發(fā)布時(shí)間：2020-06-30 08:53

【摘要】：[目的]探討槲皮素、齊墩果酸和淫羊藿苷及其配伍對(duì)高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡、p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信號(hào)通路的影響。[方法]取新生24h SD大鼠的海馬組織,采用消化法對(duì)海馬神經(jīng)元進(jìn)行分離,密度梯度離心法和差速貼壁法進(jìn)行純化,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)蛋白免疫熒光法進(jìn)行純度鑒定。設(shè)置正常組葡萄糖(glucose,Glu)濃度為25mmol/L,高糖組Glu濃度為50mmol/L,p38MAPK 通路抑制劑 SB239063 為 10μmol/L,JNK通路抑制劑 SP600125為 lOμmol/L。在50mmol/L Glu的高糖培養(yǎng)基中,分別加入不同濃度梯度的槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷,利用細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)摸索各藥物最佳作用濃度及其對(duì)高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影響。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常組、高糖組、槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組神經(jīng)元的凋亡。Western Blot檢測(cè)各組神經(jīng)元p-p38、p38、p-JNK和JNK蛋白的表達(dá)。[結(jié)果]1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,經(jīng)鑒定純度為97.2±1.1%。2.CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對(duì)高糖條件下海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影響:與正常組相比,高糖組神經(jīng)元相對(duì)活性降低(P0.01);與高糖組相比,槲皮素10-5mol/L、齊墩果酸10-6mol/L,淫羊藿苷105mol/L組神經(jīng)元相對(duì)活性均升高(P0.01),選為最佳作用濃度。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡:與正常組相比,高糖組神經(jīng)元凋亡率增加(P0.01);與高糖組相比,其余各組神經(jīng)元凋亡率均減少(P0.01);槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組組間比較凋亡率無(wú)顯著差異(P0.05)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組神經(jīng)元凋亡率均減少(P0.01);分別與槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組神經(jīng)元凋亡率減少(P0.05);槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組組間比較凋亡率無(wú)顯著差異(P0.05)。4.Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá):與正常組相比,高糖組p-p38/p38比值增加(P0.01);與高糖組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組p-p38/p38比值減少(P0.01),JNK抑制劑組p-p38/p38比值增加(P0.01);與p38MAPK抑制劑組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、JNK抑制劑組p-p38/p38比值增加(P0.01)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-p38/p38比值減少(P0.01)。槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組組間比較無(wú)顯著性差異(P0.05)。與正常組相比,高糖組p-JNK/JNK比值增加(P0.01);與高糖組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組、JNK抑制劑組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與JNK抑制劑組相比,槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組、p38MAPK抑制劑組p-JNK/JNK比值增加(P0.01)。分別與槲皮素組、齊墩果酸組、淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸組、槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組、槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01)。與槲皮素+齊墩果酸組相比,槲皮素+淫羊藿苷組、齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值增加(P0.01),槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與槲皮素+淫羊藿苷組相比,齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值增加(P0.01),槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01);與齊墩果酸+淫羊藿苷組相比,槲皮素+齊墩果酸+淫羊藿苷組p-JNK/JNK比值減少(P0.01)。[結(jié)論]1.高糖條件下,海馬神經(jīng)元凋亡增加,p-p38/p38、p-JNK/JNK比值較正常組明顯升高,提示高糖環(huán)境可以將p38MAPK和JNK信號(hào)通路激活。2.槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷均能夠減少高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元的凋亡,降低p38MAPK和JNK信號(hào)通路中p38和JNK蛋白的磷酸化水平。3.與單體相比,槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷相互配伍后能進(jìn)一步減少高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元的凋亡,降低p38MAPK和JNK信號(hào)通路中p38和JNK蛋白的磷酸化水平。[創(chuàng)新點(diǎn)]以單體槲皮素、齊墩果酸、淫羊藿苷相互配伍對(duì)高糖條件下海馬神經(jīng)元進(jìn)行干預(yù),并從p38MAPK和JNK信號(hào)通路對(duì)其進(jìn)行凋亡機(jī)制的研究。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

