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論述NF-κB信號通路的影響及其臨床意義

發(fā)布時間:2014-07-24 11:52

  本文是一篇專業(yè)的醫(yī)學(xué)論文,主要是NF-κB信號通路的影響及其臨床意義進(jìn)行闡述,詳情請看下面的介紹。

  本研究基于中醫(yī)學(xué)理論及筆者的臨床經(jīng)驗(yàn),結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展,通過制備內(nèi)毒素型急性肺損傷兔模型,觀察中藥制劑血必凈注射液對ALI肺組織NF-κB的活性變化,探討血必凈注射液是否通過拮抗內(nèi)毒素、抑制炎性介質(zhì)釋放和保護(hù)內(nèi)皮功能等機(jī)制而發(fā)揮治療作用,為中西醫(yī)結(jié)合方法治療ALI提供理論依據(jù),提高搶救成功率。

  1 材料與方法

  1.1 材料

  脂多糖、內(nèi)毒素脂多糖(LPS)及試劑盒購自廣州晶美生物技術(shù)有限公司(代理美國Sigma公司產(chǎn)品)。NF-κB的同源結(jié)合序列由北京奧科生物技術(shù)公司合成并行末端生物素標(biāo)記。血必凈注射液由天津紅日藥業(yè)股份有限公司提供,批準(zhǔn)文號:Z20040033,每支10 mL。有效成分是由中藥原料藥紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸中提取,其提取物的有效成分包括紅花黃色素A、川芎嗪、丹參素、阿魏酸、芍藥苷、原兒茶醛等。其中紅花黃色素A濃度>0.5 mg/mL,芍藥苷濃度>1.0 mg/mL,阿魏酸濃度>0.01 mg/mL。

  1.2 動物模型及分組

  1.2.1 分組 取新西蘭兔80只(雄性),體重2.0~2.5 kg,按隨機(jī)方法分為四組:空白對照組、單純急性肺損傷(LPS)組、單純血必凈(XBJ)組、血必凈治療(LPS+XBJ)組,各20只。

  1.2.2 動物模型制作 1%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔麻醉,經(jīng)耳緣靜脈注入內(nèi)毒素LPS,制成急性肺損傷的動物模型。

  1.2.3 干預(yù)方法 空白對照組給予生理鹽水10 mL注射,LPS組僅注射LPS 5 mg/kg,XBJ組僅注射血必凈5 mL/kg,LPS+XBJ組注射LPS 5 mg/kg+血必凈5 mL/kg靜脈注射。

  1.3 觀察指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)

  1.3.1 血流動力學(xué)變化 通過生物多導(dǎo)儀觀察實(shí)驗(yàn)前后血流動力學(xué)變化,包括呼吸頻率、心率、體溫、動脈和靜脈氧分壓、體重等,在所需觀察時間內(nèi)抽取血液標(biāo)本。

  1.3.2 動物模型制作成功的病理指標(biāo) LPS致傷后半小時處死動物,肺臟體積增大,表面可見大小不等的暗紅色斑片狀病灶,切面可有淡紅或白色泡沫樣液體溢出;光鏡下觀察,肺組織內(nèi)有白細(xì)胞浸潤,可見肺間質(zhì)及肺泡水腫,肺出血明顯。肺組織濕/干(W/D)比值明顯升高。

  1.3.3 肺組織病理形態(tài)變化 于12、24、36、48 h分批處死后分離肺組織后,取右肺組織進(jìn)行組織切片在光鏡、電鏡觀察病理形態(tài)變化。

  1.3.4 NF-κB活性測定 分離左肺組織,采用4℃生理鹽水進(jìn)行左肺灌洗,收集灌洗液,取搖勻的灌洗液原液1滴,作細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)。灌洗液離心,細(xì)胞沉渣涂片做Wrigh-Giemsa染色,筆耕文化傳播,鏡下分類,計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞(PMN),采用凝膠電泳遷延率法(EMSA)加計(jì)算機(jī)輔助圖像分析技術(shù)檢測白細(xì)胞NF-κB活性(按試劑盒說明操作)。

