小菜蛾(Plutella xylostella L.)是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲(chóng),也是抗藥性產(chǎn)生和發(fā)展嚴(yán)重的害蟲(chóng)之一。由于其世代重疊嚴(yán)重,繁殖力強(qiáng),加上一些地區(qū)田間不合理的用藥,導(dǎo)致田間小菜蛾抗藥性發(fā)展迅速且抗性背景復(fù)雜,這為該蟲(chóng)的化學(xué)防治造成了較大困難。氟蟲(chóng)雙酰胺作為新型魚(yú)尼丁受體激活類(lèi)殺蟲(chóng)劑,對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)高效,對(duì)哺乳動(dòng)物低毒、安全,作用于昆蟲(chóng)后可使調(diào)控鈣離子釋放的魚(yú)尼丁受體通道持續(xù)開(kāi)放,導(dǎo)致細(xì)胞中鈣離子濃度上升,持續(xù)的鈣離子釋放會(huì)引起蟲(chóng)體不斷的收縮、嘔吐、脫糞,進(jìn)而停止進(jìn)食,最終導(dǎo)致蟲(chóng)體死亡。隨著氟蟲(chóng)雙酰胺的應(yīng)用,害蟲(chóng)對(duì)該藥劑的抗藥性問(wèn)題也日益受到關(guān)注。為了了解小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性發(fā)展情況,本文通過(guò)室內(nèi)抗性汰選及其生物適合度的研究,分析了小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)以相對(duì)敏感品系、氟蟲(chóng)雙酰胺抗性品系和田間抗性種群小菜蛾為材料,研究了抗性產(chǎn)生的可能分子機(jī)制及基因突變頻率,旨在為該藥劑的科學(xué)使用提供指導(dǎo)。研究結(jié)果如下： 1.采用點(diǎn)滴法,測(cè)定了小菜蛾3齡幼蟲(chóng)對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺三個(gè)品系/種群的毒力,結(jié)果表明,氟蟲(chóng)雙酰胺對(duì)相對(duì)敏感品系(S)小菜蛾的72h LD50為0.921μg/g...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 魚(yú)尼丁受體(RyR)及魚(yú)尼丁受體激活劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑的研究進(jìn)展
        1.1.1 魚(yú)尼丁受體的發(fā)展史
        1.1.2 魚(yú)尼丁受體的結(jié)構(gòu)
        1.1.3 魚(yú)尼丁受體的類(lèi)型
        1.1.4 化合物對(duì)魚(yú)尼丁受體功能的調(diào)節(jié)
        1.1.5 作用于魚(yú)尼丁受體殺蟲(chóng)劑的研究概況
            1.1.5.1 氟蟲(chóng)雙酰胺(flubendiamide)
            1.1.5.2 氟蟲(chóng)雙酰胺的理化性質(zhì)
            1.1.5.3 氟蟲(chóng)雙酰胺的毒性
        1.1.6 魚(yú)尼丁受體激活劑類(lèi)殺蟲(chóng)劑的作用機(jī)制
    1.2 小菜蛾的生物學(xué)及其抗藥性研究進(jìn)展
        1.2.1 小菜蛾的生物學(xué)及危害
        1.2.2 小菜蛾的抗藥性現(xiàn)狀
        1.2.3 小菜蛾的抗藥性機(jī)理研究
    1.3 魚(yú)尼丁受體基因突變頻率檢測(cè)技術(shù)
        1.3.1 Bi-PASA技術(shù)原理
        1.3.2 Bi-PASA技術(shù)特點(diǎn)及應(yīng)用
    1.4 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 供試材料
        2.1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        2.1.2 供試藥劑及化學(xué)試劑
        2.1.3 主要分子試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 試劑及培養(yǎng)基的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 小菜蛾的飼養(yǎng)
        2.2.2 氟蟲(chóng)雙酰胺對(duì)小菜蛾的毒力測(cè)定及抗性選育
        2.2.3 交互抗性的測(cè)定
        2.2.4 構(gòu)建種群生命表的方法
        2.2.5 抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力(h²)估算與抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
    2.3 PCR及Bi-PASA等方法
        2.3.1 小菜蛾RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增
            2.3.1.1 小菜蛾RNA提取
            2.3.1.2 小菜蛾總RNA的檢測(cè)
                2.3.1.2.1 小菜蛾總RNA純度檢測(cè)—分光光度法
                2.3.1.2.2 小菜蛾總RNA完整性的鑒定—瓊脂糖凝膠電泳
            2.3.1.3 引物的設(shè)計(jì)
            2.3.1.4 小菜蛾第一鏈cDNA合成
            2.3.1.5 PCR擴(kuò)增
            2.3.1.6 產(chǎn)物純化、鏈接轉(zhuǎn)化與測(cè)序
                2.3.1.6.1 產(chǎn)物的回收與純化
                2.3.1.6.2 載體連接
                2.3.1.6.3 轉(zhuǎn)化、擴(kuò)大培養(yǎng)及測(cè)序
            2.3.1.7 分析軟件
        2.3.2 小菜蛾基因突變頻率的檢測(cè)
            2.3.2.1 Bi-PASA引物設(shè)計(jì)
            2.3.2.2 小菜蛾基因組DNA提取
            2.3.2.3 Bi-PASA的檢測(cè)
        2.3.3 不同品系小菜蛾對(duì)RyR的表達(dá)量
            2.3.3.1 熒光定量PCR的引物設(shè)計(jì)
            2.3.3.2 熒光定量PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 氟蟲(chóng)雙酰胺對(duì)三種小菜蛾品系/種群的毒力測(cè)定
    3.2 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律及交互抗性
        3.2.1 氟蟲(chóng)雙酰胺對(duì)小菜蛾的抗性汰選
        3.2.2 小菜蛾氟蟲(chóng)雙酰胺抗性品系對(duì)其他藥劑的交互抗性
    3.3 小菜蛾氟蟲(chóng)雙酰胺抗性品系的生物學(xué)特性
    3.4 小菜蛾抗氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
        3.4.1 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性現(xiàn)實(shí)遺傳力
        3.4.2 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
    3.5 小菜蛾魚(yú)尼丁受體基因序列與基因突變頻率檢測(cè)
        3.5.1 小菜蛾魚(yú)尼丁受體C-末端的克隆及基因序列比對(duì)分析
        3.5.2 小菜蛾RyR基因突變頻率檢測(cè)結(jié)果分析
    3.6 RyR在不同品系小菜蛾中的表達(dá)量
        3.6.1 小菜蛾總RNA質(zhì)量檢測(cè)(PAGE法)
        3.6.2 小菜蛾總RNA純度和濃度的檢測(cè)
        3.6.3 熒光定量PCR的特異性和重復(fù)性
        3.6.4 擴(kuò)增效率
        3.6.5 不同品系小菜蛾RyR基因的表達(dá)量
4 討論
    4.1 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律
    4.2 抗氟蟲(chóng)雙酰胺小菜蛾品系的生物學(xué)特性
    4.3 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
    4.4 RyR基因突變頻率的檢測(cè)
    4.5 不同品系RyR基因表達(dá)量的檢測(cè)
    4.6 有待繼續(xù)研究的問(wèn)題
5 結(jié)論
    5.1 小菜蛾對(duì)氟蟲(chóng)雙酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
    5.2 抗氟蟲(chóng)雙酰胺小菜蛾的生物適合度
    5.3 抗氟蟲(chóng)雙酰胺小菜蛾RyR的基因突變頻率
    5.4 不同品系RyR的基因表達(dá)量的差異
本文創(chuàng)新之處
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3999146