鹿銜草中總黃酮和總多酚提取工藝研究
本文來自《中國(guó)生物工程雜志》的技術(shù)論文,主要是關(guān)于不同難度閱讀理解測(cè)試學(xué)生元認(rèn)知策略運(yùn)用狀況的相關(guān)研究,詳情請(qǐng)看下面的介紹。
鹿銜草為鹿蹄草科植物鹿蹄草(PyrolacallithaH.Andres)或普通鹿蹄草(PyroladecorateH.Andres)的干燥全草,鹿銜草具有增加機(jī)體免疫力、擴(kuò)張血管、促進(jìn)冠脈循環(huán)、降壓、調(diào)脂等作用,對(duì)于治療心腦血管疾病療效確切,有很好的開發(fā)利用前景。目前已經(jīng)分離鑒定出金絲桃苷、高熊果酚苷、鹿蹄草素、腎葉鹿蹄草苷、羥基腎葉鹿蹄草苷、沒食子;咝芄榆铡2一O一沒食子;鸾z桃苷、沒食子酸、兒茶素等多種黃酮和多酚類成分,現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,這些黃酮和多酚類化合物是治療心腦血管疾病的主要有效成分。因此,本試驗(yàn)以總黃酮和總多酚含量為考察指標(biāo),采用正交試驗(yàn)優(yōu)選最佳提取工藝,為鹿銜草的開發(fā)利用和生產(chǎn)實(shí)際提供理論依據(jù)。
1儀器與試藥
1.1儀器752型紫外分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);760CRT雙光束紫外一可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);BP一121S電子天平(天津儀器廠);RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮儀器廠)。
1.2試藥鹿銜草:購(gòu)自山西萬榮縣,經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室白云娥副教授鑒定為鹿蹄草科植物普通鹿蹄草(PyroladecorateH.Andres)的干燥全草;蘆丁對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所,10081—9906);沒食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所,0831-9501);三氯化鋁、醋酸鉀、醋酸鈉、醋酸、碳酸鈉、鎢酸鈉、磷酸等試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1總黃酮的含量測(cè)定
2.1.1溶液的制備:(1)對(duì)照品溶液的制備:精密稱取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品11.0mg,置于25mI量瓶中,加50乙醇適量使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,即得(每mI含蘆丁440g)。(2)供試品溶液制備:精密稱取藥材提取物50mg,精密稱定,置25mI量瓶中,加50乙醇適量,超聲30rain,放冷用50乙醇適量稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.1.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇:分別精密量取蘆丁對(duì)照品溶液、供試品溶液適量,置于10mI量瓶中,加0.1mol/l的醋酸鉀溶液3ml,0.1mol/l的三氯化鋁溶液2mI,顯色20min,加5O乙醇稀釋至刻度。以50的乙醇為參比,按照紫外分光光度法在300~600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,對(duì)照品和供試品在410nm均有最大吸收,故確定410nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
2.1.3線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液0.1ml。0.2ml。0.3ml,0.4ml,0.5mI,0.6mI,置于10mI量瓶中,加0.1mot/l的醋酸鉀溶液3mI,0.1mol/I的三氯化鋁2mI,顯色20rain,加5O乙醇稀釋至刻度,搖勻,同時(shí)作空白。照分光光度法在410nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,以吸收度(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程:A一0.0331C+0.0305(r=0.9999),結(jié)果表明,蘆丁在4.4~26.4/zg/mI范圍內(nèi),線性良好。
