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中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志 2011 年 12 月第 31 卷第 12 期 CJITWM，December 2011，Vol． 31，No. 12

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慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣虛證及其中藥 干預(yù)的血漿代謝組學(xué)研究
劉志剛 摘要 目的
1

李澤庚

1

彭

波

2

章天壽

1

徐

彬

1

張念志

2

童佳兵

2

楊

程

2

COPD) 穩(wěn) 運(yùn)用代謝組學(xué)方法研究慢性阻塞性肺疾病( chronic obstructive pulmonary disease， 定期肺氣虛證及其中藥干預(yù)的血漿代謝組學(xué)特征， 探索其可能存在的生物標(biāo)記物。方法 選擇 40 例 COPD 穩(wěn) 定期肺氣虛證患者( 肺氣虛證組) ， 給予六味補(bǔ)氣膠囊進(jìn)行干預(yù)， 并設(shè)健康對(duì)照組( 37 名) 。分別對(duì)健康對(duì)照組 及肺氣虛證組藥物干預(yù)前后進(jìn)行肺功能檢查; 采用高效液相色譜 － 二極質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)血漿代謝物， 利用主成 PCA) 和偏最小二乘法( partial least squares， PLS) 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 分分析( principal component analysis， 比 較兩組血漿代謝組學(xué)原始譜圖和數(shù)據(jù)。進(jìn)行兩組全譜氨基酸代謝組學(xué)檢測(cè)。結(jié)果 與健康對(duì)照組比較， 肺氣 虛證組治療前肺功能明顯下降( P ＜ 0. 05) ， 治療 30 天后仍低于健康對(duì)照組( P ＜ 0. 05) 。肺氣虛證組治療前的代 但治療后有向健康對(duì)照組回歸的趨勢(shì)。發(fā)現(xiàn) 15 種 COPD 肺氣虛證可能的疾病標(biāo) 謝譜與健康對(duì)照組明顯不同， 記物。兩組氨基酸代謝各有特點(diǎn)。結(jié)論 運(yùn)用血漿代謝組學(xué)方法可以發(fā)現(xiàn) COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證患者存在代 謝譜和氨基酸代謝改變， 并發(fā)現(xiàn)其潛在的疾病標(biāo)記物。對(duì) COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證患者進(jìn)行中醫(yī)藥干預(yù)， 其代謝 。 譜和氨基酸代謝具有積極的變化 關(guān)鍵詞 代謝組學(xué); 慢性阻塞性肺疾病; 穩(wěn)定期; 肺氣虛證; 六味補(bǔ)氣膠囊

Plasma Metabonomics Studies on the Stable Phase Chronic Obstructive Pulmonary Disease Patients of Fei- Deficiency Syndrome and the Chinese Materia Medica Intervention qi
PENG Bo，et al ABSTRACT Objective LIU Zhigang，LI Zegeng， Clinical Medicine College，Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei ( 230038) By using the metabonomics method， study the plasma metabonomics of the stato Forty stable

qi and of ble phase chronic obstructive pulmonary disease ( COPD) patients of Fei- deficiency syndrome ( FQDS) ， Chinese materia medica ( CMM) intervention，thus exploring possibly existent biomarkers． Methods phase COPD patients of FQDS were recruited as Group A． Liuwei Buqi Capsule ( LWBQC) was given to them as 37 intervention． A healthy control group ( Group B， cases) was set up． The pulmonary function test was performed on patients in Group B and Group A before and after intervention． The plasma metabolites were detected using high performance liquid chromatographymass spectrometry ( HPLC- / MS) ． Statistical data were analyzed using MS principal component analysis ( PCA) and partial least squares ( PLS) ． The original spectrum and data of plasma metabonomics were compared between the two groups． The whole spectrum amino acid metabonomics tests were performed in the two groups． Results Compared with Group B， pulmonary function significantly decreased bethe fore intervention in Group A ( P ＜0. 05) ． The pulmonary function was more mildly improved after 30 days' treatment than before treatment，but still lower than it in Group B ( P ＜ 0. 05) ． The metabolic spectrum before treatment in Group A was significantly different from Group B， showing regressive trend to Group B after treatment． Fifteen but possible disease markers were found in COPD patients of FQDS． Results of the whole spectrum of amino acid metabolomics showed different features． Conclusions The changes of metabolic spectrum and amino acids could be found in the stable phase COPD patients of FQDS using plasma metabonomics， and potential markers could be detected． The intervention of the stable phase COPD patients of FQDS by Chinese medicine could brought positive changes in the metabolic profiling and amino acid metabolism． KEYWORDS metabonomics; chronic obstructive pulmonary disease; the stable phase; Fei- deficiency qi syndrome; Liuwei Buqi Capsule
基金項(xiàng)目: 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目( No． 81270781) ; 安徽中醫(yī)學(xué)院青年科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目( No． 2010qn006) 作者單位: 1． 安徽中醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院( 合肥 230038) ; 2． 安徽省中醫(yī)院呼吸科( 合肥 230031) Tel: E通訊作者: 李澤庚， 0551 － 2821852， mail: liudoctor@ 163． com

