綠僵菌（Metarhizium roberstii）是一類重要的蟲生真菌,已經(jīng)成功用于多種農(nóng)林害蟲的生物防治,但產(chǎn)孢率低是限制其應(yīng)用推廣的一個(gè)重要因素。轉(zhuǎn)錄因子是信號(hào)傳導(dǎo)途徑上重要的元件,通過調(diào)控靶標(biāo)基因的表達(dá)從而進(jìn)一步調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育,對(duì)該類因子調(diào)控產(chǎn)孢功能的研究,有助于從分子水平上了解菌株中產(chǎn)孢相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制。為探明此類轉(zhuǎn)錄因子在綠僵菌中可能的調(diào)控功能,本研究選擇了其中TEA/ATTS家族的AbaA以及APSES家族的StuA基因作為研究對(duì)象對(duì)綠僵菌中轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)孢相關(guān)調(diào)控功能進(jìn)行了深入的研究。通過對(duì)其序列及結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行初步分析,再通過基因敲除等手段獲得基因敲除突變株,對(duì)突變株在宏觀、微觀水平上的形態(tài)特征以及分子水平上的特征與野生型菌株進(jìn)行差異比較,以進(jìn)一步了解其相關(guān)功能。此外,本研究在實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上,推測(cè)綠僵菌中milRNA7（micro like RNA7）的功能可能與綠僵菌的產(chǎn)孢調(diào)控過程相關(guān)。本研究通過構(gòu)建一種可以特異性研究micro RNA功能的STTM體系,對(duì)其靶標(biāo)micro RNA的功能進(jìn)行抑制,通過分析該轉(zhuǎn)基因菌株與野生型菌株的差異以推斷該mil... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

不同真菌的APSESDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域多序列比對(duì)Fig.3-2.MultiplealignmentoftheAPSESDNA-bindingdomainfromdifferentfungi

段 StuA 下游 3-4 重組載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因菌株的on of recombinant plasmids and acq臂，片段大小分別為 1008b StuA 基因敲除重組質(zhì)粒，以基因 CDS 區(qū)序列為驗(yàn)證，野生型羅伯茨綠僵菌應(yīng)的 1050bp 大小的目的的遺傳穩(wěn)定性，將敲除株因條帶，做最后檢測(cè)(圖 31285bp對(duì)照株

可以推斷所選 ARSEF23APSES 轉(zhuǎn)錄因子基因（EF-II 進(jìn)化支 APSES 家族轉(zhuǎn)錄因子中的 StuA。基于保守的結(jié)構(gòu)以及系統(tǒng)遺傳樹的相似性，該基因被鑒定為 StuA 轉(zhuǎn)錄因子敲除等方法對(duì)其調(diào)控功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因菌株的獲得基因序列同源檢索分析，在羅伯茨綠僵菌基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)DS 序列。根據(jù)這個(gè) CDS 序列設(shè)計(jì)引物（表 3-3），通過 StuA 基因的上下游臂連入載體 pDHt-bar 質(zhì)粒的 bar 基因的長(zhǎng)度符合目的基因擴(kuò)增片段大小的產(chǎn)物（圖 3-4），利用 N測(cè)序結(jié)果，確定上下游臂是否成功連入載體中。

【參考文獻(xiàn)】：
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