邐北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院邐碩士研宄生學(xué)位論文邐逡逑海馬組織中淀粉樣前體蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ邋ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＡＰＰ）、早老素１邋（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ邋１，逡逑ＰＳ１）的表達(dá)，抑制（３－淀粉樣蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐ－ｐｒｏｔｅｉｎ，邋Ａｐ）形成［３６’３７］實(shí)現(xiàn)的。淫羊逡逑藿苷具有改善阿爾茨海默�。ǎ粒欤�ｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、調(diào)節(jié)逡逑細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、抑制ｔａｕ蛋白磷酸化及ＡＰ的生成、抗氧化應(yīng)激［３８４１］等能力。逡逑本實(shí)驗(yàn)擬觀察菟絲子、女貞子和淫羊藿提取物及其配伍對(duì)高糖環(huán)境下海馬神經(jīng)逡逑元凋亡及Ｐ３８ＭＡＰＫ和ＪＮＫ信號(hào)通路的影響，為明確上述藥物配伍后作用及進(jìn)一步逡逑優(yōu)化臨床處方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。逡逑

邐北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院邐碩士研宄生學(xué)位論文邐逡逑海馬組織中淀粉樣前體蛋白（ａｍｙｌｏｉｄ邋ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＡＰＰ）、早老素１邋（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ邋１，逡逑ＰＳ１）的表達(dá)，抑制（３－淀粉樣蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐ－ｐｒｏｔｅｉｎ，邋Ａｐ）形成［３６’３７］實(shí)現(xiàn)的。淫羊逡逑藿苷具有改善阿爾茨海默�。ǎ粒欤�ｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、調(diào)節(jié)逡逑細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、抑制ｔａｕ蛋白磷酸化及ＡＰ的生成、抗氧化應(yīng)激［３８４１］等能力。逡逑本實(shí)驗(yàn)擬觀察菟絲子、女貞子和淫羊藿提取物及其配伍對(duì)高糖環(huán)境下海馬神經(jīng)逡逑元凋亡及Ｐ３８ＭＡＰＫ和ＪＮＫ信號(hào)通路的影響，為明確上述藥物配伍后作用及進(jìn)一步逡逑優(yōu)化臨床處方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳曉光;李玲;李蒙蒙;苗光新;;山楂葉總黃酮對(duì)慢性腦缺血大鼠p38MAPK信號(hào)通路及炎癥因子表達(dá)的影響[J];中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志;2016年02期

2 趙攀;庹磊;徐潔;陳思其;徐東;詹琳;袁新初;袁瓊;;糖尿病大鼠海馬組織自噬減少與SIRT2下調(diào)有關(guān)[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2015年36期

3 金海燕;陳來(lái)江;李春波;徐穎樂(lè);張振洲;林國(guó)珍;高平進(jìn);鐘久昌;;AT1受體阻斷劑對(duì)小鼠海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子信號(hào)的影響[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2015年02期

4 王婧;莊朋偉;張艷軍;;神經(jīng)炎癥在2型糖尿病腦病發(fā)病機(jī)制中作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2015年04期

5 王景;張宏;田國(guó)慶;郭蕾蕾;;槲皮素對(duì)高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡及GRP78、Caspase-12蛋白表達(dá)的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年03期

6 張琳琳;張素玲;張玉蓮;王凱;王雪研;;齊墩果酸對(duì)快速老化小鼠海馬神經(jīng)元及APP/PS1基因表達(dá)的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2014年21期

7 陶婷婷;劉定華;;JNK抑制劑SP600125對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志;2014年11期

8 孫浩;范小艷;;血管緊張素受體阻滯劑治療老年高血壓患者輕度認(rèn)知障礙的療效[J];廣東醫(yī)學(xué);2014年04期

9 毛海芬;邢同岳;朱玉婷;;槲皮素對(duì)2型糖尿病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J];華西藥學(xué)雜志;2013年06期

10 丁曦;姚定國(guó);;黃芪多糖對(duì)2型糖尿病大鼠HPA軸及海馬糖皮質(zhì)激素受體水平的調(diào)節(jié)作用[J];江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

本文編號(hào)：2735126