  1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

  使用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,重復(fù)測量的計(jì)量資料采用方差分析,樣本均數(shù)之間的兩兩比較用q檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

  2 結(jié)果

  與空白對照組比較,LPS組各時間點(diǎn)肺組織NF-κB表達(dá)量均明顯增高(P < 0.01);與LPS組相同時間點(diǎn)比較,LPS+XBJ組24、36、48 h肺組織NF-κB表達(dá)量明顯減少(P < 0.01);與空白對照組比較,XBJ組各時間點(diǎn)肺組織NF-κB表達(dá)量有一定減少,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。見表1。

  3 討論

  既往臨床報(bào)道顯示,接近半數(shù)的膿毒癥患者發(fā)生ALI,進(jìn)而發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),后者為膿毒癥患者的主要死因之一。ALI發(fā)生時,肺組織中炎性因子大量表達(dá),參與ARDS的發(fā)生發(fā)展。NF-κB是一組可被數(shù)百種上游因子激活的多效因子,其通過多條信號通路參與復(fù)雜的炎癥反應(yīng)。既往研究顯示,NF-κB是膿毒癥炎癥反應(yīng)的樞紐環(huán)節(jié),其上游因子包括TLRs、TNF-α、COX-2等,由于單純下調(diào)某一上游因子并不能從根本上阻止ALI的進(jìn)展,因此本研究選取NF-κB作為研究對象。

  張克君等[2]向大鼠胰膽管逆行注入5%牛磺膽酸鈉誘導(dǎo)ALI模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺組織NF-κB在6 h后開始增加,24 h增加最明顯,而給予NF-κB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的干預(yù)組,各時間點(diǎn)相應(yīng)肺組織NF-κB含量明顯降低,且NF-κB的下游因子PUMA表達(dá)水平亦明顯降低,肺泡Ⅱ型細(xì)胞上皮凋亡明顯較模型組輕。故他們認(rèn)為NF-κB活化進(jìn)而上調(diào)下游因子PUMA表達(dá),促進(jìn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡,而在ALI過程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示,兔在注射LPS誘導(dǎo)ALI后,病程早中期NF-κB大量表達(dá),至36 h達(dá)到峰值,隨后逐漸平穩(wěn)并出現(xiàn)降低趨勢,提示在ALI的早中期,促炎反應(yīng)占優(yōu)勢,而后期則轉(zhuǎn)為抗炎反應(yīng)占優(yōu)勢。由于ALI發(fā)展成為ARDS的根本原因在于內(nèi)毒素可造成大量炎性介質(zhì)釋放,產(chǎn)生“瀑布”效應(yīng),促抗炎平衡隨之被破壞。而NF-κB是ALI中發(fā)揮重要角色的因子,其在多條炎性通路中占據(jù)上游位置,阻斷NF-κB的活化,就可能抑制肺組織細(xì)胞的凋亡過程,延緩ALI的發(fā)展。血必凈是由丹參、當(dāng)歸、赤芍、川芎、紅花五味中藥經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取其有效成分制成,主要成分為丹參素、芍藥苷、阿魏酸、紅花黃色素、川芎嗪等,既往動物實(shí)驗(yàn)及臨床資料均顯示血必凈具有降低MODS死亡率的作用[3-6]。本次研究結(jié)果顯示,血必凈顯著抑制了ALI兔模型的NF-κB表達(dá),從而減輕了ALI,而未注射內(nèi)毒素的XBJ組并未表現(xiàn)出NF-κB表達(dá)的明顯抑制,提示血必凈可能通過對內(nèi)毒素的抑制作用阻斷NF-κB的活化過程,而對正常機(jī)體的NF-κB信號通路無明顯影響。

  綜上所述,血必凈可通過下調(diào)ALI肺組織中NF-κB的表達(dá)水平,阻斷其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)通路,抑制肺組織細(xì)胞的凋亡過程,而對正常肺組織中的NF-κB表達(dá)并無明顯影響,具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值。血必凈的具體作用機(jī)制及其是否對內(nèi)毒素產(chǎn)生直接的抑制作用,尚需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

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本文編號:5309

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