發(fā)布時間：2024-12-10 03:28

　　阿特拉津是世界范圍內最常使用的農(nóng)業(yè)除草劑之一,被世界衛(wèi)生組織列為潛在的內分泌干擾物(EDC),能夠侵害生殖器官,引發(fā)生殖功能障礙,導致睪丸發(fā)育異常,干擾精子生成,但其睪丸毒性作用的機制仍不清楚。有著“植物黃金”之稱的番茄紅素是抗氧化功能最強的類胡蘿卜素,在睪丸組織中分布豐富,為防治阿特拉津造成的睪丸毒性提供線索。為了探究番茄紅素拮抗阿特拉津致雄性小鼠睪丸發(fā)育毒性的機制,本試驗選用350只SPF級雄性昆明小鼠隨機分成7組(50只/組):Con組(對照組)、Vcon(受試物溶媒對照組)、LYC組(5 mg/kg番茄紅素組)、ATRⅠ組(50 mg/kg阿特拉津組)、ATRⅡ組(200 mg/kg阿特拉津組)、ATRⅠ+LYC組(50 mg/kg阿特拉津+5 mg/kg番茄紅素組)和ATRⅠ+LYC組(200 mg/kg阿特拉津+5 mg/kg番茄紅素組),采用灌胃方式連續(xù)處理21 d。觀察睪丸形態(tài)結構與功能變化,生殖細胞、睪丸支持細胞、睪丸間質細胞的超微結構,檢測精子相關參數(shù)及精子發(fā)生相關因子、睪酮(T)分泌及相關調控因子、緊密連接蛋白的表達、線粒體動力學及功能、抗氧化功能、SIRT3介導的...

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 引言
    1.1 阿特拉津的概述
    1.2 阿特拉津的生殖毒性
        1.2.1 阿特拉津生殖毒性的研究進展
        1.2.2 阿特拉津生殖毒性機制的研究進展
    1.3 阿特拉津生殖毒性拮抗效應物的研究
    1.4 番茄紅素的概述
    1.5 番茄紅素對生殖系統(tǒng)的保護作用
    1.6 線粒體動力學參與生殖系統(tǒng)健康調控的研究進展
    1.7 SIRT3 介導的線粒體健康調控
        1.7.1 SIRT3 的結構與功能
        1.7.2 SIRT3 信號通路在線粒體健康調控中的作用
    1.8 SIRT3 信號通路參與生殖系統(tǒng)健康調控的研究進展
    1.9 試驗的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 主要儀器與試劑
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
    2.2 試驗動物與檢測方法
        2.2.1 動物分組與處理
        2.2.2 動物試驗技術路線
        2.2.3 臨床癥狀的觀察
        2.2.4 精子相關檢測方法
        2.2.5 睪丸及附睪組織形態(tài)學觀察
        2.2.6 睪丸組織超微結構觀察
        2.2.7 睪丸組織阿特拉津及其代謝產(chǎn)物的檢測方法
        2.2.8 睪丸組織CYP450 酶系的檢測方法
        2.2.9 睪丸組織抗氧化功能檢測方法
        2.2.10 血清激素的檢測方法
        2.2.11 精子發(fā)生的檢測方法
        2.2.12 睪丸間質細胞損傷的檢測方法
        2.2.13 睪丸支持細胞損傷的檢測方法
        2.2.14 SIRT3 介導的線粒體健康調控通路的檢測方法
        2.2.15 睪丸組織線粒體自噬的檢測方法
        2.2.16 睪丸組織凋亡的檢測方法
    2.3 TM3 細胞及其檢測項目與方法
        2.3.1 TM3 細胞及培養(yǎng)
        2.3.2 TM3 細胞分組與處理
        2.3.3 TM3 細胞試驗技術路線
        2.3.4 TM3 細胞形態(tài)的觀察
        2.3.5 TM3 細胞活性檢測方法
        2.3.6 TM3 細胞中SIRT3 介導的線粒體健康調控通路的檢測方法
        2.3.7 TM3 細胞線粒體自噬的檢測方法
        2.3.8 TM3 細胞凋亡的檢測方法
    2.4 TM4 細胞及其檢測項目與方法
        2.4.1 TM4 細胞及培養(yǎng)
        2.4.2 TM4 細胞分組與處理
        2.4.3 TM4 細胞試驗技術路線
        2.4.4 TM4 細胞形態(tài)的觀察
        2.4.5 TM4 細胞活性檢測方法
        2.4.6 TM4 細胞中SIRT3 介導的線粒體健康調控通路的檢測方法
        2.4.7 TM4 細胞線粒體自噬的檢測方法
        2.4.8 TM4 細胞凋亡的檢測方法
    2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 結果與分析
    3.1 番茄紅素拮抗阿特拉津致小鼠生殖毒性檢測結果
        3.1.1 小鼠臨床癥狀的觀察
        3.1.2 小鼠精子參數(shù)檢測結果
        3.1.3 小鼠睪丸及附睪形態(tài)學損傷的觀察
        3.1.4 小鼠睪丸組織中阿特拉津及DACT檢測結果
        3.1.5 小鼠睪丸組織CYP450 酶系檢測結果
        3.1.6 小鼠睪丸組織抗氧化功能檢測結果
        3.1.7 小鼠血清激素檢測結果
        3.1.8 小鼠精子發(fā)生障礙檢測結果
        3.1.9 小鼠睪丸間質細胞損傷檢測結果
        3.1.10 小鼠睪丸支持細胞損傷檢測結果
        3.1.11 小鼠SIRT3 介導的線粒體損傷檢測結果
        3.1.12 小鼠睪丸組織自噬檢測結果
        3.1.13 小鼠睪丸組織凋亡檢測結果
    3.2 番茄紅素拮抗阿特拉津致TM3 細胞毒性檢測項目結果
        3.2.1 TM3 細胞阿特拉津及番茄紅素濃度的篩選
        3.2.2 TM3 細胞SIRT3 介導的線粒體損傷檢測結果
        3.2.3 TM3 細胞線粒體自噬檢測結果
        3.2.4 TM3 細胞凋亡檢測結果
    3.3 番茄紅素拮抗阿特拉津致TM4 細胞毒性檢測項目結果
        3.3.1 TM4 細胞阿特拉津及番茄紅素濃度的篩選
        3.3.2 TM4 細胞SIRT3 介導的線粒體損傷檢測結果
        3.3.3 TM4 細胞線粒體自噬檢測結果
        3.3.4 TM4 細胞凋亡檢測結果
4 討論
    4.1 番茄紅素通過SIRT3 信號通路拮抗阿特拉津致小鼠睪丸毒性
        4.1.1 番茄紅素拮抗阿特拉津致睪丸毒性的影響
        4.1.2 番茄紅素拮抗阿特拉津致精子發(fā)生障礙的影響
        4.1.3 番茄紅素拮抗阿特拉津致睪丸間質細胞損傷及睪酮合成障礙的影響
        4.1.4 番茄紅素拮抗阿特拉津致睪丸支持細胞損傷及緊密連接的影響
        4.1.5 番茄紅素拮抗阿特拉津致SIRT3 介導的睪丸組織線粒體損傷的影響
        4.1.6 番茄紅素拮抗阿特拉津致睪丸組織線粒體自噬的影響
    4.2 番茄紅素通過SIRT3 信號通路拮抗阿特拉津致TM3 細胞毒性
    4.3 番茄紅素通過SIRT3 信號通路拮抗阿特拉津致TM4 細胞毒性
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術論文



本文編號：4015534