發(fā)布時(shí)間：2020-11-19 22:46

　　 我國(guó)黑色稻種植廣泛,其品種占世界黑色稻資源的90.8%,主產(chǎn)區(qū)分布在陜西、云南、湖南等地。黑米中含有豐富的酚類(lèi)活性成分,對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激引起的癌癥、心血管疾病、糖尿病等慢性疾病具有預(yù)防保健作用。目前,對(duì)于黑米酚類(lèi)物質(zhì)的研究主要側(cè)重于總酚提取物,對(duì)具體的自由酚和結(jié)合酚類(lèi)化合物研究較少。本研究以黑米為原料,分別提取其總酚、自由酚和結(jié)合酚類(lèi)化合物,比較提取物中活性成分含量的差異及其與抗氧化活性的關(guān)系,并對(duì)提取物中的具體酚類(lèi)化合物進(jìn)行定性定量,同時(shí)通過(guò)細(xì)胞模型研究黑米多酚提取物對(duì)人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(Caco-2細(xì)胞)氧化應(yīng)激的保護(hù)作用。主要研究結(jié)果如下:(1)通過(guò)酸化甲醇超聲提取法、溶劑提取法(70%的丙酮)和乙酸乙酯萃取法分別提取黑米中的總酚、自由酚、結(jié)合酚類(lèi)化合物,經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化,將純化前后的提取物進(jìn)一步冷凍干燥,其凍干粉得率最高的為未純化的自由酚提取物(FP),達(dá)到5.84%。除純化前后的結(jié)合酚提取物(BP、PBP)外,純化后的提取物單位質(zhì)量?jī)龈煞壑懈骺寡趸�成分含量均顯著高于純化前(P0.05)。純化后的總酚提取物(PTP)總多酚和總黃酮含量最高,分別為45.86±0.06mg GAE/gP,107.50±1.23mg CE/g P,純化后的自由酚提取物(PFP)的花青素含量最高,達(dá)到了22.03±0.31 mg Cy-3-G/g P,總多酚和花青素含量最少的為結(jié)合酚提取物。(2)采用三種體外抗氧化方法檢測(cè)黑米多酚提取物的活性,結(jié)果表明,總多酚、總黃酮和花青素含量與抗氧化能力呈顯著相關(guān)。以單位質(zhì)量?jī)龈煞壑械腡rolox當(dāng)量(μmol TE/g P)表示各檢測(cè)結(jié)果,純化后的各提取物抗氧化能力均顯著提升(P0.05)。PTP的抗氧化能力最好,其DPPH、ABTS自由基清除能力和鐵離子還原抗氧化能力檢測(cè)結(jié)果分別為 240.98±6.31 μmol TE/g P、413.35±4.08 μmol TE/g P、439.80±6.35 μmol TE/g P。純化后的黑米多酚提取物抗氧化活性為PTPPFPPBP。(3)UPLC-ESI-MS/MS檢測(cè)結(jié)果表明,黑米多酚提取物中鑒定出原兒茶酸、綠原酸、對(duì)羥基苯甲酸、咖啡酸、對(duì)香豆酸、香草酸6種酚酸類(lèi)化合物和矢車(chē)菊-3-葡萄糖苷、芍藥素-3-葡萄糖苷共2種花青素。在8種酚類(lèi)化合物中,以原兒茶酸和矢車(chē)菊-3-葡萄糖苷為主要成分。純化后的自由酚提取物中檢測(cè)出的花青素含量最高,達(dá)到31069.51±305.37μg/gP(1812.91±17.82μg/g黑米),各提取物凍干粉中酚類(lèi)化合物含量為PFPPTP未純化的總酚提取物(TP)FPPBPBP。(4)選取體外抗氧化效果較好的純化后的總酚和自由酚提取物進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,PTP和PFP處理在選定濃度內(nèi)(62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL)表現(xiàn)出對(duì)Caco-2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用,可顯著提升損傷細(xì)胞的存活率,降低脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA水平,改善SOD酶活性,且在250 μg/mL時(shí)效果最好。PTP和PFP可在不同程度上降低ROS水平,在250μg/mL時(shí)顯著提高谷胱甘肽還原酶(GR酶)活性。
【學(xué)位單位】：中南林業(yè)科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：TS201.2;TS213.3
【部分圖文】：

