA及其突變體蛋白穩(wěn)定性的測(cè)定
    2. 結(jié)果
        2.1 HDAC6介導(dǎo)PA蛋白的降解依賴于其去乙�；�酶活性
        2.2 病毒蛋白PA乙酰化位點(diǎn)和泛素化位點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定
        2.3 HDAC6能介導(dǎo)病毒蛋白PA 664位賴氨酸的去乙�；�
        2.4 PA蛋白664位賴氨酸的乙�；�與其蛋白穩(wěn)定性有關(guān)
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 HDAC6抑制流感病毒基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制
    1. 材料與方法
        1.1 細(xì)胞系和質(zhì)粒等相關(guān)材料
        1.2 相關(guān)試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 溶液的配制
        1.5 普通RT-PCR
        1.6 Q-RT-PCR
        1.7 流式細(xì)胞技術(shù)分析感染病毒的細(xì)胞量
        1.8 TCID₅₀測(cè)定流感病毒滴度
    2. 結(jié)果
        2.1 HDAC6選擇性抑制劑Tubacin能促進(jìn)流感病毒的釋放
        2.2 過(guò)表達(dá)HDAC6能下調(diào)流感病毒基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制水平
        2.3 過(guò)表達(dá)HDAC6抑制流感病毒的增殖
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第五章 抑制HDAC6促進(jìn)流感病毒基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制
    1. 材料與方法
        1.1 細(xì)胞系和質(zhì)粒等相關(guān)材料
        1.2 相關(guān)試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 溶液的配制
        1.5 MTT試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性
        1.6 干擾RNA的轉(zhuǎn)染
    2. 結(jié)果
        2.1 MTT試驗(yàn)檢測(cè)HDAC6選擇性抑制劑Tubacin對(duì)細(xì)胞增殖的影響
        2.2 HDAC6選擇性抑制劑Tubacin能促進(jìn)流感病毒基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制
        2.3 HDAC6選擇性抑制劑Tubacin能促進(jìn)流感病毒增殖
        2.4 沉默HDAC6的表達(dá)能促進(jìn)流感病毒基因的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第六章 HDAC6抑制流感病毒RNA聚合酶活性
    1. 材料與方法
        1.1 細(xì)胞系和質(zhì)粒等相關(guān)材料
        1.2 相關(guān)試劑
        1.3主要儀器
        1.4 溶液的配制
        1.5 Mini-genome試驗(yàn)檢測(cè)流感病毒的RNA聚合酶活性
    2. 結(jié)果
        2.1 Mini-genome試驗(yàn)檢測(cè)HDAC6對(duì)流感病毒的RNA聚合酶活性的調(diào)節(jié)
        2.2 免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)HDAC6對(duì)流感病毒RNA聚合酶活性的調(diào)節(jié)
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
本論文創(chuàng)親斤點(diǎn)
科研成果
致謝



本文編號(hào)：4004636