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慢性阻塞 性 肺 疾 病 ( chronic obstructive pulmonary disease， COPD) 現(xiàn)已成為第二大慢性疾病， 目前認(rèn)為吸煙 COPD 發(fā)生的重要 和吸入生物燃燒的煙霧等有害氣體是 原因， 但其根本的病因病機(jī)尚未完全闡明; 治療 COPD 的 方法亦非常有限， 尚無能夠緩解病情發(fā)展和功能損害的 有效措施 。研究 COPD 的發(fā)生、 發(fā)展過程及病情變化 并闡明其原理， 對(duì)減少 COPD 的發(fā)生、 減緩患者肺功能下 降時(shí)間、 改善生活質(zhì)量、 延長(zhǎng)生存時(shí)間等具有重要意義。 肺氣虛證是 COPD 穩(wěn)定期一種常見證型， 臨床以咳喘無 力、 痰液清稀、 畏風(fēng)自汗等為主要表現(xiàn)。代謝組學(xué)能夠高 通量、 全景式、 直觀地研究生物體在生理、 病理以及藥物 和毒物作用下發(fā)生的各種代謝動(dòng)態(tài)變化， 并揭示生物體 的作用機(jī)制。中醫(yī)學(xué)強(qiáng)調(diào)從整體和系統(tǒng)角度認(rèn)識(shí)和調(diào)節(jié) 人體生命活動(dòng)規(guī)律， 代謝組學(xué)的特點(diǎn)能夠在分子水平上 揭示和提高中醫(yī)學(xué)的機(jī)理認(rèn)識(shí)， 這將推動(dòng)中醫(yī)學(xué)理論的 現(xiàn)代化進(jìn)程。本研究旨在探索 COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證患 者及其中醫(yī)藥干預(yù)后的血漿代謝物特征， 并與健康人的 為 血漿代謝組學(xué)進(jìn)行比較， COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證的診 斷和治療研究提供新的方法。 資料與方法 診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn) COPD 診斷 《 標(biāo)準(zhǔn)按 2007 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的 慢性
［2 ］ 阻塞性肺疾病診治指南 》 。 中醫(yī)肺氣虛證辨證標(biāo)準(zhǔn) ［3 ］ 《 參照 中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》 。 ［］ 1

