發(fā)布時間：2020-11-09 11:29

　　 硒多糖是一種兼具硒與多糖雙重活性的有機硒化合物,因其生物利用度高、毒性低而成為新的研究熱點,具有抗氧化、抗腫瘤、提高機體免疫等多種活性。本論文的研究對象-富硒茶多糖,是從富硒黑茶中提取分離得到的硒多糖,不僅具有多糖的生物活性,且具有良好的應(yīng)用前景,但當(dāng)前國內(nèi)外對其研究報道比較少,尤其是關(guān)于富硒黑茶多糖的結(jié)構(gòu)特征及活性上的研究。本論文以湖北富硒黑茶為原料,采用熱水浸提-乙醇沉淀的方法提取富硒黑茶多糖,并利用DEAE-Sepharose FF分離純化硒多糖,而后對硒多糖進行了理化組成分析,結(jié)構(gòu)表征及體外活性的研究。主要研究結(jié)果如下:(1)通過對富硒黑茶原料的基本成分分析,富硒黑茶的硒含量符合國家對于富硒食品定義中硒含量的規(guī)定要求。富硒黑茶多糖提取單因素實驗結(jié)果表明:提取溫度為90℃最合適,提取時間為2h最佳,提取料液比為1:20最優(yōu)。而后通過響應(yīng)面設(shè)計軟件對富硒黑茶多糖提取工藝進行優(yōu)化設(shè)計,得到最佳提取溫度為94.2℃,最佳提取時間為1.64 h,最佳提取料液比為1:20.56,理論得率為6.0%。通過響應(yīng)面分析可知提取時間和提取料液比對多糖得率的影響為極顯著(P0.01),提取溫度對多糖得率的影響為顯著P=0.0393(P0.05)。由于實際操作的限制,因而在驗證性實驗中最終設(shè)定提取溫度為95℃,提取時間為2h,提取料液比為1:20。在這樣的提取條件下多糖得率為6.00%左右,與理論得率誤差在2%范圍內(nèi)波動,符合設(shè)計要求。提取后的富硒黑茶粗多糖經(jīng)DEAE Sepharose Fast Flow分離,最后經(jīng)UV在490nm下測定吸光度值。通過收集不同洗脫時間節(jié)點下的組分,得到6組洗脫組分峰。洗脫分離的各個組分酸性糖測定實驗表明,洗脫的六個組分的糖醛酸含量均較高,是典型的酸性多糖。(2)通過對富硒黑茶多糖粗品和6種純化組分進行紫外全波長掃描得出富硒黑茶多糖粗品和分離洗脫組分均在280nm處無明顯吸收峰,說明富硒黑茶多糖均不含有芳香族氨基酸。而通過聚丙烯氨酰胺凝膠電泳可知富硒黑茶多糖粗品和6種純化組分均不含游離的蛋白。紅外光譜結(jié)果表明富硒黑茶多糖以及6種純化組分都具有典型的多糖類吸收峰。凝膠反滲透色譜結(jié)果表明富硒黑茶多糖具有較高的分子量且含有酰胺鍵,可初步推斷其為糖蛋白結(jié)合物。離子色譜結(jié)果表明富硒黑茶多糖純化組分中單糖組成單糖含量最高為11種,最低為10種。由掃描電鏡和原子力顯微鏡的結(jié)果可知,富硒黑茶多糖的純化組分在表觀結(jié)構(gòu)、表面平整度方面均具有明顯差異。XRD衍射分析可知富硒黑茶多糖粗品和純化組分在晶體形成方面差異顯著。而DSC分析結(jié)果表明富硒黑茶多糖純化組分之間熱特性變化均具有顯著差異。(3)ABTS~+自由基清除實驗表明,富硒黑茶多糖粗品及各純化組分對ABTS~+自由基清除活性與對照組相比差異顯著,但各組分之間無明顯差異。超氧陰離子自由基清除實驗表明,富硒黑茶多糖粗品及各純化組分與對照組相比差異顯著,但各組分之間無顯著差異。α-葡萄糖苷酶抑制率實驗結(jié)果表明富硒黑茶多糖粗品及各純化組分均對α-葡萄糖苷酶有顯著抑制活性并且和陽性對照阿卡波糖組相比差異不顯著。通過人工胃液體外消化實驗可知經(jīng)提取純化獲得的富硒黑茶多糖不易被胃液消化。而經(jīng)人工腸液的體外消化實驗可知富硒黑茶多糖粗品及其組分亦不易被腸液消化。(4)通過對高得率、高平整度組分4進一步分離純化,得到了均一組分,并對均一組分進行超氧陰離子自由基和ABTS~+自由基的清除率分析。結(jié)果表明自由基清除活性與均一組分濃度呈正相關(guān),且濃度在1mg/ml時ABTS自由基清除率達到80%,超氧陰離子自由基能達到70%。
【學(xué)位單位】：上海師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.2
【部分圖文】：

Pb 沒有檢出，Co、Ni、Cu、Cd 在富硒黑茶原料中都能多糖中沒有檢出，Cr 元素都能檢出但是富硒黑茶粗多糖中十倍。Xie 和 Nie[98]等使用 ICP-MS 研究了茶葉粗多糖中 Zn元素，濃度分別為 25.72、2354、77.47、6.432 和 0.001mg/kg用 ICP-AES 研究了青錢柳多糖中 18 種礦質(zhì)元素，結(jié)果表明e、Mn 和 P 的濃度范圍 274.5±10.3 到 5980.0±102.7mg/kg，而b、Cu 和 As 濃度范圍 0.9±0.1 到 37.1±4.2mg/kg，Ni、Cd、V硒黑茶多糖提取單因素實驗結(jié)果取溫度對富硒黑茶多糖得率的影響時間、提取料液比相同的條件下，考察不同的提取溫度（50、90℃、100℃）對多糖得率的影響，其結(jié)果如圖 2-1。由圖 50℃-90℃區(qū)間呈現(xiàn)遞增的趨勢，在 90℃-100℃有下降的趨

圖 2-2 提取時間對多糖得率的影響Fig 2-2 Effect of extraction time on polysaccharides yield提取料液比對多糖的得率的影響取溫度、提取時間相同的條件下，考察不同的提取料液比:15、1:20）對多糖得率的影響，其結(jié)果如圖 2-3。由圖 2液比 1:5-1:15 呈現(xiàn)明顯遞增的趨勢，在 1:15 以后呈現(xiàn)下降

圖 2-2 提取時間對多糖得率的影響Fig 2-2 Effect of extraction time on polysaccharides yield3 提取料液比對多糖的得率的影響提取溫度、提取時間相同的條件下，考察不同的提取料液比（11:15、1:20）對多糖得率的影響，其結(jié)果如圖 2-3。由圖 2-3 可料液比 1:5-1:15 呈現(xiàn)明顯遞增的趨勢，在 1:15 以后呈現(xiàn)下降的趨
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本文編號：2876359