發(fā)布時間：2018-04-16 16:02

  本文選題：UPP + Ub��； 參考：《延邊大學》2017年博士論文

【摘要】：豬體外受精(In vitro fertilization,IVF)過程中容易發(fā)生多精入卵現(xiàn)象,導致豬胚胎發(fā)育率和產(chǎn)子率降低。有研究表明泛素蛋白酶體途徑(Ubiquitin ProteasomePathway,UPP)在海鞘類和哺乳類IVF過程中具有重要的作用,在精卵結合時能夠降解透明帶(Zonapellucida,ZP)蛋白,幫助精子穿透ZP,從而成功受精。UPP是生物體內(nèi)主要的蛋白質降解途徑,依賴ATP提供能量,具有調節(jié)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和降解錯誤折疊與多余蛋白的作用,與人類的基因遺傳疾病、癌癥、腫瘤、神經(jīng)疾病等多種疾病有關。其主要的執(zhí)行過程被稱為Ub降解途徑,受泛素激活酶(Ubiquitin activating Enzyme,E1)、E2酶、E3酶和去泛素化(deubiquitination,DUBs)酶調控,也有研究表明UPP途徑對精子發(fā)生和卵母細胞發(fā)生也具有十分重要的作用,但是到目前為止,在豬IVF的兩個配子形成過程中Ub蛋白的來源及精卵結合過程中Ub的作用尚不十分明確。因此,本試驗中研究了成熟精子、成熟精子對應的精清、未成熟精子和未成熟精子對應的精清中Ub蛋白含量,不同直徑卵泡液中Ub蛋白含量及卵母細胞成熟情況,并在卵母細胞培養(yǎng)液與IVF液中添加ATP循環(huán)產(chǎn)物無機磷酸鹽(Inorganic phosphate,PPi)、E2和DUBs抑制劑,檢測其對精子獲能、頂體反應(acrosome reaction,AR)的Ub程度的影響,和對卵母細胞成熟率、Ub程度及多精入卵的影響。檢測不同時期的黃體與卵丘顆粒細胞中的Ub蛋白含量,并在豬精子保存液中添加PPi檢測其對精子生物學指標及與泛素相關的蛋白的影響。結果表明:(1)在豬精子保存液中添加濃度為50 μM的PPi能夠在保存過程中顯著地提高精子的生物學指標及Ub、頂體酶抑制劑(acrosin inhibitor,AI)、PSMD4蛋白的含量(P0.05);(2)成熟精子中的Ub蛋白含量顯著地高于未成熟精子和成熟精子對應的精清(P0.05),未成熟精子對應的精清中不含Ub蛋白,直徑為3-6 mm的卵泡的卵泡液中Ub含量顯著地高于直徑為1～3和6 mm以上組(P0.05),中期黃體中Ub蛋白含量顯著地高于早期和晚期黃體(P0.05),卵丘細胞中含有Ub蛋白;(3)在豬精子獲能液中分別添加不同濃度的E2和DUBs抑制劑,分別當濃度達到10μM時能夠顯著地降低Ub蛋白、AI蛋白和PSMD4蛋白的含量(P0.05);(4)不同直徑卵泡液中的卵母細胞成熟后,有3條明顯的條帶,且直徑是3～6 mm的卵泡中卵母細胞成熟率與Ub水平顯著地高于其他兩組(P0.05),在豬卵母細胞IVM液中分別添加不同濃度的PPi、E2和DUBs抑制劑,濃度為1 μg/mL的PPi能夠顯著地提高卵母細胞的成熟率(P0.05),但是其Ub蛋白含量顯著地低于對照組和其他處理組,添加10 μM的E2抑制劑能夠顯著地降低卵母細胞成熟率和Ub蛋白含量(P0.05),且隨著濃度增加卵母細胞成熟率與Ub蛋白含量逐漸降低,添加10 μM的DUBs抑制劑能夠顯著地降低卵母細胞成熟率和Ub蛋白含量(P0.05),且隨著濃度增加卵母細胞成熟率與Ub蛋白含量逐漸降低;(5)在豬IVF液中添加不同濃度的PPi、E2和DUBs抑制劑,濃度為1 μg/mL的PPi能夠顯著地增加ZP硬化時間(P0.05),顯著地降低精子多精入卵率(P0.05),添加濃度為10 μM的E2抑制劑能夠顯著地增加ZP硬化時間(P0.05),顯著地降低精子多精入卵率(P0.05),添加濃度為10μM的DUBs抑制劑能夠顯著地增加ZP硬化時間(P0.05),顯著地降低精子多精入卵率(P0.05)。因此,添加濃度為50 μM的PPi在精子保存液中能夠顯著地提高精子的保存效率,濃度為10 μM的E2和DUBs抑制劑能夠顯著地降低精子獲能和AR后的Ub和AI蛋白含量,濃度為1μg/mL的PPi能夠顯著地增加卵母細胞成熟率、顯著地降低Ub蛋白含量及多精入卵率,濃度為10 μM的E2和DUBs抑制劑能夠顯著地降低卵母細胞成熟率、顯著地降低Ub蛋白含量及多精入卵率。同時也說明UPP在精子發(fā)生、卵母細胞成熟和體外受精過程、精卵結合中都具有十分重要的輔助作用,它是在精子成熟和卵母細胞成熟時就形成的。
[Abstract]:In vitro fertilization ( IVF ) , there is an important role of Ub protein in the process of fertilization ( IVF ) . It is shown that ubiquitin proteasome pathway ( UPP ) plays an important role in the process of human genetic diseases , cancer , tumor and neural diseases . ( 2 ) The content of Ub protein was significantly higher than that of other two groups ( P0.05 ) . E2 and DUBs inhibitors with a concentration of 10.mu . M. can significantly reduce the maturation rate of the oocyte , significantly reduce the Ub protein content and the multi - fertilization rate , and also show that the UPP plays an important role in the development of sperm , maturation of the oocyte and in vitro fertilization , and in the binding of the sperm , which is formed when the sperm maturation and the maturation of the oocyte .

【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S828

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本文編號：1759612