( 56. 8 ± 10. 1) 歲。 兩組性別、 年齡等基線資料比較， ( P ＞ 0. 05) 。 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 主要試 劑 、 器 及 應(yīng) 用 軟 件 試 劑 : 乙 腈 、 儀 甲醇色譜級(jí) ， 國(guó) 菲 舍 爾 公 司 ; 蒸 餾 水 、 純 水 系 美 超 統(tǒng) ， 國(guó) Thermo 公 司 ; 色 譜 柱 ， 國(guó) Thermo 公 司 。 美 美 儀 器 : 高 效 液 相 色 譜 － 二 極 質(zhì) 譜 聯(lián) 用 儀 ( HPLC MS / MS ) ， 國(guó) AB 公 司 ; 高 速 離 心 機(jī) ( Centrifuge 美 5415 D) ， 國(guó) Eppendorf 公 司 ; 液 體 快 速 混 合 器 德 ( YKA) ， 西 醫(yī) 療 器 械 廠 。 軟 件 : SIMCA-11. 5 及 江 Mzmine ， 均為瑞士 Umetrics 公司 。 健康對(duì)照組正常生活， 不做任何干 預(yù)。肺氣虛證組患者根據(jù)病情給予化痰 ( 溴己新， 上 治療方法 海信誼制藥有限公司生產(chǎn)， 批號(hào): 101205，， 規(guī)格: 8 mg， 口服， 每次 16 mg， 每天 3 次 ) 、 解痙平喘 ( 氨茶堿緩釋 片， 州 民 生 藥 業(yè) 集 團(tuán) 有 限 公 司 生 產(chǎn)，批 號(hào): 杭 H109440037， 格: 0. 1 g， 服， 次 0. 2 g， 天 2 規(guī) 口 每 每 次) 、 營(yíng)養(yǎng)支持 ( 復(fù)合維生素， 南京白敬宇制藥公司生 ， : 101205， ， 2 片， 產(chǎn) 批號(hào) 口服 每次 每天 3 次) 及控制性 氧療( 2 L / min 鼻導(dǎo)管吸入， 每天 12 ～ 15 h) 等常規(guī)治 并在常規(guī)治療基礎(chǔ)上服用六味補(bǔ)氣膠囊 ( 院內(nèi)制 療， 劑， 安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室提供， 藥物組 成: 生曬參 10 g 炙黃芪 15 g 益智仁 6 g 玉竹 10 g 陳皮 6 g 肉桂 3 g， 每粒 0. 5 g， 含生藥 0. 4 g) ， 每天 3 次， 每次 3 粒， 連續(xù)服用 30 天。 6 肺功能檢查 兩組治療后進(jìn)行肺功能檢測(cè)［ 用力 FEV 。 肺活量( FVC) 、 1 秒用力呼氣量( FEV1 ) 、 1 / FVC］ 第 7 血漿代謝組學(xué)檢測(cè) 標(biāo)本制備 兩組分別于藥物干預(yù)前后于清晨 3 空腹行肘靜脈采血 5 mL， 標(biāo)本采集后， 000 r / min 離心 10 min， 取血漿 1 mL， 密封后置于 － 80 ℃ 冰箱中保存?zhèn)?用。實(shí)驗(yàn)前將血漿樣本放置室溫下解凍后， 血漿樣本渦 13 流， 200 r / min離心 5 min， 10 μL 上清液， 取 加入 100 μL 質(zhì)譜檢測(cè)用日常工作液， 使用渦流混勻機(jī)混勻， 旋轉(zhuǎn)離 ， 50 ℃ 下氮?dú)獯蹈桑?60 μL 鹽酸正丁醇， 心 然后在 加 使用 渦流混勻機(jī)混勻， 旋轉(zhuǎn)離心， 65 ℃ 下衍生 15 min， 50 在 在 ℃ 下氮?dú)獯蹈桑?100 μL 乙腈和水( 8∶ 2) 混合液復(fù)溶， 用 使 用渦流混勻機(jī)混勻， 旋轉(zhuǎn)離心， 。 備用 7. 2 HPLC- / MS 檢測(cè) 在解放軍第二炮兵總 MS 醫(yī)院和北京艾米諾醫(yī)學(xué)技術(shù)研究有限公司共建的實(shí)驗(yàn) MS 室， 采用 HPLC- / MS 對(duì)供試血漿樣品進(jìn)行分離、 檢 測(cè)、 析。 色 譜 分 離 條 件: 色 譜 柱 為 AAA C18， 分 5 μmol / L， mm × 4. 6 mm; 流動(dòng)相: A 溶劑 0. 1% 甲 150 酸 水 溶 液，B 溶 劑 0. 1% 甲 酸 乙 腈 溶 液; 流 速: 0. 35 mL / min; 柱溫: 50 ℃ 。 質(zhì)譜檢測(cè)條件: 毛細(xì)管電 壓 2. 5 kV; 采樣電壓 38 V; 電離源溫度 115 ℃ ; 脫溶劑 7. 1 5 4

