發(fā)布時間：2017-12-30 06:19

  本文關鍵詞：節(jié)球藻毒素（Nodularin,NOD）在鯽魚（Carassius auratus）體內的動態(tài)分布和毒理學研究　出處：《上海海洋大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：節(jié)球藻毒素(NOD)是由泡沫節(jié)球藻(Nodularia spumigena)通過不同分子量的多酶復合物合成并分泌產生的一種環(huán)狀五肽藍藻肝毒素,可對人類、動物、植物和真核微生物產生不利影響。采用反相高效液相色譜分離配置紫外檢測器檢測,初步建立了一種鯽魚肌肉、血漿、肝胰臟和腎臟組織中NOD含量的檢測方法。將勻漿或剪碎后的鯽魚組織用90%甲醇水溶液超聲提取,離心,離心后取上清液加正己烷去脂,離心后棄上層正己烷相,下清液于40℃下氮吹接近吹干,用純甲醇溶解并稀釋至甲醇含量約10%,CNW Bond C18小柱凈化除雜,洗脫液于40℃下氮吹吹干,純甲醇溶解,溶液利用0.45μm的有機微孔濾膜進行過濾,取濾液20μL,238nm檢測波長進行RP-HPLC檢測。結果表明:NOD在肌肉和血漿組織中的檢出限分別為11.30μg/kg和24.00μg/kg。肌肉、肝胰臟及腎臟中NOD為0.05~5.00 mg/kg,血漿中為0.05~5.00mg/L時,色譜峰峰面積與濃度呈良好的線性相關(R20.99)。各組織中NOD的平均回收率均在(87.93±14.38)%~(98.77±11.56)%,平均批內RSD為(1.12±0.99)%~(3.50±1.88)%。該檢驗方法可應用于鯽魚體內NOD的動態(tài)分布以及殘留檢測,為其他水產品中NOD含量的檢測以及水產品質量的安全控制提供了有效的工具。以0.25mg/kg和0.10mg/kg的給藥劑量進行單次腹腔注射給藥,研究了NOD在鯽魚體內的動態(tài)分布。研究發(fā)現(xiàn):兩種給藥劑量下,肝胰臟中NOD的含量變化范圍分別為0.600~4.029mg/kg和0.229~0.753mg/kg;腎臟中NOD的含量變化范圍分別為0.138~1.193mg/kg和0.160~0.725mg/kg;血漿中NOD的含量變化范圍分別為0.118~0.406mg/kg和0.035~0.079mg/kg;肌肉中NOD的含量變化分別為0.035~0.074mg/kg和0.032~0.050mg/kg。NOD在鯽魚四種組織中均有殘留蓄積,且肝胰臟和腎臟組織中NOD的含量在所取時間點均高于初始注射劑量,四種組織對NOD蓄積能力的大小為肝胰臟腎臟血漿肌肉。因此可得,鯽魚肝胰臟和腎臟為NOD的主要蓄積庫,這為進一步探究NOD在其他淡水雜食性魚類體內的動態(tài)分布奠定了基礎。設計了A(空白對照)、B(甲醇對照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)5個實驗組,研究了NOD對鯽魚血細胞參數(shù)的影響,其中C、D、E三個實驗組均采用單次腹腔注射給藥,B組注射純甲醇,A組不作任何處理作為空白對照,所有注射體積均按照鯽魚的實際體重進行。研究發(fā)現(xiàn):NOD對總白細胞(WBC)數(shù)目的影響不大,淋巴細胞(Lymph)數(shù)目以及單核細胞(Mon)數(shù)目有所增加,中性粒細胞(Gran)數(shù)目有所降低。淋巴細胞為魚類主要的免疫細胞,單核細胞在魚類的免疫功能中起到傳遞抗原的作用,產生這一現(xiàn)象的原因可能是NOD激活了鯽魚體內的特異性免疫系統(tǒng)使得魚體內的免疫細胞增加。紅細胞(RBC)數(shù)目、血紅蛋白(HGB)含量以及紅細胞壓積(HCT)為紅細胞參數(shù)的3個重要指標,其他指標如平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)和紅細胞分布寬度變異系數(shù)(RDW)均與其相關。結果表明,總紅細胞數(shù)目、血紅蛋白含量在短時間內有所降低,可能原因是NOD引起魚類正常出血性貧血或NOD引起魚體內組織器官出血,引發(fā)魚體內的組織器官損傷。以鯽魚(Carassius auratus)為實驗對象,研究了NOD對鯽魚肝胰臟生理生化的影響,設定實驗組分別為A(空白對照)、B(甲醇對照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)。其中C、D、E三個實驗組均采用單次腹腔注射給藥,B組注射純甲醇,A組不作任何處理作為空白對照,所有注射體積均按照鯽魚的實際體重進行。研究發(fā)現(xiàn),NOD對鯽魚肝胰臟CAT活力的影響,C、D、E三個劑量組中CAT均受到了誘導,其中C組CAT活力在第3h、24h和192h極顯著高于對照組,第0.5h、12h顯著高于對照組;D組中CAT活力在第3h、6h和24h極顯著高于對照組,第0.5h和192h顯著高于對照組,E組中CAT活力在第24h和48h極顯著高于對照組,第0.5h和1h顯著高于對照組。結果表明,在NOD的脅迫下,鯽魚機體內產生了過量的活性氧自由基。NOD對鯽魚肝胰臟總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性無明顯的影響。鯽魚肝胰臟GPX在低劑量組和中劑量組中均受到誘導,而在高劑量組中先受到誘導而后受到抑制,且抑制作用較為明顯,產生這一現(xiàn)象的可能原因是高劑量組NOD在一定程度上對鯽魚機體產生了一定的氧化損傷,使得機體的抗氧化能力降低。還原型谷胱甘肽(GSH)作為GPX的底物,低劑量組和高劑量組中GSH含量均低于對照組,而中劑量組中呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,可能原因是在NOD注射一定時間之后,鯽魚機體對NOD有解毒作用,而高劑量組中GSH含量保持在較低水平表明鯽魚機體內氧化損傷增加,抗氧化能力降低。低、中、高三個劑量組中丙二醛(MDA)含量總體上均比空白對照組高,且高劑量組在24~192h之間MDA含量與空白對照組有顯著差異,這說明在NOD脅迫下,鯽魚機體內可能發(fā)生了脂質過氧化作用,NOD會造成鯽魚機體的細胞損傷,但這種損傷沒有明顯的劑量依賴效應。
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【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：X171.5;X52

【參考文獻】

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2 陳家長;宋超;胡庚東;瞿建宏;孟順龍;范立民;;微囊藻毒素MC-LR對羅非魚(Oreochromis niloticus)肝臟谷胱甘肽含量及其相關酶活性的影響[J];農業(yè)環(huán)境科學學報;2010年09期

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本文編號：1353706