發(fā)布時間：2020-07-05 15:54

【摘要】：目的:以模擬糖尿病并發(fā)抑郁癥(DD)狀態(tài)下胎鼠海馬神經元為研究對象,探討海馬神經元突觸可塑性障礙導致DD發(fā)生的分子機制,并給予中藥復方左歸降糖解郁方干預,為DD發(fā)病機制的研究及防治提供新的思路與靶點。方法:1、取7-10d的胎鼠海馬進行分離、純化、培養(yǎng),神經元特異性烯醇化酶(NSE)免疫細胞化學染色進行細胞鑒定。2、將培養(yǎng)的海馬原代神經元隨機分為六組:空白組、對照組、模型組、NR阻斷劑組(MK-801)、陽性藥組(二甲雙胍+氟西汀)、左歸降糖解郁方組。根據分組情況,模型組加入高糖(15 mmol/L)和皮質酮(50μmol/L),對照組、陽性藥組、左歸降糖解郁方組于造模后分別加入體積分數10%的空白血清、陽性藥含藥血清、左歸降糖解郁方含藥血清,空白組加入10%的培養(yǎng)液,阻斷劑組加入MK-801(10μmol/L),干預18h。采用高內涵細胞成像分析技術(High Content Analysis,HCA)檢測CRHR1、GR、NR2A、NR2B、CaMK II、SynGap蛋白的表達;采用全細胞膜片鉗記錄海馬神經元細胞mEPSC,比較各組神經元細胞mEPSC頻率和電流幅度的差異。結果:1、經倒置顯微鏡觀察、NSE免疫細胞化學鑒定,所培養(yǎng)細胞為海馬神經元細胞,且純度達95%以上。2、經HCA分析顯示,空白組神經元形態(tài)完整,胞體飽滿,突觸之間相互交織成神經網絡。與空白組比較,模型組和對照組海馬神經元萎縮,突觸斷裂或神經網絡消失,CRHR1、NR2A、NR2B和CaMKII蛋白熒光強度上升,GR和SynGAP蛋白熒光強度降低(P0.01)。與對照組比較,NR阻斷劑組、陽性藥組和左歸降糖解郁方組突觸連接恢復,NR2A、NR2B和CaMKII蛋白熒光強度降低,SynGAP蛋白熒光強度上升(P0.01或P0.05);陽性藥組和左歸降糖解郁方組CRHR1蛋白熒光強度降低,GR蛋白熒光強度上升(P0.01),而NR阻斷劑組則無明顯差異。膜片鉗檢測,與空白組比較,模型組和對照組海馬神經元細胞mEPSC的頻率和電流幅度都顯著上升(P0.01);與對照組比較,NR阻斷劑組、陽性藥組和左歸降糖解郁方海馬神經元細胞mEPSC的頻率和電流幅度顯著下降(P0.01)。結論:左歸降糖解郁方對模擬DD狀態(tài)下海馬神經元GR、CRHR1、NR2A、NR2B蛋白的調控作用,以及對DD海馬神經元突觸可塑性結構與功能的調控作用,可能是抗DD大鼠神經元損傷的保護機制。
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

8經網絡。經 HCA 檢測，NSE 染色后陽性者呈綠色熒光，陽性率達 95%以上，該陽性細胞即海馬神經元。結果見圖1。圖 1 海馬原代神經元的一般形態(tài)學觀察及鑒定A：培養(yǎng) 7d 的細胞；B：NSE 免疫細胞化學染色；標尺：100μm3.2 對 GR、CRHR1 蛋白表達的影響經高內涵成像系統(tǒng)分析后顯示，藍色熒光為 DAPI標記的細胞核，橙黃色熒光為 R-PE標記的細胞骨架，綠色熒光為FITC 標記的GR 或CRHR1，而熒光強度與蛋白表達水平呈正相關�？瞻捉M神經元神經元形態(tài)完整，各突觸之間相互接觸形成致密的神經網絡，組織碎片少。與空白組比較，對照組與模型組的突觸之間連接斷裂，碎片增多，GR 熒光強度值明顯下降，CRHR1 熒光強度值明顯上升

含藥血清組和左歸降糖解郁方含藥血清組、NR阻斷劑組突起與突起之間形成網絡結構，陽性藥含藥血清組和左歸降糖解郁方含藥血清組能逆轉 GR 和 CRHR1 的表達，差異具有顯著性統(tǒng)計學意義（P<0.01），阻斷劑組無明顯變化。結果見圖2-4。圖 2 各組海馬神經元 GR 和 CRHR1 的熒光強度值情況A 空白組；B 模型組；C 對照組；D NR 阻斷劑組；E 陽性藥含藥血清組；F 左歸降糖解郁方含藥血清組；與 A 比較，**P<0.01；與 B 比較，##P<0.01

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 雷蕾;高燦;;AMPA受體轉運及其調控的分子機制[J];中國生物化學與分子生物學報;2015年09期

2 王鈺;張本恕;;海馬與帕金森病[J];國際神經病學神經外科學雜志;2014年01期

3 郭敏;李剛;;突觸可塑性相關蛋白的研究進展[J];神經藥理學報;2013年06期

4 宋波;敖強;公衍道;;CaMKⅡ和SynGAP在大鼠腦缺血中的神經保護作用[J];實用醫(yī)學雜志;2013年20期

5 孟盼;王宇紅;張秀麗;蔡川;韓遠山;;百事樂膠囊對慢性應激抑郁模型大鼠行為活動及海馬突觸素表達的影響[J];世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2013年07期

6 劉慧莉;趙剛;;運動、阿爾茨海默病與突觸可塑性[J];中國康復理論與實踐;2012年03期

7 張娟;畢艷;沈山梅;童國玉;崔世維;余偉男;朱大龍;;2型糖尿病患者抑郁的患病率及相關危險因素分析[J];中華內分泌代謝雜志;2011年10期

8 郝瑞;趙堪興;;谷氨酸能沉默突觸在視覺發(fā)育神經元可塑性中的作用[J];眼科研究;2010年05期

9 王步軍;錢永明;;ACTH與2型糖尿病合并抑郁癥的關系分析[J];醫(yī)學臨床研究;2009年08期

10 毛榕榕;田孟;徐林;;抑郁的大腦:抑郁癥的神經生物學研究和抗抑郁新藥研發(fā)[J];自然雜志;2009年03期

相關博士學位論文 前2條

1 孫韻君;CRH-CRHR1/GABA信號通路與抑郁癥發(fā)病的分子機制[D];中國科學技術大學;2016年

2 段婷婷;情緒記憶的海馬突觸可塑性機制研究[D];中國科學技術大學;2013年

本文編號：2742813