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納入及排除標(biāo)準(zhǔn) ( 1) 納入標(biāo)準(zhǔn): 屬 COPD 穩(wěn) ［4 ］ 且中醫(yī)辨證符合肺氣虛證 定期( 肺功能Ⅰ ～ Ⅲ級(jí) ) ， 者; 年齡 30 ～ 70 歲; 經(jīng)檢查血、 尿常規(guī)， 、 肝 腎功能， 血 糖及血脂正常， 心電圖無明顯異常， 胸片示慢性支氣管 炎、 肺氣腫， 肺功能Ⅰ ～ Ⅲ級(jí); 自愿參加并簽署知情同 意書。( 2) 排除標(biāo)準(zhǔn): 合并有結(jié)核、 真菌感染、 腫瘤及 ; 合并心功能不全者、 其他肺部原發(fā)性疾病 肺性腦病等 危重患者; 合并其他疾病如心血管、 泌尿、 消化、 造血、 內(nèi)分泌、 代謝系統(tǒng)等嚴(yán)重并發(fā)癥; 精神病患者; 妊娠或 哺乳期婦女; 除肺氣虛證外， 有明顯兼夾證者。 3 一般資料 選擇 2008 年 9 月—2009 年 5 月安 徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科門診和合肥市區(qū)的 社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心門診 COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證患者 40 例， 均符合上述標(biāo)準(zhǔn)， 設(shè)為肺氣虛證組， 其中男性 16 例， 女性 24 例; 年齡 41 ～ 70 歲， 平均 ( 59. 7 ± 9. 5) 歲。 37 名安徽中醫(yī)學(xué)院職工和健康體檢中心的志愿者， 無 心肺等基礎(chǔ)疾患， 無遺傳病史及吸煙史， 與受試者無血 緣關(guān)系， 經(jīng)檢查肺功能正常， 身體健康， 設(shè)為健康對(duì)照 組。其中男性 14 名， 女性 23 名; 年齡 39 ～ 68 歲， 平均

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氣溫度360 ℃ ; 脫溶劑氣流量1 000 L / h。 7. 3 數(shù)據(jù)處理 采用 Mzmine 軟件對(duì)原始色譜數(shù) 據(jù)進(jìn)行處理: ( 1) 數(shù)據(jù)格式轉(zhuǎn)換、 導(dǎo)入; ( 2) 圖譜查看、 對(duì)比［ 總離子流圖 ( TIC) 、 二維圖像 ( 2D) 、 三維 圖 像 ( 3D) 、 ; 質(zhì)譜圖像( MS) ］ ( 3) 去噪音; ( 4) 質(zhì)譜峰提取; ( 5) 反卷積處理; ( 6) 峰排列、 對(duì)齊、 合并; ( 7) 峰合并 后開始列表去噪音; ( 8) 縫隙填補(bǔ)處理; ( 9) 數(shù)據(jù)導(dǎo)出。 11. 然后將數(shù)據(jù)導(dǎo)入 SIMCA- 5 軟件， 進(jìn)行主成分分析 ( principle component analysis， PCA) 和 偏 最 小 二 乘 法 ( partial least squares， PLS) 分析。 采用高效液相 色譜 － 二極質(zhì)譜聯(lián)用儀準(zhǔn)確定量人體內(nèi) 42 種氨基酸 在正常對(duì)照組及肺氣虛證組治療前、 治療后的含量。 8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 17. 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn) 行分析， 計(jì)量資料以 x ± s 表示， 采用 t 檢驗(yàn); 計(jì)數(shù)資料 2 采用 χ 檢驗(yàn)。P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7. 4 全譜氨基酸代謝組學(xué)檢測(cè) 1

結(jié)

果 治療前

兩組 治 療 前 后 肺 功 能 比 較 ( 表 1 )

COPD 肺氣虛證組患者肺功能較健康對(duì)照組明顯下降 ( P ＜ 0. 05) 。肺氣虛證組治療 30 天后， 肺功能較治療 前有輕度改善， 但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P ＞ 0. 05) ; 與健 康對(duì)照組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) 。
表1
組別 健康對(duì)照 肺氣虛證 例數(shù) 37 40

