目的:篩選鑒定新型小分子GLP-1R激動劑S6對葡萄糖刺激的大鼠胰島素分泌的影響及其機制。方法:1)基于藥效團模型的虛擬篩選與分子對接技術(shù)相結(jié)合的方法篩選小分子化合物。2)FLIPR^?熒光成像檢測系統(tǒng)檢測篩選化合物與GLP-1R結(jié)合后細胞內(nèi)鈣離子濃度變化。3)胰島素分泌實驗觀察不同條件下的S6對胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術(shù)檢測在不同條件下S6對胰島β細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。5)全細胞膜片鉗技術(shù)探究S6在不同條件下對胰島β細胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道、電壓依賴性鉀（Kv）通道以及動作電位時程的影響。6)利用CETSA技術(shù)觀察S6對GLP-1R的靶向作用。結(jié)果:1)通過虛擬篩選和分子對接結(jié)合的方法從ZINC小分子數(shù)據(jù)庫篩選出5809種化合物,后續(xù)進行基于口服化合物理化性質(zhì)的篩選,有108種化合物符合要求,最終購買到30個商業(yè)性化合物。2)30個待測化合物中有16個化合物表現(xiàn)出GLP-1R激動效應(yīng),其中S6具有最高激動作用。3)胰島素分泌結(jié)果表明,S6具有促進大鼠胰島素分泌的作用。4)鈣離子成像技術(shù)顯示S6可增加細胞內(nèi)Ca²⁺濃度。5)... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 小分子GLP-1R激動劑S6 的篩選
    1 材料與方法
        1.1 主要藥品與試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要溶液的配制
        1.4 計算機研究
        1.5 CHO-K1 細胞的培養(yǎng)
        1.6 鈣離子熒光檢測技術(shù)觀察化合物對GLP-1R的激動活性
        1.7 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 虛擬篩選和化合物理化性質(zhì)的計算
        2.2 S6 具有最強的GLP-1R激動作用
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 S6葡萄糖濃度依賴性促進大鼠胰島素分泌及其電生理機制
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織的分離與培養(yǎng)
        1.6 大鼠β細胞的分離與培養(yǎng)
        1.7 組織水平上的胰島素分泌實驗
        1.8 全細胞膜片鉗實驗
        1.9 鈣離子成像技術(shù)實驗
        1.10 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 S6 葡萄糖濃度依賴性的促進胰島素分泌
        2.2 S6 升高β細胞內(nèi)的鈣離子濃度
        2.3 S6 未影響β細胞電壓依賴性鈣（VDCC）通道
        2.4 S6 抑制β細胞電壓依賴性鉀（Kv）通道,延長動作電位時程
        2.5 Kv通道部分參與S6 介導的胰島素分泌作用
2+濃度升高">        2.6 細胞內(nèi)鈣庫釋放參與S6 介導的細胞內(nèi)的Ca²⁺濃度升高
    3 討論
    4 結(jié)論
第三部分 GLP-1R介導S6 性促進大鼠胰島素分泌的機制研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要溶液的配制方法
        1.5 大鼠胰島組織及β細胞的分離與培養(yǎng)
        1.6 CETSA驗證GLP-1R與 S6 靶向作用
        1.7 觀察GLP-1R對 S6 誘導的胰島素分泌的影響
        1.8 觀察S6 抑制Kv通道電流與GLP-1R的關(guān)系
2+濃度的影響">        1.9 觀察GLP-1R對 S6 升高細胞內(nèi)的Ca²⁺濃度的影響
        1.10 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 pEX3-GLP-1R表達載體的鑒定
        2.2 TOB透析式無細胞表達體系GLP-1R蛋白的鑒定
        2.3 GLP-1R是 S6 的特異性靶標
        2.4 S6 通過GLP-1R促進胰島素分泌
2+濃度">        2.5 S6 通過GLP-1R增加β細胞內(nèi)的Ca²⁺濃度
        2.6 S6 通過GLP-1R抑制Kv通道電流
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]胰高血糖素樣肽1（GLP-1）對心血管疾病治療的研究進展[J]. 蔣搖靜,李俊峰,任麗偉,王慶華.  復(fù)旦學報(醫(yī)學版). 2018(06)
[2]胰高血糖素樣肽-1在胃腸道中的作用及機制的研究進展[J]. 嚴淋,羅和生.  胃腸病學和肝病學雜志. 2017(08)
[3]GLP-1R結(jié)構(gòu)和功能及小分子藥物篩選研究進展[J]. 胡中平,程念,楊帆,蘇正定.  生物技術(shù)通報. 2017(02)
[4]G-蛋白偶聯(lián)受體的功能測定和高通量藥物篩選[J]. 許治良,高虹,歐陽克清,鄭旭煦,蔡昭皙,胡應(yīng)和.  中國藥理學通報. 2003(12)



本文編號：2904010