２．３．２不同黑米多酚提取物中總多酚含量??不同提取物樣品中總多酚的含量以單位質(zhì)量?jī)龈煞壑械臎](méi)食子酸當(dāng)量表示（ｍｇ??ｇａｌｌｉｃ?ａｃｉｄ?ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ?（ＧＡＥ）?／ｇＰ）。如圖２．２所不，純化前后提取物的總多酸含量均??呈現(xiàn)總酚提取物＞?自由酚提取物＞結(jié)合酚提取物的趨勢(shì)（Ｐ＜?０．０５）。純化后的提取物??中總多酚含量比純化前顯著升高（Ｐ＜〇．〇５），尤其是ＰＴＰ，其總多酚含量（４５．８６±０．０６??ｍｇＧＡＥ／ｇＰ）是ＴＰ?（３２．２０±１．２１ｍｇＧＡＥ／ｇＰ）的１．４２倍，同時(shí)分另丨ｊ是純化后自由酚??和結(jié)合酚提取物總多酚含量的２．７６和５．１４倍。純化后的自由酚與純化前相比，總多??酚含量提升了?８０％左右，而結(jié)合酚則變化不大。??以每克干黑米中各提取物的多酚提取率為指標(biāo)進(jìn)行比較，各樣品中總多酚為??０．１４？１．６７?ｍｇ?ＧＡＥ／ｇ黑米，結(jié)合酚提取物測(cè)得的多酚含量最少，可能由于其一般隨著??黑米的成熟逐漸下降［７４］。Ｓｕｍｃｚｙｎｓｋｉ等［２２］用超聲輔助提取了中國(guó)、意大利、日本、??老撾、泰國(guó)等五種黑米中的酚類(lèi)化合物，自由酚類(lèi)化合物測(cè)得總多酚提取率為??１２??

２．３．３不同黑米多酚提取物中總黃酮含量??不同提取物樣品中總黃酮的含量以單位質(zhì)量?jī)龈煞壑械膬翰杷禺?dāng)量表示（ｍｇ??ｃａｔｅｃｈｉｎ?ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ?（ＣＥ）?／ｇＰ）。如圖２．３所示，純化前黑米多酚提取物的總黃酮含量??為ＴＰ＞ＢＰ＞ＦＰ（Ｐ＜０．０５），未純化樣品中，以總酚提取物中總黃酮的含量最高??（７３．１３±３．４８ｍｇＣＥ／ｇＰ），分別是未純化自由酚和結(jié)合酚的４倍和２倍。與相應(yīng)未純??化提取物相比，純化后的提取物中總黃酮含量呈顯著升高（Ｐ＜?０．０５），其中，純化后??的總酚提取物總黃酮最高，含量為１０７．５０±１．２３ｍｇＣＥ／ｇＰ，是純化后自由酚、結(jié)合酚??提取物的２倍左右。??以每克干黑米中各提取物的黃酮提取率為指標(biāo)進(jìn)行比較，各樣品中總黃酮為??０．７９？３．７９?ｍｇ?ＣＥ／ｇ黑米。王磊等［７６］以黑龍江五常黑米為原料，在最佳工藝參數(shù)條件??下得到黑米總黃酮的提取率為３．８０％，與本研宄結(jié)果基本一致。孫玲等［２５］對(duì)我國(guó)各地??區(qū)共７４份黑米資源的總黃酮含量進(jìn)行分析

２．３．４不同黑米多酚提取物中花青素含量??不同提取物樣品中花青素的含量以單位質(zhì)量?jī)龈煞壑械氖杠?chē)菊－３－葡萄糖苷當(dāng)量??表示（ｍｇＣｙａｎｉｄｉｎ－３－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ?（Ｃｙ－３－Ｇ）?／ｇＰ）。如圖２．４所示，單位質(zhì)量?jī)龈煞鄣幕??青素含量為ＴＰ＞ＦＰ＞ＢＰ（Ｐ＜０．０５），未純化樣品中，以總酚提取物中花青素的含量??最高，為１４．６７±０．３４ｍｇＣｙ－３－Ｇ／ｇＰ，分別是未純化自由酚和結(jié)合酚的１．４倍、２２倍。??與相應(yīng)未純化提取物相比，純化后的總酚和自由酚提取物中花青素含量顯著升高（Ｐ??＜０．０５），其中，總釀提取物花青素含量為２０．７９±０．５５ｍｇＣｙ－３－Ｇ／ｇＰ，是未純化的１．４??倍，而自由酚提取物花青素含量超過(guò)總酚提取物，達(dá)到２２．０３±０．３１ｍｇＣｙ－３－Ｇ／ｇＰ，??是純化后結(jié)合酚提取物的３１倍。??以每克干黑米中各提取物的花青素提取率為指標(biāo)進(jìn)行比較，各樣品中花青素為??０．０１？０．７６?ｍｇ?Ｃｙ－３－Ｇ／ｇ黑米，純化后的自由酚中花青素含量略高于總酚提取物，可能??是純化過(guò)程中總酚提取物損失較多所致
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2890546