發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 14:42

【摘要】：宮頸癌主要是由人乳頭瘤病毒持續(xù)感染引起的癌癥,主要包括宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸腺癌。雖然早、中期患者通過(guò)手術(shù)治療多數(shù)預(yù)后良好,但晚期和復(fù)發(fā)患者的治療效果仍有限,因此急需開(kāi)發(fā)新型治療方法和藥物。近年的研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞在惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中,產(chǎn)生了許多生化通路的改變,這些癌細(xì)胞高度依賴(lài)、而正常細(xì)胞依賴(lài)程度低的生化特征可能是癌細(xì)胞的脆弱點(diǎn),因此可用于對(duì)其進(jìn)行選擇性攻擊。臨床實(shí)踐及實(shí)驗(yàn)研究都證明,癌細(xì)胞比正常細(xì)胞對(duì)ROS更敏感,進(jìn)一步升高癌細(xì)胞的ROS或削弱其抗氧化能力被認(rèn)為是有效的抗癌方式。淫羊藿是藥用價(jià)值極高的傳統(tǒng)中藥,其主要活性成分是淫羊藿苷(Icariin)和淫羊藿素(Icaritin)等。大量研究證明淫羊藿素能誘導(dǎo)多種癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,其機(jī)理被認(rèn)為與JAK/STAT、MAPK或PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路抑制有關(guān)。但以上信號(hào)通路的抑制與癌細(xì)胞凋亡同時(shí)發(fā)生,其原因-后果關(guān)系有待確定。一些研究觀察到淫羊藿素處理的癌細(xì)胞中ROS水平顯著升高并伴隨細(xì)胞凋亡,但ROS與細(xì)胞凋亡之間的因果關(guān)系或ROS如何激活凋亡等尚不清楚。為此,本研究對(duì)淫羊藿素抑制宮頸腺癌細(xì)胞株HeLa和鱗狀上皮細(xì)胞癌細(xì)胞株SiHa的效果以及ROS在其抗癌活性中的作用進(jìn)行了探討。首先,MTT實(shí)驗(yàn)顯示淫羊藿素處理48小時(shí)后,HeLa和SiHa兩種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)均受到顯著抑制(IC_(50)分別為12.5和17μM),而非惡性的CCD?1095Sk成纖維細(xì)胞和HEK293人胚腎上皮細(xì)胞則只受到輕微影響,說(shuō)明淫羊藿素對(duì)癌細(xì)胞有選擇性毒性。其次,淫羊藿素處理HeLa和SiHa細(xì)胞3小時(shí)后,細(xì)胞內(nèi)ROS水平即已顯著升高,而用N-乙酰半胱氨酸(NAC)阻斷ROS升高后,淫羊藿素的抑制作用即基本消失,說(shuō)明淫羊藿素引起的ROS升高是其對(duì)HeLa和SiHa細(xì)胞選擇性毒性的基礎(chǔ)。接下來(lái)的堿性彗星電泳實(shí)驗(yàn)表明淫羊藿素處理12小時(shí)后,HeLa和SiHa細(xì)胞內(nèi)DNA斷裂數(shù)量顯著上升,加入OGG1 DNA糖苷酶后DNA斷裂數(shù)進(jìn)一步升高,而NAC處理阻止了淫羊藿素所致DNA斷裂的上升,說(shuō)明淫羊藿素處理所致ROS升高引起了顯著的DNA氧化損傷,由此導(dǎo)致了大量DNA鏈斷裂。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)淫羊藿素處理6小時(shí)后γH2AX和53BP1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著增多,用NAC處理后顯著減少,進(jìn)一步證明淫羊藿素處理引起了大量DNA損傷并激發(fā)了DNA損傷反應(yīng)(DDR)。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CDC25C-pS216隨淫羊藿素處理濃度的加大而升高,而CDK1-pT14水平下降。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)淫羊藿素處理HeLa和SiHa細(xì)胞24小時(shí)后,發(fā)生了G_2/M期細(xì)胞周期阻滯,NAC處理阻斷了CDC25C和CDK1蛋白的變化以及G_2/M期周期阻滯,顯示DNA損傷反應(yīng)激活了G_2/M細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)且與淫羊藿素所致ROS有關(guān)。Western blot檢測(cè)同時(shí)顯示活化的caspase 3和caspase 9以及Bax蛋白隨淫羊藿素處理濃度的加大而升高,而B(niǎo)cl-2和XIAP蛋白下降;流式細(xì)胞術(shù)和線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)淫羊藿素處理HeLa和SiHa細(xì)胞后,凋亡細(xì)胞比例呈時(shí)間依賴(lài)性增加,而NAC處理降低了凋亡蛋白的變化以及凋亡細(xì)胞數(shù)的上升,顯示ROS所致DNA損傷反應(yīng)同時(shí)激活了細(xì)胞凋亡。此外,qRT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果表明淫羊藿素處理前后HPV E6和E7基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平均無(wú)明顯改變,提示淫羊藿素對(duì)HeLa和SiHa的細(xì)胞毒性與HPV病毒基因的表達(dá)無(wú)關(guān)。為了系統(tǒng)地分析淫羊藿素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的作用機(jī)理,藥物刺激前后HeLa細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)的變化以同位素二甲基標(biāo)記和串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)提取,分離及質(zhì)譜鑒定,共同定量到716種蛋白質(zhì),藥物刺激后,14種蛋白質(zhì)顯著上調(diào),62種蛋白質(zhì)顯著下調(diào)。利用生物信息學(xué)方法對(duì)差異蛋白質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)整理與分析。發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白主要涉及12種分子功能;參與細(xì)胞過(guò)程調(diào)節(jié)及刺激應(yīng)答相關(guān)蛋白質(zhì)數(shù)目較多;差異表達(dá)蛋白多集中于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和外泌體;參與癌癥通路等,檢測(cè)到細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白基因數(shù)6個(gè)。印證了淫羊藿素最終誘發(fā)宮頸癌細(xì)胞內(nèi)源凋亡途徑。為支持淫羊藿素的開(kāi)發(fā),以計(jì)算機(jī)輔助的虛擬篩選技術(shù)對(duì)淫羊藿素的成藥性和毒理學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析。結(jié)果預(yù)測(cè)淫羊藿素具有很好的水溶性和腸道吸收性;其血漿蛋白結(jié)合率小于90%,具有很高的血腦屏障通透性;毒理學(xué)性質(zhì)分析預(yù)測(cè)淫羊藿素的致突變性和致癌性低,且有良好的ADMET性質(zhì)。通過(guò)本研究,進(jìn)一步揭示了淫羊藿素的抗癌機(jī)理,預(yù)測(cè)了其具有良好的成藥性,為淫羊藿素開(kāi)發(fā)提供了重要數(shù)據(jù)和參考信息。
【圖文】：

