發(fā)布時(shí)間：2020-12-15 07:00

　　藍(lán)藻水華暴發(fā)引發(fā)的生態(tài)問題已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn),而且已經(jīng)嚴(yán)重威脅到生態(tài)環(huán)境和人類的健康。其中研究最多、危害最大的種類就是微囊藻毒素（microcystins,MC）.已有的研究表明微囊藻毒素對動物的肝臟、腎臟、免疫器官、生殖器官、胚胎發(fā)育等都有毒性,此外微囊藻毒素還是潛在的促癌劑。目前關(guān)于MC對動物貧血的研究多集中在血液學(xué)指標(biāo)、骨髓細(xì)胞的增殖活力、遺傳毒性等方面,而MC引起機(jī)體貧血的相關(guān)機(jī)制的研究還比較少。因此,本文通過體外對鯽和小鼠的紅細(xì)胞進(jìn)行急性攻毒實(shí)驗(yàn),研究了MC-LR對紅細(xì)胞的體外毒性效應(yīng)；研究了小鼠在MC-LR暴露下對其造血功能造成的抑制作用：研究了大鼠在MC-LR暴露下造成的貧血現(xiàn)象以及其骨髓細(xì)胞周期及凋亡的影響。主要結(jié)果如下：（1）通過在15榅條件下離體培養(yǎng)鯽紅細(xì)胞,研究了MC-LR對鯽紅細(xì)胞體外培養(yǎng)的致毒效應(yīng)。主要測定了相關(guān)的抗氧化酶、脂質(zhì)過氧化水平、生理生化相關(guān)指標(biāo)、溶血率以及觀察了紅細(xì)胞的形態(tài)變化。試驗(yàn)結(jié)果表明鯽紅細(xì)胞發(fā)生了明顯的脂質(zhì)過氧化（LPO）,并表現(xiàn)出一定的時(shí)間-劑量效應(yīng)�？偝�氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GSD、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 水體富營養(yǎng)化和藍(lán)藻水華
    2 微囊藻藻毒素產(chǎn)生的主要制約因素
    3 微囊藻毒素的一般結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì)
    4 微囊藻毒素的毒性研究概況
        4.1 肝臟毒性
        4.2 腎臟毒性
        4.3 遺傳毒性
        4.4 生殖毒性
        4.5 其他毒性
    5 微囊藻藻毒素致毒機(jī)理的研究
    6 微囊藻毒素與貧血
    7 本研究目的和意義
第二章 微囊藻毒素對鯽紅細(xì)胞體外培養(yǎng)的毒性研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料
        2.2 試驗(yàn)魚
        2.3 鯽紅細(xì)胞染毒與樣品采集
        2.4 紅細(xì)胞破膜上清液的制備
        2.5 脂質(zhì)過氧化和抗氧化系統(tǒng)指標(biāo)的測定
            2.5.1 脂質(zhì)過氧化（LPO）的測定
            2.5.2 總超氧化物歧化酶（SOD）活性測定
            2.5.3 過氧化氫酶（CAT,EC1.11.1.6）活性測定
            2.5.4 谷胱甘肽過氧化物酶（GPx,EC1.11.1.9）活性測定
            2.5.5 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST,EC2.5.1.18）活性測定
            2.5.6 谷胱甘肽（GSH）含量測定
        2.6 相關(guān)生化指標(biāo)的測定
            2.6.1 乙酰膽堿酯酶（AChE）活性測定
+-K⁺-ATPase）和鈣鎂ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase)活性的測定">            2.6.2 鈉鉀ATP酶（Na⁺-K⁺-ATPase）和鈣鎂ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase)活性的測定
            2.6.3 紅細(xì)胞膜蛋白含量和血紅蛋白含量測定
        2.7 溶血率
        2.8 紅細(xì)胞形態(tài)變化
        2.9 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 脂質(zhì)過氧化水平（LPO）的變化
        3.2 SOD活性變化
        3.3 CAT活性變化
        3.4 Gpx活性變化
        3.5 GST活性變化
        3.6 GSH含量的變化
        3.7 AChE活性的變化
+-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的測定">        3.8 Na⁺-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的測定
        3.9 溶血率的變化
        3.10 紅細(xì)胞形態(tài)的觀察
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 微囊藻毒素對小鼠紅細(xì)胞體外培養(yǎng)的毒性研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料
        2.2 試驗(yàn)小鼠
        2.3 小鼠紅細(xì)胞染毒和樣品采集
        2.4 紅細(xì)胞破膜上清液的制備
        2.5 脂質(zhì)過氧化和抗氧化系統(tǒng)指標(biāo)的測定
            2.5.1 脂質(zhì)過氧化（LPO）的測定
            2.5.2 總超氧化物歧化酶（SOD）活性測定
            2.5.3 谷胱甘肽過氧化物酶（GPx,EC1.11.1.9）活性測定