兩組治療前后肺功能比較
時(shí)間 治療前 治療后 治療前 治療后 FVC ( L) 3. 26 ± 0. 65 3. 22 ± 0. 68 2. 53 ± 0. 68 * 2. 66 ± 0. 71 *

( x ± s)
FEV1 /FVC ( % ) 76. 50 ± 6. 67 74. 22 ± 6. 85 60. 87 ± 5. 61 * 61. 69 ± 0. 72 *

FEV1 ( L) 2. 45 ± 0. 52 2. 39 ± 0. 51 1. 54 ± 0. 62 * 1. 55 ± 0. 78 *

* 注: 與健康對(duì)照組同期比較， P ＜ 0. 05

兩組血漿代謝組學(xué)原始譜圖和數(shù)據(jù)比較 ( 圖 1 ～ 7， 2) 在健康對(duì)照組中保留時(shí)間為 301. 400 s 表 峰最高( 圖 1) ， 在人類代謝組學(xué)數(shù)據(jù)庫( human metabolome

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圖1

健康對(duì)照組血漿樣本 TIC 及其保留時(shí)間為 5 min 離子圖 ( 分子量為 50 ～ 1 000)

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database， HMDB) 中 檢 索 的 物 質(zhì) 主 要 是 Palmitic acid ( 十六烷酸) ; 其在肺氣虛證組治療前對(duì)應(yīng)的峰高 ( 保 留時(shí)間為 301. 300 s) 明顯下降 ( 圖 2) ， 說明該物質(zhì)明 顯減少; 在肺氣虛證組治療后 ( 圖 3 ) 對(duì)應(yīng)的峰高 ( 保 留時(shí)間為 301. 300 s) 接近健康對(duì)照組 。 肺氣虛證組 治療前與健康對(duì)照組的 TIC 圖及其保留時(shí)間為 5 min 的離子圖 ( 棒狀圖 ) 有明顯的區(qū)別 ， 說明二者的代謝 物有明顯不同 ， 即二者的代謝指紋圖譜有明顯不同 ; 肺氣虛證組治療后的 TIC 圖及其保留時(shí)間為 5 min 的離子圖與 治 療 前 比 較 有 顯 著 改 變 ， 明 顯 有 趨 向 且 健康對(duì)照組的趨勢(shì) ( 圖 1 ～ 3) 。 圖 4 是健 康 對(duì) 照 組 和 肺 氣 虛 證 組 治 療 前 、 療 治 后各一個(gè)樣 本 的 血 漿 TIC 對(duì) 照 圖 ， 圖 中 可 以 更 直 從 觀地看出肺氣虛證組治療前與健康對(duì)照組之間的差 異以及肺 氣 虛 證 組 治 療 后 向 健 康 對(duì) 照 組 回 歸 的 趨 勢(shì) 。 即在圖 4 中肺氣虛證治療后的圖形走向與健康 對(duì)照組的圖 形 走 向 比 較 一 致 ， 肺 氣 虛 證 治 療 前 的 而 圖形走向與 前 兩 組 差 別 較 大 ， 明 健 康 對(duì) 照 組 與 肺 說

氣虛證治療 后 的 代 謝 物 成 分 相 似 ， 肺 氣 虛 證 治 療 與 。 前的代謝物則差別較大 11. 圖 5 是使用 SIMCA- 5 軟件做代謝物 PCA 分析 的散點(diǎn)得分圖， 每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)樣本。肺氣虛證組治療 前、 治療后及健康對(duì)照組的樣本分別處于不同區(qū)域， 說 肺氣虛證組治療后的 明各組的代謝物都有各自的特征， 樣本處于本組治療前和健康對(duì)照組之間的區(qū)域， 說明肺 氣虛證組治療后的代謝物特征介于肺氣虛證組治療前 和健康對(duì)照組之間， 顯示中醫(yī)藥治療 COPD 穩(wěn)定期的有 效性( 代謝物成分相似的標(biāo)本集中在某一個(gè)區(qū)域) 。 11. 圖 6 是 使 用 SIMCA- 5 軟 件 在 正 離 子 模 式 下 PLS 分析結(jié)果輸出散點(diǎn)得分圖， 每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)樣本。 肺氣虛證組治療前、 治療后及健康對(duì)照組的樣本分別 分布在 3 個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)， 能夠被明顯地區(qū)分開來， 肺 氣虛證組治療前明顯偏離健康對(duì)照組， 說明二者的代 謝物有明顯差別; 而治療后又偏離出治療前， 有明顯回 歸健康對(duì)照組的趨勢(shì)， 說明藥物干預(yù)具有較好的作用 ( 代謝物成分相似的標(biāo)本集中在某一個(gè)區(qū)域) 。

