發(fā)布時(shí)間：2020-12-07 20:55

　　綠僵菌（Metarhizium roberstii）是一類重要的蟲生真菌,已經(jīng)成功用于多種農(nóng)林害蟲的生物防治,但產(chǎn)孢率低是限制其應(yīng)用推廣的一個(gè)重要因素。轉(zhuǎn)錄因子是信號傳導(dǎo)途徑上重要的元件,通過調(diào)控靶標(biāo)基因的表達(dá)從而進(jìn)一步調(diào)控細(xì)胞的生長發(fā)育,對該類因子調(diào)控產(chǎn)孢功能的研究,有助于從分子水平上了解菌株中產(chǎn)孢相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制。為探明此類轉(zhuǎn)錄因子在綠僵菌中可能的調(diào)控功能,本研究選擇了其中TEA/ATTS家族的AbaA以及APSES家族的StuA基因作為研究對象對綠僵菌中轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)孢相關(guān)調(diào)控功能進(jìn)行了深入的研究。通過對其序列及結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行初步分析,再通過基因敲除等手段獲得基因敲除突變株,對突變株在宏觀、微觀水平上的形態(tài)特征以及分子水平上的特征與野生型菌株進(jìn)行差異比較,以進(jìn)一步了解其相關(guān)功能。此外,本研究在實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上,推測綠僵菌中milRNA7（micro like RNA7）的功能可能與綠僵菌的產(chǎn)孢調(diào)控過程相關(guān)。本研究通過構(gòu)建一種可以特異性研究micro RNA功能的STTM體系,對其靶標(biāo)micro RNA的功能進(jìn)行抑制,通過分析該轉(zhuǎn)基因菌株與野生型菌株的差異以推斷該mil... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

不同真菌的APSESDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域多序列比對Fig.3-2.MultiplealignmentoftheAPSESDNA-bindingdomainfromdifferentfungi

段 StuA 下游 3-4 重組載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因菌株的on of recombinant plasmids and acq臂，片段大小分別為 1008b StuA 基因敲除重組質(zhì)粒，以基因 CDS 區(qū)序列為驗(yàn)證，野生型羅伯茨綠僵菌應(yīng)的 1050bp 大小的目的的遺傳穩(wěn)定性，將敲除株因條帶，做最后檢測(圖 31285bp對照株

可以推斷所選 ARSEF23APSES 轉(zhuǎn)錄因子基因（EF-II 進(jìn)化支 APSES 家族轉(zhuǎn)錄因子中的 StuA�；�于保守的結(jié)構(gòu)以及系統(tǒng)遺傳樹的相似性，該基因被鑒定為 StuA 轉(zhuǎn)錄因子敲除等方法對其調(diào)控功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因菌株的獲得基因序列同源檢索分析，在羅伯茨綠僵菌基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)DS 序列。根據(jù)這個(gè) CDS 序列設(shè)計(jì)引物（表 3-3），通過 StuA 基因的上下游臂連入載體 pDHt-bar 質(zhì)粒的 bar 基因的長度符合目的基因擴(kuò)增片段大小的產(chǎn)物（圖 3-4），利用 N測序結(jié)果，確定上下游臂是否成功連入載體中。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]An expression atlas of miRNAs in Arabidopsis thaliana[J]. Le Xu,Yugang Hu,Ying Cao,Jingrui Li,Ligeng Ma,Yan Li,Yijun Qi.  Science China(Life Sciences). 2018(02)
[2]綠僵菌Marho2基因功能初步分析[J]. 陳麗,易萌,周江,孫云子,張傳博.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2018(02)
[3]菌根共生相關(guān)miRNA研究進(jìn)展[J]. 白龍,李麗麗,楊洪一.  北方園藝. 2017(13)
[4]上海生科院利用STTM技術(shù)發(fā)現(xiàn)水稻miRNA的新功能[J]. 鄭慶偉.  農(nóng)藥市場信息. 2017(14)
[5]mro-miR-33在綠僵菌產(chǎn)孢中的作用[J]. 李瓊,崔春來,宋紅生,王四寶.  菌物學(xué)報(bào). 2017(06)
[6]粗糙脈孢菌無性產(chǎn)孢過程中增量表達(dá)基因的功能分析[J]. 王飛,胡成成,劉波,李少杰,孫憲昀.  菌物學(xué)報(bào). 2017(03)
[7]植物bHLH轉(zhuǎn)錄因子參與非生物脅迫信號通路研究進(jìn)展[J]. 王昕嘉,李昆志.  生命科學(xué). 2015(02)
[8]毒力回歸計(jì)算方法及相應(yīng)軟件使用介紹[J]. 武懷恒,萬鵬,黃民松.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(27)
[9]miRNA海綿表達(dá)載體的構(gòu)建策略[J]. 李鐵軍.  醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志. 2014 (04)
[10]基于分子結(jié)構(gòu)的lncRNA分子功能的研究進(jìn)展[J]. 楊華,樊紅.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(01)

博士論文
[1]構(gòu)巢曲霉胞質(zhì)分裂SIN途徑反向調(diào)節(jié)基因的研究[D]. 仲國維.南京師范大學(xué) 2013

碩士論文
[1]蝗綠僵菌Macwh基因功能研究[D]. 陳星.重慶大學(xué) 2017
[2]蝗綠僵菌同源異型盒基因MaH1的克隆及功能研究[D]. 李慕春.重慶大學(xué) 2017
[3]轉(zhuǎn)錄因子ADA-6對粗糙脈孢菌無性發(fā)育分子調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 王飛.齊魯工業(yè)大學(xué) 2016
[4]蝗綠僵菌MabrlA在產(chǎn)孢調(diào)控作用和致病機(jī)制中的功能研究[D]. 石佑慧.重慶大學(xué) 2016
[5]綠僵菌核內(nèi)鋅指轉(zhuǎn)錄因子MaCrz1基因功能研究[D]. 劉遠(yuǎn)澤.重慶大學(xué) 2014
[6]蝗綠僵菌精氨酸酶基因MaAGA的功能分析[D]. 蘭霞.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[7]綠僵菌組成型啟動(dòng)子PMagpd和特異啟動(dòng)子PMagas1的結(jié)構(gòu)與功能研究[D]. 焦?jié)?重慶大學(xué) 2012
[8]基于Microarray芯片技術(shù)篩選大鼠腦創(chuàng)傷后皮層差異表達(dá)的microRNA[D]. 李耀華.天津醫(yī)科大學(xué) 2009
[9]金龜子綠僵菌MaECM33基因的克隆及分析[D]. 藍(lán)天敏.重慶大學(xué) 2009
[10]綠僵菌微循環(huán)產(chǎn)孢及相關(guān)基因分析[D]. 張石柱.重慶大學(xué) 2007



本文編號：2903886