圖 1.2.1 淫羊藿苷分子（A）和淫羊藿素分子式（B）2 淫羊藿素的抗腫瘤作用淫羊藿素對(duì)不同類(lèi)型腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制作用，淫羊藿素可以抑制增殖、誘導(dǎo)調(diào)亡，調(diào)控細(xì)胞周期、抗血管生成、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和免疫調(diào)節(jié)多種細(xì)胞靶點(diǎn)以及信號(hào)通路發(fā)揮其抗腫瘤作用。目前已經(jīng)證實(shí)，淫羊藿素癌[93]、白血病[94]、惡性淋巴瘤[95]、前列腺癌[96]、宮頸癌[97]以及肝細(xì)胞癌具有抑制增殖和促凋亡作用。如對(duì)乳腺癌，2-5μM 的淫羊藿素可發(fā)揮抗雌體作用，抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞周期阻滯在 G2/M 期甚至誘發(fā)凋生；對(duì)于白血病、惡性淋巴瘤以及多發(fā)性骨髓瘤等，淫羊藿素表現(xiàn)出劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引起周期阻滯于 G2/M 期，且副作用很低[99]；對(duì)于前列腺藿素有利于促進(jìn)雄激素受體（Androgen Receptor，， AR）以及雄激素受體

圖 1.3.2 ROS 來(lái)源途徑OS 的清除機(jī)制會(huì)為細(xì)胞帶來(lái)極大的損害，而細(xì)胞也進(jìn)化出了一述，對(duì)于 O2ˉ的清除，主要依賴(lài)于 SOD 迅速轉(zhuǎn)化為主要依賴(lài)于抗氧化蛋白（peroxiredoxins，PRXs）thione peroxidase，GPXs）以及過(guò)氧化氫酶（catal H2O[116，117]。這幾種酶會(huì)在氧化態(tài)與還原態(tài)之間實(shí)現(xiàn)氧化壓力，進(jìn)行氧化還原反應(yīng)平衡調(diào)節(jié)的主要調(diào)我保護(hù)機(jī)制。當(dāng)進(jìn)行蛋白酶體亞基調(diào)節(jié)，異生物質(zhì)，NRF2 作為一種轉(zhuǎn)錄因子被激活，使下游大量蛋2 的存在時(shí)間很短，通過(guò)與胞漿中的 KEAP1 以及1 相互作用介導(dǎo)蛋白酶體降解過(guò)程[119]。當(dāng) H2O2的
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄧過(guò)房;;2016年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)背景下的細(xì)胞死亡方式再認(rèn)識(shí)[J];中學(xué)生物學(xué);2017年05期

2 寧旭;于忠鳴;;創(chuàng)造性的自主毀滅——細(xì)胞凋亡簡(jiǎn)介[J];中學(xué)生物學(xué);2006年10期

3 劉春秋;卞茂紅;;藥物致紅細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];臨床輸血與檢驗(yàn);2017年04期

4 劉晨;馮雪;;人CXCR4基因?qū)σ认侔㏒W1990細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響[J];健康之路;2017年06期

5 王方;;過(guò)表達(dá)TIPE2上調(diào)BID分子促進(jìn)H446細(xì)胞凋亡[J];科學(xué)中國(guó)人;2017年18期

