發(fā)布時(shí)間：2025-01-06 06:37

　　酯酶可催化酯類的水解、合成和酯交換,在真核生物和原核生物中廣泛存在。食品、化妝品和醫(yī)藥等工業(yè)用酯酶大多為細(xì)菌來源,其中細(xì)菌HSL家族酯酶因底物譜較廣且具有嚴(yán)苛條件的適應(yīng)性等特點(diǎn),已被應(yīng)用于食品香料制備和食品安全檢測。不同細(xì)菌來源HSL家族酯酶的催化特性差異較大,開展蛋白結(jié)構(gòu)研究對解釋其結(jié)構(gòu)與催化特性之間的關(guān)系和指導(dǎo)酶工程改造至關(guān)重要。本研究從具有烷烴降解能力的赤桿菌基因組中篩選新型HSL家族酯酶,通過酶學(xué)表征和晶體結(jié)構(gòu)研究,為細(xì)菌HSL家族酯酶的催化機(jī)制和功能研究提供數(shù)據(jù)支持。從13株赤桿菌科細(xì)菌基因組中利用序列比對篩選出12個(gè)HSL家族酯酶。經(jīng)氨基酸序列分析以及通過基因克隆、異源表達(dá)和純化,確定了兩個(gè)可溶性表達(dá)量大、性質(zhì)穩(wěn)定酯酶Poc14和Pot7作為研究對象。其中,酯酶Poc14的分子量為35.7 kDa,酯酶Pot7的分子量大小為33.7 kDa。酶學(xué)性質(zhì)表征結(jié)果顯示酯酶Poc14和Pot7的最適底物都為對硝基苯酚己酸酯,最適反應(yīng)條件:溫度為55?C,pH為6.0–9.0。酯酶Poc14和Pot7具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性,對NaCl、多種金屬離子和有機(jī)溶劑具有很強(qiáng)的耐受性,并且相比Pot...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2基因組注釋流程

圖1.2基因組注釋流程[58]Figure1.2TheprocessofgenomeannotationL家族酯酶的研究現(xiàn)狀L家族酯酶通常優(yōu)先水解短鏈的對硝基苯酯（p-nitrophenylesteributyrin）。第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)和歸類為細(xì)菌來源的HSL....

圖1.3鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二辛酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)

一類持久性污染物[85]。在自然條件下的水解和光解的降物降解鄰苯二甲酸酯被認(rèn)為是主要途徑，首先都是通過酯[88,89]，然后水解為鄰苯二甲酸進(jìn)入后續(xù)的降解途徑二甲酸酯的目標(biāo)菌株，但能夠大多數(shù)菌株都不能利用鄰度高會抑制菌體生長，重要的是能夠水解長鏈的如結(jié)構(gòu)此，利用分子生物學(xué)技術(shù)從....

圖1.4細(xì)菌HSL家族酯酶與人源HSL家族脂肪酶的結(jié)構(gòu)域比較

其含有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是N端的可能與脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)結(jié)合蛋白具有相互作結(jié)合結(jié)構(gòu)域以及C端的含有Ser-Asp-His催化三聯(lián)體的催化結(jié)構(gòu)域；而細(xì)菌來L家族酯酶N端含有一個(gè)CAP結(jié)構(gòu)域，C端含有催化結(jié)構(gòu)域[97,98]，幾個(gè)具有代菌來源的HSL家族酯酶與人源....

圖2.2HSL家族酯酶的多序列比對分析

注：黑色框表示的是HSL家族的保守基序；藍(lán)色實(shí)心點(diǎn)突出的是參與氧陰離子洞的氨基酸基；紅色實(shí)心點(diǎn)表示的是催化三聯(lián)體的氨基酸殘基殘基）圖2.2HSL家族酯酶的多序列比對分析Figure2.2Multiplesequencealignmentanalysisof....

本文編號：4023944