發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 10:57

　　 肥胖能夠?qū)е滦难�管疾病、Ⅱ型糖尿病、脂肪肝、高血壓、高脂血癥等一系列代謝綜合征,是目前世界上最具挑戰(zhàn)性的公共健康問題之一,探尋安全有效的降脂減肥治療方法成為了近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。茶葉作為廣受全球人民喜愛的飲品,具有降脂減肥、殺菌消炎、防癌抗輻射等健康功效。與傳統(tǒng)茶葉相比,抹茶的“吃茶”利用形式使得茶葉中全部功效成分得以充分?jǐn)z入,已被報(bào)道在改善血糖與腸道菌群、保護(hù)二型糖尿病引起的腎臟損傷與肝臟損傷、對(duì)抗肥胖及其相關(guān)并發(fā)癥等方面具有突出的效果,但其降脂減肥的具體作用機(jī)理與分子機(jī)制仍有待深入探索。本論文就抹茶對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖表征、脂質(zhì)積累、肝臟炎癥反應(yīng)和肝癌的影響展開了研究,通過(guò)相關(guān)細(xì)胞模型和動(dòng)物模型為抹茶降脂減肥及保護(hù)肝臟損傷的作用功效與調(diào)控機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)參考。本論文的主要研究結(jié)果如下:(1)將抹茶樣品通過(guò)水浸提和70%乙醇浸提制備水提取物(matcha water extract,MWE)和乙醇提取物(matcha ethanol extract,MEE),并測(cè)定MWE和MEE中游離氨基酸、茶多酚、兒茶素、咖啡堿、總糖、可溶性蛋白等生化成分的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MWE和MEE均富含茶多酚,其中兒茶素以EGCG含量最高。此外,MWE含有更多的游離氨基酸和總糖,MEE含有更多的茶多酚、蛋白質(zhì)和咖啡堿�？寡趸�活性方面,二者均表現(xiàn)出良好的DPPH清除能力、ABTS清除能力和鐵離子還原能力,總體上MEE強(qiáng)于MWE。(2)建立模擬高脂炎性損傷的棕櫚酸誘導(dǎo)的人肝臟L0-2細(xì)胞模型,觀察MEE和MWE對(duì)L0-2細(xì)胞形態(tài)變化與炎癥反應(yīng)的作用效果。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,抹茶提取物能夠濃度依賴的改善PA刺激下L0-2細(xì)胞的形態(tài)損傷和脂質(zhì)積累。同時(shí)不同程度降低棕櫚酸誘導(dǎo)的TNF-α炎癥因子釋放和TLR4、MyD88的蛋白表達(dá),說(shuō)明抹茶抑制高脂誘導(dǎo)的肝臟炎癥損傷可能與抑制TLR4/MyD88通路的激活密切相關(guān)。(3)建立高脂飲食誘導(dǎo)的C57BL/6肥胖小鼠模型,將50只小鼠分為五組,分別飼喂正常飲食(NCD)、高脂飲食(HFD)、高脂飲食添加0.1%抹茶(HML)、高脂飲食添加0.5%抹茶(HMM)和高脂飲食添加1.0%抹茶(HMH),觀察喂養(yǎng)6周后的肥胖相關(guān)表征和肝臟炎癥反應(yīng)。結(jié)果表明,膳食補(bǔ)充抹茶能夠顯著降低因高脂飲食而造成的小鼠體重上升、組織脂質(zhì)積累、脂肪細(xì)胞增大、血糖血脂升高和炎癥細(xì)胞因子增加。同時(shí),對(duì)小鼠肝臟組織中TLR4和MyD88的PCR和WB檢測(cè)結(jié)果表明,抹茶能夠抑制TLR4和MyD88基因與蛋白表達(dá),說(shuō)明TLR4/MyD88通路信號(hào)是抹茶抑制高脂飲食誘導(dǎo)的肝臟炎癥反應(yīng)的潛在作用靶點(diǎn)。(4)研究表明肥胖能夠增加肝癌的患病風(fēng)險(xiǎn),本論文通過(guò)人肝癌細(xì)胞HepG2模型對(duì)MEE和MWE的抗肝癌作用進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,抹茶提取物能夠濃度依賴的抑制HepG2細(xì)胞的增殖和遷移,并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡與周期阻滯。此外,抹茶提取物能夠提升HepG2細(xì)胞的SOD、CAT、GSH水平,使細(xì)胞抗氧化酶水平升高。相關(guān)通路關(guān)鍵因子的WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,抹茶提取物能夠使細(xì)胞凋亡相關(guān)的關(guān)鍵因子Bcl-2表達(dá)減少,Bax表達(dá)增多,Bcl-2/Bax比值下降,從而發(fā)揮對(duì)HepG2細(xì)胞的凋亡促進(jìn)作用。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：TS201.4;R735.7;R575
【部分圖文】：