6 賈寧;孫榮釗;;病毒感染對(duì)細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2012年08期

7 趙君怡;劉偉國(guó);郭秀麗;;一氧化氮與細(xì)胞凋亡相關(guān)疾病的關(guān)系及其調(diào)控[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2010年14期

8 黃小丹;;細(xì)胞凋亡與疾病[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2009年05期

9 陳藝娟;鄧甲興;林永利;;中藥影響細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];福建畜牧獸醫(yī);2008年01期

10 劉伍梅;汪銘書(shū);程安春;周毅;劉芳;張平英;李雪梅;陳孝躍;;PRRSV感染Marc-145細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李佑生;王文健;劉毅;何春燕;何燕銘;陳偉華;應(yīng)健;;黃芪多糖丹酚酸對(duì)高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)血栓病分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)暨廣東省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)血栓病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)首屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 覃玉榮;張志勇;;細(xì)胞濃度變化對(duì)細(xì)胞凋亡率影響及其機(jī)理初探[A];全國(guó)電磁兼容學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

4 吳經(jīng)緯;湯長(zhǎng)發(fā);;運(yùn)動(dòng)中細(xì)胞凋亡的線(xiàn)粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2006年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

5 蒲小平;李長(zhǎng)齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

6 符必謙;奚勝艷;王彥暉;;中藥及復(fù)方促腫瘤細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制[A];第二屆臨床中藥學(xué)大會(huì)論文集[C];2018年

7 林其誰(shuí);;線(xiàn)粒體與細(xì)胞凋亡[A];第七屆全國(guó)生物膜學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];1999年

8 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

9 寧存德;;細(xì)胞凋亡與口腔疾病[A];FDI、CSA臨床口腔進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1999年

10 華子春;;靶向性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡藥物研發(fā)[A];全國(guó)第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 方方　曹雪琴;吳政星的挑戰(zhàn)與求索[N];科學(xué)時(shí)報(bào);2011年

2 實(shí)習(xí)生 劉雨亭;細(xì)胞凋亡如何推進(jìn)？以觸發(fā)波的“名義”[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

4 記者 何德功;基因變異可能致癲癇[N];新華每日電訊;2004年

5 ;3’取代吲哚類(lèi)衍生物誘導(dǎo)HL－60細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

6 ;As_(2)S_(2)與STI571協(xié)同誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

7 董學(xué)清 吳延華;阿膠抑癌作用顯著[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

8 高書(shū)明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

9 楊堤林;中藥可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

10 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 白曉雪;MiR-196b和miR-144-5p對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及凋亡的影響[D];吉林大學(xué);2019年

2 陳欣;淫羊藿素誘導(dǎo)人宮頸癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2019年

3 李玉明;豬繁殖與呼吸綜合征病毒誘導(dǎo)bystander細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2017年

4 魏薇;我國(guó)優(yōu)勢(shì)基因型弓形蟲(chóng)蟲(chóng)株致密顆粒蛋白15誘導(dǎo)人絨毛膜細(xì)胞JEG-3凋亡的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

5 徐祥;Nupr1及C/EBPβ在甲基苯丙胺誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

6 沈雯;循環(huán)miRNA參與吸煙所致COPD的作用及機(jī)制研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

7 朱思遠(yuǎn);晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

8 鄭旭;白藜蘆醇對(duì)甲狀腺癌防治作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2018年

9 柏素云;新型吡唑香豆素衍生物和二茂鐵吡唑衍生物對(duì)細(xì)胞凋亡、自噬和細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

10 陳玲;游離脂肪酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響及作用機(jī)制[D];山東大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙亞男;運(yùn)動(dòng)預(yù)處理調(diào)節(jié)EPO對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷及細(xì)胞凋亡的影響[D];成都體育學(xué)院;2019年

2 牛涵;PSAP在SOD1~(G93A)過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中的作用[D];吉林大學(xué);2019年

3 段一夢(mèng);壁虎活性組分通過(guò)ROS誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];河南科技大學(xué);2019年

4 黃紫樂(lè);NO供體JS-K經(jīng)PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[D];河南科技大學(xué);2019年

5 黃意軒;炭黑吸附苯并芘顆粒物誘導(dǎo)NR8383肺泡巨噬細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2019年

6 雒鈺杰;干擾Alox5基因促進(jìn)K562/ADM細(xì)胞凋亡及逆轉(zhuǎn)其耐藥的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

7 顧桓;直腸癌細(xì)胞中環(huán)氧合酶1的下調(diào)通過(guò)NF-kB通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[D];云南大學(xué);2018年

8 俞丹;斜紋夜蛾親環(huán)素D乙�；�在MbBV誘導(dǎo)寄主血細(xì)胞凋亡中的作用的研究[D];云南大學(xué);2018年

9 牟云鴻;促紅細(xì)胞生成素對(duì)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞凋亡的影響及其可能機(jī)制[D];南昌大學(xué);2019年

10 黃銀亮;線(xiàn)粒體靶向的比率型雙光子熒光探針對(duì)細(xì)胞凋亡的可視化研究[D];安徽大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2595188