利用萌動的成熟胚作外植體進行基因轉化,可有效提高高粱轉基因材料選育的效率。為了建立并完善以高粱萌動種胚作為外植體的遺傳轉化體系,本研究以高粱材料Is-623為轉化受體,質粒pM3301UbiSpCP4為外源基因供體,采用農桿菌介導法進行遺傳轉化,并對轉化的關鍵因素進行分析。結果表明,麥草畏（dicamba）誘導高粱萌動的成熟胚產生愈傷組織適宜濃度約為5 mg·L^-1;農桿菌侵染時間為2 h時遺傳轉化效率較高;經(jīng)篩選共獲得301塊抗性愈傷組織,75個轉化事件,經(jīng)PCR、Southern blotting雜交分析、CP4-EPSPS蛋白檢測試紙條檢測及田間草甘膦耐性鑒定,最終獲得草甘膦耐性等級1級株系6株,耐性等級2級株系3株的轉基因高粱株系。本研究初步建立了以高粱萌動種胚作為外植體的遺傳轉化體系,為高粱遺傳轉化體系的研究和應用奠定了基礎。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 受體材料
        1.1.2 菌株與質粒
        1.1.3 培養(yǎng)基配方
            1)侵染培養(yǎng)基:
            2)共培養(yǎng)基:
            3)愈傷組織誘導培養(yǎng)基:
            4)篩選培養(yǎng)基:
            5)再生培養(yǎng)基:
            6)生根培養(yǎng)基:
    1.2 試驗方法
        1.2.1 外植體的準備
        1.2.2 農桿菌的活化與外植體的侵染、轉化、篩選、再生
        1.2.3 麥草畏對高粱成熟萌動胚愈傷組織誘導的影響
        1.2.4 侵染時間對高粱愈傷組織轉化效率的影響
        1.2.5 轉化株的PCR檢測
        1.2.6 轉化植株的Southern blotting分析
        1.2.7 轉基因高粱CP4-EPSPS基因表達產物的測定
        1.2.8 轉基因高粱耐草甘膦性能的鑒定
2 結果與分析
    2.1 轉CP4-EPSPS基因高粱植株的獲得
    2.2 麥草畏對高粱成熟萌動胚愈傷組織誘導的影響
    2.3 農桿菌侵染時間對高粱遺傳轉化效率的影響
    2.4 轉基因植株的PCR分析
    2.5 轉基因植株Southern blotting分析
    2.6 轉基因高粱CP4-EPSPS基因表達產物的測定
    2.7 轉基因高粱耐草甘膦性能的鑒定
3 討論
4 結論



本文編號：4005575