發(fā)布時間：2019-08-27 08:21

【摘要】：目的 觀察推拿對腦癱(Cerebral palsy,CP)幼鼠海馬炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-10蛋白表達(dá)的影響及其DNA甲基化水平,探索推拿對腦癱幼鼠海馬炎癥的拮抗作用及機制。方法 從91只3日齡正常SD幼鼠中篩選符合研究標(biāo)準(zhǔn)的39只雄性幼鼠,隨機分為3組:實驗組(n=13)、模型對照組(n=13)和空白對照組(n=13),實驗組和模型對照組采用左側(cè)頸總動脈結(jié)扎聯(lián)合缺氧3.5h的方法制備腦癱模型,空白對照組不予處理。造模后第二天(即出生后第5天,Postnatal 5 days,P5),實驗組開始進(jìn)行推拿干預(yù),1次/日,15 min/次,持續(xù)4周,空白對照組和模型對照組不予任何干預(yù)。三組相同的溫度、濕度、生存環(huán)境及喂養(yǎng)方法。三組相同時間點進(jìn)行動物行為學(xué)檢測,即在P26天開始進(jìn)行水迷宮實驗(Morris Water Maze,MWM)和P31天進(jìn)行跳臺實驗(Step-down Test,ST)以觀察其學(xué)習(xí)記憶能力。P33天將全部實驗幼鼠處死,取海馬組織保存于-80℃環(huán)境備用。每組隨機抽取7只用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)檢測TNF-α和IL-10的蛋白表達(dá)水平。將每組中剩余的6只隨機分為兩組,每組3只,分別采用Sequenom質(zhì)譜檢測法和焦磷酸測序法檢測TNF-α和IL-10 DNA甲基化水平。結(jié)果1.水迷宮實驗顯示,與空白對照組相比,實驗組潛伏期時間較長,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與模型對照組相比,實驗組潛伏期時間較短,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與空白對照組相比,模型對照組大鼠找到平臺的潛伏期明顯較長,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組穿越平臺次數(shù)比模型對照組多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),與空白對照組相比,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與空白對照組相比,模型對照組穿越平臺次數(shù)較少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明實驗組Morris水迷宮成績優(yōu)于模型對照組,空白對照組優(yōu)于實驗組和模型對照組。2.跳臺實驗顯示,實驗組潛伏期時間長于模型對照組,短于空白對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與空白對照組相比,模型對照組的潛伏期時間明顯較短,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。三組跳下平臺次數(shù)比較:空白對照組實驗組模型對照組,實驗組與模型對照組相比次數(shù)較少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),實驗組與空白對照組相比次數(shù)較多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);模型對照組跳下平臺次數(shù)多于空白對照組和實驗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明實驗組跳臺實驗成績優(yōu)于模型對照組而差于空白對照組。3.western blot檢測顯示,實驗組IL-10蛋白表達(dá)水平低于空白對照組,兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組和空白對照組IL-10蛋白表達(dá)水平高于模型對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明實驗組IL-10蛋白表達(dá)水平高于模型對照組而低于空白對照組。實驗組TNF-α蛋白表達(dá)水平高于空白對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型對照組相比,實驗組和空白對照組TNF-α蛋白表達(dá)水平較低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明實驗組TNF-α蛋白表達(dá)水平低于模型對照組而高于空白對照組。4.Sequenom質(zhì)譜檢測結(jié)果:IL-10基因啟動子區(qū)域,三組間4個Cp G位點相對甲基化率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。模型對照組IL-10基因相對甲基化率略高于空白對照組和實驗組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明三組間IL-10基因啟動子區(qū)域甲基化水平差異不明顯。TNF-α基因啟動子區(qū)域中,實驗組Cp G_8,9相對甲基化率高于模型對照組而低于空白對照組,三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);模型對照組Cp G_3、Cp G_8,9和Cp G_14相對甲基化率低于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明三組間TNF-α基因啟動子區(qū)域甲基化水平有差異。5.焦磷酸測序法檢測結(jié)果:實驗組、空白對照組和模型對照組在炎癥因子IL-10的啟動子區(qū)域的4個Cp G位點的DNA甲基化頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明三組間IL-10基因啟動子區(qū)域甲基化水平差異不顯著。實驗組、空白對照組和模型對照組在炎癥因子TNF-α的啟動子區(qū)域的8個Cp G位點的DNA甲基化頻率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與空白對照組相比,實驗組和模型對照組在位點Cp G_1、Cp G_2、Cp G_3、Cp G_4、Cp G_5、Cp G_6、Cp G_7的甲基化頻率均顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型對照組相比,實驗組在位點Cp G_1、Cp G_2、Cp G_4、Cp G_6、Cp G_7的甲基化頻率明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而在Cp G_8,與空白對照組相比,實驗組和模型對照組甲基化頻率顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明實驗組TNF-α基因啟動子區(qū)域甲基化水平高于模型對照組,而低于空白對照組。結(jié)論1.推拿可提高腦癱幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力。2.推拿可降低腦癱幼鼠海馬促炎細(xì)胞因子TNF-α蛋白表達(dá)水平,提高抗炎細(xì)胞因子IL-10的蛋白表達(dá)水平,重建腦癱炎癥的相對穩(wěn)態(tài)。3.推拿對腦癱幼鼠海馬炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-10的蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié),其機制可能是推拿調(diào)控了炎癥細(xì)胞因子TNF-α和IL-10的基因啟動子區(qū)域甲基化水平,同時IL-10蛋白表達(dá)的改變可能也與其他因素的調(diào)節(jié)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R244.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 本刊編輯部;;關(guān)于對照觀察問題[J];中華麻醉學(xué)雜志;1996年05期

