發(fā)布時(shí)間：2024-10-17 13:09

　　昆蟲(chóng)的嗅覺(jué)在其生命活動(dòng)過(guò)程中起著重要作用,許多研究表明氣味結(jié)合蛋白(OBPs)參與了識(shí)別外界物質(zhì)的第一步,但對(duì)于OBPs在昆蟲(chóng)中確切的生理功能并不是很清晰。稻縱卷葉螟Cnaphalocrocis medinalis是水稻上重要的害蟲(chóng),我們通過(guò)觸角轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,鑒定了多個(gè)CmedOBPs基因,但對(duì)于CmedOBPs在其嗅覺(jué)感受中的功能并不是很清晰。為此,本課題擬以稻縱卷葉螟為研究對(duì)象,在克隆其CmedOBPs基因及CmedOBPs基因表達(dá)模式分析的基礎(chǔ)上,通過(guò)體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)并結(jié)合RNAi技術(shù),對(duì)CmedOBPs的功能進(jìn)行探索,以期為明確稻縱卷葉螟寄主定位的分子機(jī)制提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.稻縱卷葉螟翅和足的掃描電鏡觀察掃描電鏡的結(jié)果顯示,稻縱卷葉螟雌雄成蟲(chóng)翅上主要有非嗅覺(jué)感器鱗形和刺形兩種感器。稻縱卷葉螟的足上除了嗅覺(jué)感器錐形和毛形感器外還有鱗形感器、刺形感器和Bohm鬃毛3種非嗅覺(jué)感器,數(shù)量統(tǒng)計(jì)顯示前足感器多于后足,后足多于中足。雌雄翅及足上的感器無(wú)性二型現(xiàn)象。2.稻縱卷葉螟CmedOBPs基因克隆及序列分析本實(shí)驗(yàn)成功克隆出 CmedOBP5、CmedOBP8、CmedOBP10、Cm...

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
技術(shù)路線
縮略語(yǔ)表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物揮發(fā)物簡(jiǎn)介
    1.2 昆蟲(chóng)對(duì)氣味物質(zhì)的識(shí)別
    1.3 氣味結(jié)合蛋白(OBPs)的特征及功能
    1.4 OBPs的研究方法
    1.5 稻縱卷葉螟簡(jiǎn)介
    1.6 研究目的和意義
第二章 稻縱卷葉螟翅與足的掃描電鏡
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試蟲(chóng)源
        2.1.2 樣品制備與觀察
        2.1.3 觸角感器的鑒定與命名
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 稻縱卷葉螟翅上感器的掃描
        2.2.2 稻縱卷葉螟足上感器的掃描
    2.3 討論
第三章 稻縱卷葉螟OBPs基因的克隆及序列分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        3.1.2 供試試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 稻縱卷葉螟PCR模板的制備
        3.1.5 稻縱卷葉螟CmedOBPs基因的克隆
    3.2 結(jié)果分析
        3.2.1 稻縱卷葉螟6個(gè)CmedOBPs基因的分析
        3.2.2 稻縱卷葉螟OBPs基因的克隆
    3.3 討論
第四章 稻縱卷葉螟OBPs基因的時(shí)空表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 樣品RNA的提取
        4.1.5 cDNA第一條鏈的合成
        4.1.6 引物設(shè)計(jì)及合成
        4.1.7 qPCR反應(yīng)
        4.1.8 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果和分析
        4.2.1 引物特異性和擴(kuò)增效率檢測(cè)
        4.2.2 稻縱卷葉螟CmedOBPs基因的時(shí)空表達(dá)
    4.3 討論
第五章 稻縱卷葉螟OBPs的表達(dá)、純化及結(jié)合特性分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 供試試劑
        5.1.2 主要儀器設(shè)備
        5.1.3 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.1.4 目的蛋白的表達(dá)
        5.1.5 熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合
        5.1.6 熒光猝滅
        5.1.7 數(shù)據(jù)分析
    5.2 結(jié)果分析
        5.2.1 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 目的蛋白的表達(dá)與純化
        5.2.3 熒光競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合
        5.2.4 CmedOBP14與揮發(fā)物的結(jié)合特性
        5.2.5 CmedOBP5與揮發(fā)物的結(jié)合特性
        5.2.6 熒光猝滅結(jié)果
    5.3 討論
第六章 行為活性物質(zhì)的篩選
    6.1 材料與方法
        6.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.1.3 主要儀器
        6.1.4 CmedOBP14基因的干擾
        6.1.5 觸角電位(EAG)反應(yīng)
        6.1.6 H型嗅覺(jué)實(shí)驗(yàn)
        6.1.7 數(shù)據(jù)處理與分析
    6.2 結(jié)果分析
    6.3 討論
第七章 結(jié)果與展望
    7.1 主要結(jié)果
    7.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4008049