圖2

肺氣虛證組治療前血漿樣本 TIC 及其保留時(shí)間為 5 min 離子圖 ( 分子量為 50 ～ 1 000)

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11. 圖 7 是 SIMCA- 5 軟件在正離子模式下 PLS 分析 的負(fù)載圖， 左右兩邊為肺氣虛證組區(qū)分健康對(duì)照組的可 能標(biāo)記物質(zhì)。對(duì)分組貢獻(xiàn)較大的重要變量因子 ( VIP) 值前 50 種代謝物進(jìn)行了提取， 根據(jù)同一分子量出現(xiàn)的 頻次， t 檢驗(yàn)篩選出候選標(biāo)志物， 經(jīng) 并觀察各組樣本血 漿中該代謝物的變化趨勢(shì)。在正離子模式下， 檢測(cè)得到 了肺氣虛證組治療前與健康對(duì)照組比較有明顯變化的 15 種物質(zhì)的質(zhì)荷比， 并且比較 15 種物質(zhì)在肺氣虛證組

治療前和健康對(duì)照組之間變化的趨勢(shì)( 表 2) 。 3 兩組氨基酸檢測(cè)結(jié)果比較 在對(duì)樣本做全譜 氨基酸代謝組學(xué)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)， 氨基酸在肺氣虛證組治 、 療前 后和健康對(duì)照組中變化明顯， 結(jié)果如下: 同型半 胱氨酸、 鵝肌肽、 肌肽在肺氣虛證組治療前出現(xiàn)， 肺氣 虛證組治療后和健康對(duì)照組未檢出; 組氨酸、 賴氨酸、 蘇氨酸、 纈氨酸、 甘氨酸、 絲胺酸、 酪氨酸、 天門冬酰胺、 b谷氨酰胺、 鳥氨酸、 半胱氨酸、 胱硫醚 、 丙氨酸 、 氨基

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圖7 表2
編號(hào) 3375 874 3523 2933 3466 2939 3526 3328 3527 2501 686 2550 475 2062 1889 保留時(shí)間 ( min) 5. 02 6. 72 7. 66 9. 19 7. 56 7. 42 7. 68 11. 23 7. 73 9. 24 12. 47 4. 61 2. 24 12. 49 9. 35 分子量 重要變量因子 ( 道爾頓) 202. 173 257. 579 228. 386 353. 070 74. 300 362. 690 228. 500 339. 508 228. 200 353. 383 337. 069 202. 109 135. 283 311. 628 522. 125 2. 81 2. 72 2. 34 2. 29 2. 27 2. 23 2. 18 2. 18 2. 11 2. 10 2. 10 2. 06 2. 03 2. 01 2. 01

11. PLS 分析結(jié)果負(fù)載圖 血漿 SIMCA- 5COPD 肺氣虛證潛在生物標(biāo)記物鑒定結(jié)果
標(biāo)記物名稱 變化趨勢(shì) ↑ ↓ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↓ ↑ ↓ ↑ ↑ 物質(zhì)成分 C10 H19 NO3 C16 H32 O2 C5 H10 NO7 P C20 H32 O5 C3 H7 NO C22 H35 NO3 C9 H9 NO6 C22 H42 O2 C9 H13 N3 O4 C20 H32 O5 C21 H28 O6 C10 H19 NO3 C5 H10 O4 C20 H38 O2 C26 H52 NO7 P HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB HMDB

