發(fā)布時間：2018-04-16 14:31

  本文選題：全柱成像毛細管等電聚焦電泳 + 電荷異質性��； 參考：《分析測試學報》2017年03期

【摘要】：評價了cIEF-WCID檢測多肽與蛋白質藥物等電點的應用效果。測定標準多肽的等電點,驗證了cIEF-WCID具有高的準確度和良好的重復性(相對標準偏差0.50%)。人血紅蛋白的4種主要異構體實現了基線分離;甘賴胰島素的重復測試均只檢出單一特征峰(p I 5.95±0.01);比較重組人生長激素原液和成品,等電點特征峰比例差異明顯,且成品有新特征峰出現;對比進口及國產貝伐單抗,發(fā)現廠家1、3與原研藥基本一致,廠家1的主成分遷移規(guī)律與原研藥高度一致,廠家2的重鏈C末端K缺失、N末端焦谷氨酸環(huán)化或脫酰胺修飾影響了電荷異質性;通過考察尿素濃度、電解質范圍和聚焦時間,優(yōu)化了檢測重組人促卵泡素等電點條件:2 mol/L尿素,兩性電解質pH 2.5~5.0與pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦電壓1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、準確測定具有電荷異質性的蛋白類藥物等電點,分辨率和重復性好,尤其是可以跟蹤聚焦過程中樣本的遷移特征,特別適合蛋白類藥物復雜電荷異質性的檢測。
[Abstract]:The application effect of cIEF-WCID in detecting the isoelectric point of polypeptide and protein drug was evaluated.The determination of the isoelectric point of the standard polypeptide proved that cIEF-WCID had high accuracy and good repeatability (relative standard deviation was 0.50%).The four main isomers of human hemoglobin were separated from baseline, and only a single characteristic peak (P I 5.95 鹵0.01) was detected in repeated test of insulin of kale, and the ratio of isoelectric characteristic peak was significantly different between the recombinant human growth hormone solution and the finished product.Comparing with the imported and domestic bevacizumab, it was found that the principal component migration law of manufacturer 1 was basically consistent with that of the original drug, and the principal component migration law of manufacturer 1 was consistent with that of the original drug.The cyclization or deamination of the N-terminal pyroglutamic acid in the heavy chain C-terminal K deletion of manufacturer 2 affected the charge heterogeneity, and the concentration of urea, the electrolyte range and the focusing time were investigated.The isoelectric point conditions for detection of recombinant human follicle stimulating hormone (FSH) were optimized. When the amphoteric electrolyte pH 2.55.0 was mixed with pH 3.0 10. 0 at 1:1, the focusing voltage of 1 000 VX 1 min)~1 800 VX 4 min)~2 200 VX 1 min).cIEF-WCID was rapid.Accurate determination of the isoelectric points of protein drugs with charge heterogeneity has good resolution and repeatability, especially it can track the migration characteristics of samples during the focusing process, and is especially suitable for the detection of complex charge heterogeneity of protein drugs.
【作者單位】： 北京正旦國際科技有限責任公司;北京蛋白質組研究中心蛋白質組學國家重點實驗室國家蛋白質科學中心(北京);江漢大學護理與醫(yī)學技術學院;北京綠綿科技有限公司;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃863項目(2014AA020906) 國家科技部重大儀器專項(2012YQ18011710) 蛋白質組學國家重點實驗室課題(SKLP-O201412)
【分類號】：TQ460.72;O657.8

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