            2.5.4 谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST,EC2.5.1.18）活性測定
            2.5.5 谷胱甘肽（GSH）含量測定
        2.6 相關(guān)生化指標(biāo)的測定
            2.6.1 乳酸脫氫酶（LDH）活性測定
            2.6.2 乙酰膽堿酯酶（AChE）活性測定
+-K⁺-ATPase）和鈣鎂ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase)活性的測定">            2.6.3 鈉鉀ATP酶（Na⁺-K⁺-ATPase）和鈣鎂ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase)活性的測定
            2.6.4 紅細(xì)胞膜蛋白含量和血紅蛋白含量測定
        2.7 溶血率
        2.8 紅細(xì)胞形態(tài)變化
        2.9 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 LPO水平的變化
        3.2 SOD活性變化
        3.3 Gpx活性變化
        3.4 GST活性變化
        3.5 GSH含量的變化
        3.6 LDH活性的變化
        3.7 AChE活性的變化
+-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的測定">        3.8 Na⁺-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的測定
        3.9 溶血率的變化
        3.10 紅細(xì)胞形態(tài)的觀察
    4 討論
    5 小結(jié)
第四章 微囊藻毒素對小鼠造血功能的抑制
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和試劑盒
        2.2 試驗(yàn)動物與染毒
        2.3 血樣采集與血清樣品制備
        2.4 外周血象指標(biāo)的測定
        2.5 骨髓細(xì)胞樣品的制備
        2.6 骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的觀察
        2.7 骨髓細(xì)胞增殖能力的測定
        2.8 血消中造血生長因子水平的測定
            2.8.1 GM-CSF含量的測定
            2.8.2 EPO、IL-3和TNF-α含量的測定
        2.9 骨髓細(xì)胞中造血生長因子mRNA表達(dá)水平的測定
            2.9.1 骨髓細(xì)胞RNA提取
            2.9.2 逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcriptase）
            2.9.3 引物設(shè)計(jì)及Real-Time PCR分析
        2.10 血清中細(xì)胞凋亡因子水平的測定
        2.11 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 外周血象指標(biāo)
        3.2 骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的變化
        3.3 骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.4 骨髓細(xì)胞增殖能力
        3.5 血清中相關(guān)造血因子含量水平的變化
        3.6 骨髓細(xì)胞中造血生長因子mRNA表達(dá)水平的變化
        3.7 血清中細(xì)胞凋亡因子的含量水平變化
    4 討論
        4.1 微囊藻毒素對小鼠外周血象指標(biāo)的影響
        4.2 微囊藻毒素對小鼠骨髓有核細(xì)胞的影響
        4.3 微囊藻毒素對小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核率的影響
        4.4 微囊藻毒素對小鼠造血生長因子的影響
        4.5 微囊藻毒素對小鼠細(xì)胞凋亡及骨髓細(xì)胞增殖活力的影響
    5 小結(jié)
第五章 微囊藻毒素對骨髓細(xì)胞周期及凋亡的影響
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和試劑盒
        2.2 試驗(yàn)動物
        2.3 血樣采集
        2.4 外周血象指標(biāo)的測定
        2.5 骨髓細(xì)胞樣品的制備
        2.6 骨髓細(xì)胞周期分析
        2.7 骨髓細(xì)胞中細(xì)胞凋亡因子mRNA表達(dá)水平的測定
            2.7.1 骨髓細(xì)胞RNA提取
            2.7.2 逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcriptase）
            2.7.3 引物設(shè)計(jì)
            2.7.4 Real-Time PCR分析
        2.8 數(shù)據(jù)處理及分析
    3 結(jié)果
        3.1 外周血象指標(biāo)
        3.2 骨髓細(xì)胞周期分析
        3.3 骨髓細(xì)胞中細(xì)胞凋亡因子mRNA表達(dá)水平的變化
    4 討論
    5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間發(fā)表論文情況



本文編號：2917862