發(fā)布時間：2020-07-06 13:24

【摘要】：目的:探求地黃飲子干預阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson disease,PD)腎虛髓空證模型大鼠的方證效應機制,部分揭示地黃飲子干預AD與PD腎虛髓空證異病同治的生物學機制。方法:(1)通過復習文獻中傳統(tǒng)醫(yī)學和現(xiàn)代醫(yī)學對AD、PD病因病機和發(fā)病機制的理論認識,梳理疾病、證候、證候要素間的關系,闡明地黃飲子治療AD與PD腎虛髓空證異病同證的依據(jù)。(2)復制病證結合動物模型:利用氫化可的松溶液灌胃的方法復制中醫(yī)腎虛髓空證動物模型,同時結合海馬CA1區(qū)定位注射Aβ_(25-35)多肽片段復制AD疾病動物模型,頸背部皮下注射魚藤酮溶液復制PD疾病動物模型,最終分別制備為AD、PD病證結合模型,造模成功后用地黃飲子對AD、PD病證結合模型進行干預。(3)采用行為學測試法、酶聯(lián)免疫法、HE染色、蛋白免疫印跡法和實時熒光定量反轉錄--聚合鏈式反應技術,觀察AD與PD病證結合動物模型的行為學變化、形態(tài)學變化、HPA軸功能變化、腦組織抗氧化水平、泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system,UPS)功能變化及地黃飲子的干預作用。結果1.理論研究:(1)近代醫(yī)家認為AD與PD均屬衰老性疾病,病位在腦,腎虛是其共同的證候要素,屬中醫(yī)學異病同證的范疇。補腎名方—地黃飲子具有滋腎陰,補腎陽,化痰開竅的作用,可用于AD、PD腎虛髓空證的治療。(2)現(xiàn)代醫(yī)學認為衰老引起的泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能衰退是AD與PD共同的發(fā)病機制之一,而現(xiàn)代中西醫(yī)結合關于腎實質的研究成果更將衰老定義為生理性腎虛,故生理性腎虛與泛素蛋白酶體系統(tǒng)功能的衰退密切相關。2.實驗研究:(1)行為學測試結果:AD模型組大鼠學習記憶能力及空間探索能力受損嚴重,地黃飲子可以顯著改善AD干預組大鼠的學習記憶能力;PD模型組大鼠四肢的肌力及協(xié)調平衡能力降低,地黃飲子可以明顯提高PD干預組大鼠四肢的肌力及協(xié)調平衡能力。(2)HPA軸功能檢測結果:AD模型組、PD模型組大鼠血清中CTH、ACTH、CORT含量顯著升高,證明腎虛髓空證候模型制備成功,經(jīng)地黃飲子干預后,AD干預組、PD干預組大鼠血清中CTH、ACTH、CORT含量顯著降低,表明地黃飲子可以抑制HPA軸功能虛性亢進,對AD、PD腎虛髓空證候模型具有干預作用。(3)腦組織抗氧化水平檢測結果:AD模型組、PD模型組大鼠腦勻漿中MAO、Lipo含量明顯升高,表明腦組織抗氧化水平降低,衰老模型誘導成功,經(jīng)地黃飲子干預后AD干預組、PD干預組大鼠腦組織中MAO、Lipo含量顯著降低,表明地黃飲子可以提高AD、PD干預組大鼠腦組織抗氧化水平,抑制大鼠腦組織老化,對AD、PD腎虛髓空證模型具有干預作用。(4)HE染色結果:AD模型大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞層數(shù)減少,細胞空泡樣變性顯著,地黃飲子可增加AD干預組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞層數(shù),減輕細胞空泡樣變性;PD模型大鼠黑質區(qū)DA能神經(jīng)元數(shù)目減少,膠質細胞增多,地黃飲子使PD干預組大鼠黑質區(qū)DA能神經(jīng)元數(shù)目增多,膠質細胞數(shù)目減少。(5)RT-PCR檢測UPS mRNA檢測結果:AD模型—海馬、PD模型—黑質、紋狀體中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶體mRNA的表達量降低,表明UPS功能降低,經(jīng)地黃飲子干預后,AD干預組—海馬、PD干預組—黑質、紋狀體中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶體mRNA的表達量增加,表明地黃飲子可以提高各組大鼠UPS的功能。(6)Western-blot檢測UPS蛋白表達結果:AD模型—海馬、PD模型—黑質、紋狀體中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶體的蛋白表達量減少,表明UPS功能減退,經(jīng)地黃飲子干預后,AD干預組—海馬、PD干預組—黑質、紋狀體中Ub、E1、UCH-L1及20S蛋白酶體蛋白的表達量增加,表明地黃飲子可以改善各組大鼠的UPS功能。結論:1.給予Wistar大鼠氫化可的松溶液灌胃結合海馬CA1區(qū)定位注射Aβ_(25-35)多肽片段可以成功復制阿爾茨海默病腎虛髓空證病證結合模型。2.給予Wistar大鼠氫化可的松溶液灌胃結合頸背部皮下注射魚藤酮溶液可以成功復制帕金森病腎虛髓空證病證結合模型。3.以衰老(生理性腎虛)引起的HPA軸功能虛性亢進、腦組織抗氧化水平降低、UPS衰退是AD、PD模型大鼠腎虛髓空證的內在機制,其中地黃飲子改善UPS降解功能是其干預AD與PD腎虛髓空證--異病同治的部分生物學機制。4.地黃飲子干預AD和PD腎虛髓空證共同的方證效應機制可能是:調控HPA軸功能虛性亢進、提高腦組織抗氧化水平、恢復泛素蛋白酶體系統(tǒng)降解功能。
【學位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

圖 1 AD 大鼠空間探索測試結果注：與正常對照組比較，**P <0.01；與假手術組比較，△△P <0.01）AD 大鼠 HPA 軸檢測結果 3 可知：與正常對照組相比，假手術組大鼠血清中 ACTH、CORT、CR

AD大鼠HPA軸功能測定結果

圖 3 AD 各組大鼠 MAO、Lipo 檢測結果注：與正常對照組比較，**P <0.01；與假手術組比較，△△P <0.01（四）AD 大鼠海馬組織鏡檢結果正常對照組海馬組織 CA1 區(qū)細胞排列緊密整齊，層數(shù)為 3-4 層，核仁深染

【參考文獻】

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本文編號：2743693