Capryloylglycine( 辛酰甘氨酸) Palmitic acid( 十六烷酸) L-glutamic acid 5-phosphate( 5-磷酸左旋谷氨酸) 13， 14-dihydro15-keto-PGE2 ( 13， 14-雙氫- 酮基前列腺素 E2 ) 15 3-aminopropionaldehyde( 3-氨丙醛) N-arachidonoyl glycine( N-花生四烯酰甘氨酸) 5-( 2'-carboxyethyl) 4，6-dihydroxypicolinate［ β-羧乙基) - 6-二羥基甲 5-( 4， 基吡啶］ Cetoleic acid( 廿十烯酸) Deoxycytidine( 脫氧胞苷) 8-iso15-keto-PGF2α( 8-異15-酮基前列腺素 F2α) 18-oxocortisol( 18-氧代皮質(zhì)醇) Valproyl glycine( 丙戊酰甘氨酸) Deoxyribose( 脫氧核糖) Eicosenoic acid( 二十碳烯酸) LysoPC［ 1( 9Z) ］( 溶血性磷脂酰膽堿) 18:

3異丁酸、 乙醇胺、 甲基組氨酸、 脯氨酸在肺氣虛證組 治療前降低， 治療后升高; 苯丙氨酸、 色氨酸、 γ 氨基丁 酸、 α 氨基已二酸、 天門冬氨酸、 瓜氨酸、 谷氨酸、 α氨 b1基正丁酸、 丙氨酸、 δ 羥基賴氨酸、 甲基組氨酸、 磷 酸絲胺酸、 羥化胍氨酸、 正纈氨酸、 正異亮氨酸、 磷酸乙 醇胺、 肌氨酸、 精氨 ( 基 ) 琥珀酸肺氣虛證組治療前升 高， 治療后降低; 其他無明顯變化。 討 論

功能顯著 下 降 ( P ＜ 0. 05 ) ; 肺 氣 虛 證 組 使 用 六 味 補(bǔ)氣膠囊治 療 30 天 后 ， 功 能 稍 有 提 高 ， 明 中 肺 說 ， 氣 道 阻 塞、 流 受 限 是 不 醫(yī)藥干預(yù)有一定作 用 但 氣 可完全逆轉(zhuǎn)的 。 尋找疾病的生物標(biāo)記物是對(duì)疾病進(jìn)行代謝組學(xué)研 究的最終目標(biāo)。如果發(fā)現(xiàn)疾病特異性的標(biāo)記物， 將對(duì)疾 病的預(yù)防、 、 診斷 治療和預(yù)后等方面有著非常重大的意 義。本研究檢測(cè)到肺氣虛證組治療前與健康對(duì)照組比 可能與 COPD 的發(fā)生有非 較有明顯變化的 15 種物質(zhì)， 常密切的關(guān)系， 即疾病標(biāo)記物。 同時(shí)表明基于 HPLCMS / MS 的代謝組學(xué)可以檢測(cè)出特征性的代謝物， 用于

本研究肺氣虛證組治療前較健康對(duì)照組的肺

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中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志 2011 年 12 月第 31 卷第 12 期 CJITWM，December 2011，Vol． 31，No. 12

COPD 發(fā)病過程中及發(fā)病后與健康對(duì)照者的區(qū)分。 目前關(guān)于 COPD 發(fā)病標(biāo)志物或 COPD 肺氣虛證標(biāo) 志物的文獻(xiàn)報(bào)道甚少。本研究利用代謝組學(xué)方法試圖 尋找 COPD 肺氣虛證的標(biāo)志物進(jìn)行研究， 在檢測(cè)這些 體液中內(nèi)源性小分子物質(zhì)時(shí)， 代謝組學(xué)方法是一種重 ［5， 6 ］ 。 Bathen TF 等［7］ 利 用 核 磁 共 振 要的 技 術(shù) 手 段 ( NMR) 方法在乳腺癌研究中分析乳腺活組織樣品檢 測(cè)出 30 種內(nèi)源性代謝物， 發(fā)現(xiàn)與良性乳腺腫瘤組織、 健康人乳腺組織比乳腺癌組織中總膽堿化合物 ( tcho) 水平降低， 葡萄糖及丙三醇水平升高。 在前列腺癌的
［8 ］ 檢測(cè)也顯示了 tcho 及膽堿磷酸水平升高 。 趙曉山