根據(jù)抹茶提取物對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響結(jié)果,選取了對(duì)增值率影響顯著,且呈良好濃度依賴性的400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL作為各組的低、中、高濃度,進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。5.4.2 抹茶提取物對(duì)HepG2細(xì)胞形態(tài)的影響

用不同濃度的抹茶提取物以及陽(yáng)性對(duì)照紫杉醇處理HepG2細(xì)胞24 h后,對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響如圖3.3所示。可以看出,空白Control組在培養(yǎng)24 h后,細(xì)胞貼壁形態(tài)正常,呈現(xiàn)多邊形,互相銜接,成團(tuán)聚攏,呈“鋪路石”狀。在陽(yáng)性對(duì)照紫杉醇10μg/mL處理24 h后,細(xì)胞數(shù)量明顯減少,細(xì)胞變小,形態(tài)呈圓形,各自排布松散。在抹茶水提物400μg/mL濃度培養(yǎng)24 h下,細(xì)胞數(shù)量減少,排列稍顯松散,在抹茶水提物濃度達(dá)到600μg/mL、800μg/mL時(shí),細(xì)胞開始變小、變圓,數(shù)量逐步減少,細(xì)胞排列逐步松散,整體趨勢(shì)與陽(yáng)性對(duì)照保持一致,可以表明細(xì)胞形態(tài)的變化呈濃度依賴性。另外,從MWE-H細(xì)胞形態(tài)圖可看出,部分細(xì)胞形態(tài)由多個(gè)小細(xì)胞規(guī)則組合而成,呈有絲分裂的典型形態(tài),由此推測(cè)在抹茶水提物高濃度作用時(shí),細(xì)胞停滯于有絲分裂期。在抹茶醇提物400μg/mL濃度作用下,細(xì)胞間距沒有明顯變化,但細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)細(xì)胞不規(guī)則突起,部分細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)條形,部分細(xì)胞變圓,在濃度達(dá)到600μg/mL、800μg/mL時(shí),細(xì)胞排列開始松散,數(shù)量逐漸變少,形態(tài)變圓變小,整體趨勢(shì)依舊呈現(xiàn)濃度依賴性。但相較于抹茶水提物組及陽(yáng)性對(duì)照組,仍有部分細(xì)胞呈現(xiàn)多邊形或長(zhǎng)條形形態(tài)。5.4.3 抹茶提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的SOD、CAT、GSH水平的影響

5.4.3 抹茶提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的SOD、CAT、GSH水平的影響不同濃度的抹茶提取物對(duì)HepG2的SOD、CAT、GSH水平的影響如圖5.4所示�？梢钥闯�,隨著濃度增加,抹茶水提物極顯著提升了HepG2細(xì)胞的SOD、CAT、GSH水平(p<0.01),呈濃度依賴性。抹茶醇提物同樣極顯著的提升了HepG2細(xì)胞的SOD、CAT、GSH水平(p<0.01)。
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本文編號(hào)：2891318