發(fā)布時間：2025-01-01 05:33

　　目的:開發(fā)一種快速、穩(wěn)定的離線多維色譜分離純化方法,用于神經(jīng)節(jié)苷脂的單體制備,開展神經(jīng)節(jié)苷脂類物質(zhì)的質(zhì)譜解析規(guī)律研究,為神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)解析奠定基礎(chǔ)。方法:在單體的分離純化方面,以實驗室自主研發(fā)的X5H色譜柱,采用不同極性的溶劑進(jìn)行洗脫,實現(xiàn)了按照唾液酸數(shù)量的不同依次分級分離的效果,最終獲得了GA(去唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)、GM(單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)、GD(雙唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)、GT(三唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)、GQ(四唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂)等一維產(chǎn)物。對分級分離獲得的一維產(chǎn)物采用自制的C8HC反相色譜填料進(jìn)行二維純化,最終獲得了一系列的神經(jīng)節(jié)苷脂單體。在單體結(jié)構(gòu)表征方面,利用神經(jīng)節(jié)苷脂的對照品,總結(jié)出神經(jīng)節(jié)苷脂二級質(zhì)譜斷裂規(guī)律,并將其應(yīng)用到制備的單體化合物中開展了結(jié)構(gòu)解析工作;在神經(jīng)節(jié)苷脂糖鏈母核鑒定方面,首先通過化學(xué)降解方法去掉脂鏈結(jié)構(gòu)獲得糖鏈結(jié)構(gòu),而后采用酶解方式除去糖鏈結(jié)構(gòu)中的唾液酸獲得糖鏈母核結(jié)構(gòu),通過與不同的糖鏈母核對照品色譜及質(zhì)譜的比對,對單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂的組成及含量進(jìn)行深度分析。結(jié)果:采用離線二維色譜分離純化的方法,最終獲得了28個神經(jīng)節(jié)苷脂單體。利用對照品總結(jié)了質(zhì)譜斷裂規(guī)律,并依據(jù)...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1 GM1的結(jié)構(gòu)式(a),GM1的結(jié)構(gòu)簡式(b)及神經(jīng)節(jié)苷脂的命名規(guī)則(c)

神經(jīng)節(jié)苷脂的命名通常采用Svennerholm法:字母“G"代表神經(jīng)節(jié)苷脂;用A、M、D、T、Q、P、H分別表示神經(jīng)節(jié)苷脂中含有0～6個唾液酸;圖1-1中形象的說明了神經(jīng)節(jié)苷脂縮寫名稱中各部分的含義。神經(jīng)節(jié)苷脂中神經(jīng)酰胺的結(jié)構(gòu)通常表示在糖鏈后的括號內(nèi),比如GM1(d18:1/2....

圖1-2常見的神經(jīng)節(jié)苷脂及其結(jié)構(gòu)

圖1-1GM1的結(jié)構(gòu)式(a),GM1的結(jié)構(gòu)簡式(b)及神經(jīng)節(jié)苷脂的命名規(guī)則(c)神經(jīng)節(jié)苷脂屬于鞘糖脂的一種,因此神經(jīng)節(jié)苷脂糖鏈部分除上述唾液酸和寡糖數(shù)目的變化外,其母核結(jié)構(gòu)也存在一定的變化和差異,表1-1為部分鞘糖脂的結(jié)構(gòu)[25],這些母核結(jié)構(gòu)也會組成少量的神經(jīng)節(jié)苷脂。

圖2-1神經(jīng)節(jié)苷脂一維制備譜圖

圖2-1為神經(jīng)節(jié)苷脂一維制備譜圖,按圖中所示,一共收集了14個餾分,分別標(biāo)記為F1^F14,其中F1為上樣流出液,體積為200mL,其余餾分為不同極性溶劑洗脫餾分,體積均為80mL。利用該方法分離神經(jīng)節(jié)苷脂粗提物,一共制備3次且重復(fù)性良好。為了分析每個餾分....

圖2-2不同p H值下,神經(jīng)節(jié)苷脂在反相色譜柱上的保留情況

神經(jīng)節(jié)苷脂在反相色譜上經(jīng)常發(fā)生色譜峰形拖尾的現(xiàn)象,在流動相中加入緩沖鹽,可屏蔽神經(jīng)節(jié)苷脂中含帶負(fù)電的唾液酸的影響,有利于改善峰形[77]。緩沖鹽溶液的pH值是影響色譜峰形的重要因素,因此,我們探究了使用不同pH值緩沖鹽作為流動相神經(jīng)節(jié)苷脂樣品的分離情況。圖2-2為不同的pH值條件....

本文編號：4022111