發(fā)布時(shí)間：2020-12-03 15:47

　　飼料桑作為一種適應(yīng)能力強(qiáng)、營養(yǎng)豐富的生物飼料資源,可以緩解我國畜牧業(yè)快速發(fā)展與飼料嚴(yán)重匱乏的矛盾。但是由于桑葉細(xì)胞壁中木質(zhì)素的存在,影響了飼料的消化率,導(dǎo)致營養(yǎng)價(jià)值降低,利用率下降。為了弄清桑葉木質(zhì)素含量及其木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵酶基因的表達(dá)差異,以期為低木質(zhì)素含量品種桑樹的選育提供參考。本研究以桑樹為材料,克隆了木質(zhì)素生物合成途徑中的2個(gè)關(guān)鍵基因COMT、CCoAOMT,并構(gòu)建了CCoAOMT-BL21表達(dá)載體,在大腸桿菌中成功表達(dá)。通過熒光定量PCR技術(shù)分析這兩個(gè)基因以及在川桑中已經(jīng)克隆得到的CAD、CCR、F5H三個(gè)關(guān)鍵基因在不同桑樹品系、不同組織、不同時(shí)期中的表達(dá)情況,并對不同品系、不同時(shí)期桑葉總木質(zhì)素含量進(jìn)行測定。本論文通過基因克隆與表達(dá)分析,取得如下主要成果:1、桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCOMT）的克隆和序列分析咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶是一種雙功能的甲基轉(zhuǎn)移酶,能夠催化羥基肉桂醇芳香環(huán)上C3和C5位置的甲基化生成阿魏酸和芥子酸,在控制木質(zhì)素的合成中具有重要作用。以魯桑品種育71-1頂端幼葉cDNA為模板,克隆了桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因,命名為MmCOMT（GenBan... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究的目的和意義
    1.2 研究現(xiàn)狀
        1.2.1 桑葉用作家禽飼料
        1.2.2 木質(zhì)素的研究進(jìn)展
        1.2.3 咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因
        1.2.4 咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶基因
        1.2.5 木質(zhì)素生物合成途徑中其它關(guān)鍵基因
    1.3 研究內(nèi)容
        1.3.1 桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）基因的克隆及序列分析
        1.3.2 桑樹咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶（CCoAOMT）基因的克隆及序列分析
        1.3.3 桑樹不同品系、不同組織和采收時(shí)期基因表達(dá)水平及桑葉總木質(zhì)素相對含量分析
第2章 桑樹咖啡酸O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCOMT）克隆及序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 桑樹總RNA提取
        2.2.2 cDNA第1 鏈的合成
        2.2.3 桑樹COMT基因克隆引物的設(shè)計(jì)
        2.2.4 桑樹COMT基因的克隆
        2.2.5 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.6 COMT基因目的片段與載體的連接
        2.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.8 桑樹COMT基因序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 桑樹COMT基因CDS序列的克隆
        2.3.2 桑樹COMT基因及編碼蛋白質(zhì)的序列分析
        2.3.3 桑樹COMT基因編碼氨基酸序列的同源性比對與系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.4 結(jié)論與討論
第3章 桑樹咖啡酰輔酶A-O甲基轉(zhuǎn)移酶基因（MmCCoAOMT）克隆、序列分析及原核表達(dá)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑（同2.1）
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 桑樹總RNA提�。ㄍ�2.2.1）
        3.2.2 cDNA第一鏈的合成（同2.2.2）
        3.2.3 桑樹CCoAOMT基因克隆引物的設(shè)計(jì)
        3.2.4 桑樹CCoAOMT基因的克隆
        3.2.5 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備（同2.2.5）
        3.2.6 CCoAOMT基因目的片段與載體的連接
        3.2.7 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化（同2.2.7）
        3.2.8 桑樹CCoAOMT基因序列分析
        3.2.9 桑樹CCoAOMT基因的原核表達(dá)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 桑樹CCoAOMT基因CDS序列的克隆
        3.3.2 桑樹CCoAOMT基因及編碼蛋白質(zhì)的序列分析
        3.3.3 桑樹CCoAOMT基因編碼氨基酸序列的同源性比對與系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.3.4 桑樹CCoAOMT基因的原核表達(dá)分析
    3.4 結(jié)論和討論
第4章 桑樹CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達(dá)水平與總木質(zhì)素含量分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑
        4.1.1 qRT-PCR所需儀器與試劑
        4.1.2 木質(zhì)素含量的測定所需儀器與試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 基因表達(dá)熒光定量PCR相關(guān)引物的設(shè)計(jì)
        4.2.2 桑樹不同品系、不同組織、不同采收時(shí)期CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達(dá)的熒光定量PCR
        4.2.3 桑葉總木質(zhì)素相對含量的測定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 不同桑品系CAD、CCR、F5H、COMT、CCoAOMT基因表達(dá)水平
        4.3.2 桑樹總木質(zhì)素相對含量
    4.4 結(jié)論和討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黑莓果實(shí)發(fā)育成熟期木質(zhì)素合成CAD酶及其基因表達(dá)[J]. 張春紅,熊振豪,吳文龍,李維林.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2019(01)
[2]珙桐DiCCoAOMT1基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 吳小波,李梅,李萌,董旭杰,彭繼慶,胥雯,曹福祥.  中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(07)
[3]甜菜BvM14-CCoAOMT基因的克隆、表達(dá)及生物信息學(xué)分析[J]. 呂笑言,王宇光,金英.  黑龍江大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào). 2018(03)
[4]水芹肉桂醇脫氫酶基因的克隆與表達(dá)特性分析[J]. 仇亮,朱勝琪,王永鑫,馮凱,劉潔霞,熊愛生.  西北植物學(xué)報(bào). 2018(06)
[5]香椿TsCCR基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 隋娟娟,孫晶晶,楊京霞,劉佩冉,寧偉,宋雨婷,屈長青.  分子植物育種. 2018(17)
[6]尾葉桉COMT和CCoAOMT基因定向調(diào)控木質(zhì)素單體合成的煙草轉(zhuǎn)化研究[J]. 陳博雯,劉海龍,肖玉菲,覃子海,張燁,張曉寧.  中國生物工程雜志. 2018(03)
[7]桑葉粉對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響[J]. 邱時(shí)秀,雷春龍,李娟,許禎瑩,吳永勝,孫越鴻,李帥東.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2017(22)
[8]甘藍(lán)型和白菜型油菜肉桂酰輔酶A還原酶1基因的克隆與表達(dá)[J]. 侯維海,王建林,旦巴,胡單.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(11)
[9]象草CpCCoAOMT2基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 吳娟子,錢晨,張建麗,劉智微,鐘小仙,顧洪如.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(16)
[10]芹菜品種‘六合黃心芹’AgCCoAOMT基因的克隆及表達(dá)特性分析[J]. 苑笑陽,吳雪君,聶力,許珂,熊愛生.  植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào). 2016(03)

碩士論文
[1]蜜柚木質(zhì)素合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究[D]. 徐玉.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[2]桑樹木質(zhì)素合成基因的生物信息和功能分析[D]. 范麗.西南大學(xué) 2013
[3]桑葉對肉羊生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)、免疫抗氧化功能和肉品質(zhì)的影響[D]. 李偉玲.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]苧麻COMT與CCoAOMT基因的克隆及其反義表達(dá)載體的構(gòu)建[D]. 章霄云.華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：2896389