始階段， 在設(shè)計(jì)上有不足之處， 如未設(shè)其他疾病及中醫(yī) ， 證候作對(duì)照 擬在今后的研究中加以改進(jìn)， 深入探索。
參 考 文 獻(xiàn)

等

對(duì)中醫(yī)脾臟在病理生理狀態(tài)下唾液進(jìn)行代謝組 N學(xué)研究， 正常對(duì)照組唾液中葡萄糖、 乙酰糖蛋白、 比 咯氨酸、 乙醇、 山梨醇、 羥脯氨酸等物質(zhì)含量相對(duì)較高， 濕熱蘊(yùn)脾組唾液中乙酸、 丙酸鹽、 �；撬岬任镔|(zhì)含量相 對(duì)較高， 脾氣虛證組唾液中主要是谷氨酰胺、 蔗糖、 乳 、 。 孫理軍等［10］研 酸鹽 苯丙氨酸等物質(zhì)含量相對(duì)較高 6、 究發(fā)現(xiàn)脾虛證大鼠白細(xì)胞介素- 唾液溶菌酶增高， 分 泌型免疫球蛋白 A 降低， 說明大鼠脾虛證存在著免疫 功能紊亂的現(xiàn)象， 且經(jīng)過四君子湯治療后， 紊亂的免疫 功能恢復(fù)正常， 萎縮及破壞的唾液腺有所恢復(fù)。 以上 研究結(jié)果揭示利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)中醫(yī)證候進(jìn)行探索 研究， 是有可能找到中醫(yī)證候的標(biāo)志物的。 本研究發(fā) 現(xiàn) 15 種潛在的 COPD 肺氣虛證的疾病標(biāo)記物， 但這些 物質(zhì)的定性和定量還需進(jìn)一步檢測(cè)， 這些標(biāo)記物能否 確立， 還要繼續(xù)探索研究， 結(jié)合臨床進(jìn)一步證實(shí)。 氨基酸是人類營(yíng)養(yǎng)的基礎(chǔ)， 是最重要的營(yíng)養(yǎng)組分。 對(duì)氨基酸的研究是代謝組學(xué)中最為重要的一環(huán)。目前 對(duì)氨基酸的研究是比較廣泛和系統(tǒng)的。臨床上經(jīng)常將 氨基酸分為必需氨基酸 ( 組氨酸、 賴氨酸等 ) 、 必需氨 —神經(jīng)內(nèi)分泌新陳代謝相關(guān)氨基酸 ( γ基酸衍生物 氨 基丁酸、 甘氨酸等) 、 / 能量新陳代謝相關(guān)氨基酸 ( α 氨 氨基已二酸、 天門冬酰胺等) 、 硫 新陳代謝相關(guān)氨基酸 ( 半胱氨酸、 胱硫醚等 ) 及其他代謝物相關(guān)氨基酸 ( α 氨基正丁酸、 丙氨酸等 ) 5 類， 根據(jù)各類氨基酸的變化 對(duì)身體健康狀況和疾病情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過對(duì)全譜氨 基酸檢測(cè)結(jié)果的系統(tǒng)分析提示檢測(cè)結(jié)果的臨床意義和 干預(yù)調(diào)節(jié)建議。 本研究發(fā)現(xiàn)， 組氨酸等在 COPD 肺氣 虛證組治療前降低， 中藥干預(yù)后升高， 苯丙氨酸等反 之， 而患 者 表 現(xiàn) 好 轉(zhuǎn)， 明 六 味 補(bǔ) 氣 膠 囊 能 夠 調(diào) 節(jié) 說 COPD 穩(wěn)定期肺氣虛證患者氨基酸代謝， 具有明確的 治療作用。提示應(yīng)用代謝組學(xué)技術(shù)與中醫(yī)學(xué)理論相結(jié) 合對(duì)中醫(yī)藥進(jìn)行研究有一定探索價(jià)值。本研究尚在初

［9 ］

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  本文關(guān)鍵詞：慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期肺氣虛證及其中藥干預(yù)的血漿代謝組學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。