奶牛乳房炎通常就是指乳腺發(fā)生了炎癥,是由多種因素引起嚴重程度不同的復雜疾病。最后會由于環(huán)境、病原體以及宿主的不同而導致不同的后果,因此治療代價較高且不容易治愈。當致病菌進入到無菌環(huán)境,常常會破壞一些物理屏障如乳頭而引起乳房炎,這就需要及時和適當?shù)乃拗鞣烙鶃矸乐辜毦淖躺苊庋装Y的加劇。另一方面,這些傳染性病原體如金黃色葡萄球菌和鏈球菌很容易從感染牛的一個乳區(qū)蔓延到其它乳區(qū)或者是其它的牛。像年齡、泌乳階段和體細胞評分這些因素都會影響牛感染乳房炎的幾率。不同的病原體會引起不同的乳房炎從而導致乳腺組織產生不同的免疫反應,因此宿主需要根據(jù)病原體的情況來產生相應的應答從而保護機體免受感染。本試驗以中國荷斯坦奶牛的乳腺組織和乳腺上皮細胞為研究對象,研究了炎癥信號通路的作用機制。通過組織學觀察正常和乳房炎乳腺組織的結構差異,采用基因芯片的方法分析了 TLR4/NF-κB炎癥信號通路在正常與乳房炎乳腺組織中的基因表達情況;利用體外培養(yǎng)的方法,研究了化學抑制和siRNA抑制NF-κB基因對乳腺上皮細胞中TLR4/NF-κB信號通路關鍵基因表達的影響;運用蛋白質組iTRAQ技術,篩選激活和抑制p65條件下...

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞(Abbreviation)
第一部分 文獻綜述
    第一章 乳房炎的研究進展
        1 乳房炎綜述
            1.1 抗生素
            1.2 噬菌體
            1.3 接種疫苗
            1.4 納米粒子
            1.5 細胞因子
            1.6 天然化合物
    第二章 LPS/TLR4信號轉導通路
        1 Toll樣蛋白概述
            1.1 Toll樣蛋白的發(fā)現(xiàn)
            1.2 Toll樣蛋白的生物學功能
        2 TLR轉導信號
            2.1 MyD88-依賴途徑
            2.2 MyD88非依賴途徑
            2.3 TLR4信號通路的負向調控
            2.4 NF-κB信號通路
    第三章 蛋白質組學融合下一代基因測序
        1 綜述
        2 蛋白質-基因組學:比蛋白質組學和基因組學更準確
        3 蛋白質基因組學遇到的挑戰(zhàn)以及機遇
        4 對蛋白質基因組學定量的綜合見解
        5 不同分子層的交互作用
        6 未來的前景
        7 本研究的目的及意義
第二部分 試驗研究
    第四章 荷斯坦奶牛正常與乳房炎乳腺組織的基因表達譜芯片分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗動物及樣品采集
            1.2 RNA提取
            1.3 基因芯片分析
            1.4 RT-qPCR
            1.5 Western Blot
            1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        2 試驗結果
            2.1 奶牛乳腺組織病理學檢查結果
            2.2 基因芯片數(shù)據(jù)的預處理
            2.3 差異表達的基因
            2.4 差異基因的GO與KEGG分析
            2.5 芯片結果驗證
            2.6 免疫印跡驗證芯片結果
        3 討論
        4 小結
    第五章 化學干涉抑制NF-KB基因對TLR4/ NF-KB信號通路表達的影響
        1 材料與方法
            1.1 樣品采集
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 統(tǒng)計方法
        2 結果與分析
            2.1 奶牛乳腺上皮形態(tài)學觀察
            2.2 Bay11-7082對奶牛乳腺上皮細胞活力的影響
            2.3 Bay11-7082對炎癥反應模型奶牛上皮細胞活力的影響
            2.4 Bay11-7082對炎癥反應模型奶牛上皮細胞凋亡的影響
            2.5 Bay11-7082對LPS誘導的乳腺上皮細胞TLR4,NF-κB蛋白表達的影響
            2.6 Bay11-7082對LPS誘導的乳腺上皮細胞IL-1β和TNF-α釋放的影響
            2.7 共聚焦顯微鏡觀察Bay11-7082對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞NF-κB表達的影響
            2.8 NF-κB基因對TLR4/NF-κB信號通路基因表達水平的影響
        3 討論
        4 小結
    第六章 基因干涉NF-κB基因對TLR4/ NF-κB信號通路表達的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
        2 結果
            2.1 NF-κB-siRNA干擾引物篩選與優(yōu)化
            2.2 NF-κB-siRNA對LPS誘導的乳腺上皮細胞TLR4、NF-κB蛋白表達的影響
            2.3 NF-κB-siRNA對LPS誘導的乳腺上皮細胞IL-1β和TNF-α釋放的影響
            2.4 共聚焦顯微鏡觀察NF-κB-siRNA對LPS誘導的奶牛乳腺上皮細胞NF-κB表達的影響
            2.5 NF-κB-siRNA基因對TLR4/NF-κB信號通路基因表達水平的影響
        3 討論
        4 小結
    第七章 激活和抑制p65條件下乳腺上皮細胞差異蛋白質的篩選
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試劑
            1.3 儀器
            1.4 試驗方法
            1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
        2 結果與分析
            2.1 鑒定結果統(tǒng)計
            2.2 定量蛋白質組學的概述
            2.3 差異表達的蛋白
            2.4 蛋白質功能注釋
        3 討論
        4 小結
參考文獻
全文結論
創(chuàng)新點
附錄
攻讀博士期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3949418