2.1.4樣品含量測(cè)定:取供試品溶液1mI,置于10mI量瓶中,按2.1.3項(xiàng)下顯色方法顯色2Omin,加5O乙醇稀釋至刻度,搖勻,測(cè)定A,按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量,總黃酮以蘆丁。
2.2總多酚的含量測(cè)定
2.2.1溶液的制備:(1)Folin試液的配制:稱取10g鎢酸鈉置于圓底燒瓶中,用75mI的蒸餾水溶解,加入85磷酸8mI,回流3h,冷卻移入100mI量瓶中用蒸餾水定容。(2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱取沒食子酸對(duì)照品10.8mg,置于100mI棕色量瓶中,加入30甲醇稀釋至刻度,筆耕論文新浪博客,搖勻,即得(每mI含沒食子酸108g)。(3)供試品溶液制備:精密稱取藥材提取物0.3g,精密稱定,置25mI量瓶中,加5O乙醇適量,超聲30rain,放冷用5O9/6乙醇適量稀釋至刻度,搖勻,過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2.2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇:精密量取沒食子酸對(duì)照品溶液、供試品溶液適量,分別置于10mI量瓶中,用0.1mol/I醋酸鈉一醋酸緩沖液定容,搖勻,分別取1mL于10mI量瓶中,加Folin試液0.5mL,用2碳酸鈉溶液定容,放置30rain顯色。按照紫外分光光度法在400~900nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,結(jié)果顯示,顯色后對(duì)照品和供試品在730nm均有最大吸收,故選擇730nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
2.2.3線性關(guān)系考察:分別吸取對(duì)照品溶液1.0ml,2.0ml,3.0mI,4.0mI,5.0mI,6.0ml,置于10mI量瓶中,用0.1mol/l醋酸鈉一醋酸緩沖液定容,搖勻,分別取1mI于10mI量瓶中,按2.2.2方法顯色后放置30rain,避光保存,在730nm處測(cè)定吸光度,以吸收度(A)為縱坐標(biāo),沒食子酸濃度(C)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程:A一0.1503C+0.0l11(r一0.9999),結(jié)果表明,沒食子酸在1.08~6.48~g/mI范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。
2.2.4樣品含量測(cè)定:取供試品溶液1mI,置于10mI量瓶中,用0.1mol/I醋酸鈉一醋酸緩沖液定容,搖勻,取1mI于10mI量瓶中,按2.2.2項(xiàng)下顯色后避光放置30rain,測(cè)定A,按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總多酚含量,總多酚以沒食子酸計(jì)。
2.3鹿銜草提取方法考察稱取5g過2O目篩的鹿銜草干燥粗粉五份,精密稱定分別按下列方法提取。
乙醇回流提取法:加入50乙醇100mI,回流提取2h,提取液過濾,將濾液減壓濃縮,真空干燥制成干燥浸膏,精密稱定干膏重量,備用。水回流提取法:加入水100mI,回流提取2h,提取液過濾,將濾液減壓濃縮,真空干燥制成干燥浸膏,精密稱定干膏重量,備用。
滲漉提取法:50mI50乙醇裝筒浸漬48h,加100mI5O乙醇,以2mI/rain速度滲漉,收集滲漉液,減壓濃縮,真空干燥制成干燥浸膏,精密稱定干膏重量,備用。索氏提取法:加100mI50乙醇,索氏提取2h,提取2次,合并提取液,減壓濃縮,真空干燥制成干燥浸膏,精密稱定干膏重量,備用。
乙醇超聲提取法:加入50乙醇100mL,超聲提取30min,提取液過濾,將濾液減壓濃縮,真空干燥制成干燥浸膏,精密稱定干膏重量,作為提取物備用。將上述5種方法所得的提取物制備供試品溶液,采用分光光度法測(cè)定提取物中總黃酮和總多酚的含量,并計(jì)算5種提取方法的提取率及浸膏中的含量,結(jié)果見表1。結(jié)果表明采用乙醇回流提取法,兩類有效成分的提取率及浸膏中含量均較高,故確定選用乙醇回流提取法為最佳提取方法。
2.4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,確定采用乙醇回流提取,對(duì)乙醇濃度、提取時(shí)間、提取次數(shù)和料液比4個(gè)因素,以鹿銜草總黃酮、總多酚提取率為考察指標(biāo)進(jìn)行L。(3)正交實(shí)驗(yàn)。
本文編號(hào):5063
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