目的:探討體外培養(yǎng)人早孕絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞在含有抗子宮內(nèi)膜抗體(EmAb)血清環(huán)境中細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)及凋亡相關(guān)蛋白因子配體(factor associated suicide ligend,FasL)的表達(dá)情況。 方法:抽取在我院門診就診的EmAb陽性而其它與自然流產(chǎn)相關(guān)的免疫性抗體陰性的病人肘靜脈血5ml用于EmAb(+)血清處理組,同法取5ml各相關(guān)免疫性抗體均陰性的正常育齡婦女血清用于EmAb(-)血清處理組。靜脈血靜置、離心后取上清-80℃保存?zhèn)溆?作為實(shí)驗(yàn)干預(yù)條件。無菌條件下獲取正常妊娠6～8周早孕絨毛組織,經(jīng)胰蛋白酶/DNA酶Ⅰ聯(lián)合消化,Percoll密度梯度離心法對得到的細(xì)胞進(jìn)行純化并培養(yǎng),將最終獲得的CTs應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法對其進(jìn)行純度鑒定,并同時傳代培養(yǎng)。將傳1-2代的CTs分為2組:EmAb(+)血清處理組和EmAb(-)血清處理組,分別加入EmAb(+)血清處理和EmAb(-)血清處理并培養(yǎng),于0h、48h、72h、96h,分別經(jīng)過臺盼藍(lán)排出試驗(yàn)觀察CTs的活力、計(jì)算細(xì)胞存活率;采用DNA末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記法(lebe...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1人絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞原代培養(yǎng),呈不規(guī)則多邊形生長,排列緊密、分裂增殖明顯(×400)

色示絕大多數(shù)貼壁生長的細(xì)胞CK7陽性,V9陰性,顯微鏡下計(jì)數(shù)5個視野中每100個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)為(92.60±1.56)%。見圖1、圖2。2.2　TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡率　DNA末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位缺口末端標(biāo)記陽性染色檢測絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡,鏡下見各組凋亡的絨毛滋養(yǎng)細(xì)....

圖5免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測人絨毛細(xì)胞

排列緊密，細(xì)胞邊界清晰可見(x400)圖3人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)3h后，細(xì)胞貼壁，呈圓形或多邊形(X400)

圖3人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)

圖3人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)3h后，細(xì)胞貼壁，呈圓形或多邊形(X400)圖4人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)24h后，細(xì)胞貼壁，排列緊密，形態(tài)同原代細(xì)胞相似(x400)圖5免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測人絨毛細(xì)胞細(xì)胞角蛋白7表達(dá)陽性，胞漿呈棕褐色(X400)

圖4人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培

圖3人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)3h后，細(xì)胞貼壁，呈圓形或多邊形(X400)圖4人絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞傳代培養(yǎng)24h后，細(xì)胞貼壁，排列緊密，形態(tài)同原代細(xì)胞相似(x400)圖5免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測人絨毛細(xì)胞細(xì)胞角蛋白7表達(dá)陽性，胞漿呈棕褐色(X400)

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