2 李朝旭;唐靜成;孫怡;王雪;張錦楠;;利福布汀的代謝研究[J];中國藥學(xué)雜志;2007年24期

3 徐陸周;單兆偉;趙萬洲;;芪竹方對MGC-803細(xì)胞VEGFKDR表達(dá)影響的研究[J];遼寧中醫(yī)雜志;2010年06期

4 向家倫;歐陽次璋;;耳針防治競技綜合征254例[J];上海針灸雜志;1992年01期

5 陳曉陽,曾奕明,黃子揚,陶耕,鄭興中,李永加;慢性間斷缺氧小鼠缺氧誘導(dǎo)因子1α的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2005年02期

6 楊新懷,丁正平,麥才鏗,何玉蘭,魏厚仁,呂源淑;堿性成纖維細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)角膜新生血管形成的實驗研究[J];中國實用眼科雜志;1997年12期

7 徐旭雯;譚德明;鐘艷丹;傅蕾;;粒細(xì)胞集落刺激因子對外周血單個核細(xì)胞功能的體外調(diào)節(jié)作用[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2007年08期

8 王培德;;《梅寶》防凍健膚脂初步藥理研究[J];四川生理科學(xué)動態(tài);1987年01期

9 劉詩祥;張昆麟;魂書均;周定邦;;氣功“外氣”對貓大腦皮層體感誘發(fā)電位的影響[J];云南中醫(yī)雜志;1989年02期

10 曹喜紅;秦劍;周遠(yuǎn)大;;麝香滴眼液的抗炎作用[J];中成藥;2008年04期

相關(guān)會議論文 前9條

1 王新施;鄭榮遠(yuǎn);陳艷艷;錢掩映;李佳;;咪唑克生對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的干預(yù)作用及相關(guān)的細(xì)胞和分子機制[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

2 張瑞華;李麗琴;鹿曉晶;;采用小鼠高架十字迷宮對中草藥藥效學(xué)進(jìn)行研究[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

3 劉美霞;張文高;鄭廣娟;吳敏;劉龍濤;殷鏡海;王姍姍;;大黃微粉對頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性干預(yù)作用研究[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

4 王新施;鄭榮遠(yuǎn);陳艷艷;錢掩映;李佳;;咪唑克生對實驗性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎的干預(yù)作用及相關(guān)的細(xì)胞和分子機制[A];2008年浙江省神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

5 孟健;;寶曲對家兔實驗性動脈粥樣硬化影響的研究[A];第十次全國中醫(yī)養(yǎng)生康復(fù)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

6 任大鵬;;中藥組分配伍對小鼠組織中組胺含量的影響的研究[A];世界中聯(lián)耳鼻喉口腔科專業(yè)委員會第五屆學(xué)術(shù)年會、中華中醫(yī)藥學(xué)會耳鼻喉科分會第十九屆學(xué)術(shù)交流會暨貴州省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會耳鼻咽喉分會第二次學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2013年

7 胡國信;萬贊燕;邵佳亮;張一;張倫理;;羥基喜樹堿對大鼠肝星狀細(xì)胞TGF-β1、a-SMA和Ⅰ型膠原表達(dá)的影響[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會傳染病專業(yè)委員會成立大會暨首屆江西省中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 尹紀(jì)偉;趙福濤;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎滑膜增殖的作用[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

9 王姍姍;張文高;鄭廣娟;殷鏡海;吳敏;劉龍濤;劉美霞;;黃連微粉干預(yù)頸動脈粥樣硬化斑塊及其機制研究[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合養(yǎng)生學(xué)與康復(fù)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 黃冰清;HIF-1α基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死的療效及機制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 陳紅霞;泛素連接酶SIAH2在急性T淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)及其作用機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

3 龔春暉;蒿紅方止咳抗炎的藥效研究和機理的初步探討[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

4 郭軍鵬;縫裂層孔菌抗腫瘤作用及作用機制的研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 張偉;慢性阻塞性肺疾病證治規(guī)律及系列方藥實驗研究[D];天津大學(xué);2006年

6 曹瑞華;miR-638在HDL代謝中的作用及機制探討[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 郭云;結(jié)核相關(guān)抗原對初治結(jié)核病患者樹突狀細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李蕓云;PMX205干預(yù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞興奮性損傷的研究[D];青島大學(xué);2015年

3 葉瑞興;“加味二術(shù)散”對斷奶仔豬生產(chǎn)性能、血液流變學(xué)及小腸抗損傷能力的影響研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 李文超;miRNA調(diào)控納米SiO_2誘導(dǎo)肺損傷靶基因作用的初步研究[D];東南大學(xué);2015年

5 劉娜;輔酶Q_(10)在畜禽上應(yīng)用的初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 孔惟博;CSF免疫豬組織淋巴細(xì)胞對PRRSV多肽刺激的應(yīng)答特點[D];吉林大學(xué);2016年

7 萬潔妤;中藥治療雞砷中毒機理研究[D];貴州大學(xué);2015年

8 劉鑫鑫;MS活性糖對小鼠生長性能與脂質(zhì)代謝的影響[D];延邊大學(xué);2016年

9 曾馨;我國西部地區(qū)HIV陰性MSM人群暴露前預(yù)防用藥預(yù)防HIV新發(fā)感染的有效性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

10 張雪霜;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在X-連鎖遲發(fā)性脊柱骨骺發(fā)育不良發(fā)病機制中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

，

本文編號：2529642