【摘要】：目的:通過九香蟲水提液對錳暴露大鼠的干預(yù)行為,來探討九香蟲水提液對錳暴露大鼠睪酮合成的影響及其機(jī)制。方法:48只成年雄性SD大鼠,按照隨機(jī)數(shù)字表分為6組,即:空白組、模型組、九香蟲水提液低、中、高劑量干預(yù)組及陽性組,8只/組。模型組、九香蟲水提液各組和陽性組大鼠每天固定時(shí)間根據(jù)大鼠體重腹腔注射相應(yīng)體積的氯化錳水溶液(MnCl_2·4H_2O)5 d/w,1次/d,共30天;空白組根據(jù)大鼠體重腹腔注射相應(yīng)體積的生理鹽水。九香蟲水提液低、中、高劑量干預(yù)組在腹腔注射氯化錳的同時(shí),分別灌胃給予50mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg的九香蟲水提液,陽性組在在腹腔注射氯化錳的同時(shí)給予櫞酸西地那非水溶液(1.25 mg/kg)灌胃,空白組給予雙蒸水灌胃。7 d/w,1次/d,共30天。對如下指標(biāo)進(jìn)行檢測:1.大鼠生殖能力和性功能指標(biāo)的檢測:大鼠附睪精子數(shù)目、睪丸及雄激素依賴性器官(附睪、精囊腺+前列腺、提肛肌、包皮腺)的臟器系數(shù);2.雄性大鼠相關(guān)行為學(xué)觀察實(shí)驗(yàn),其主要通過觀察15 min之內(nèi)雄性大鼠的交配行為相關(guān)指標(biāo),包括大鼠交配行為的四個(gè)階段(撲捉、騎跨、插入及射精)的潛伏期及次數(shù);3.蘇木精-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察大鼠睪丸和附睪組織的顯微結(jié)構(gòu)變化,電鏡下觀察睪丸間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化;4.ELISA法檢測大鼠血漿中睪酮(T)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;5.qPCR檢測睪酮合成通路中的相關(guān)基因star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達(dá)情況;6.Western blot檢測睪酮合成通路中的關(guān)鍵蛋白StAR、CYP11A1和HSD3β1的表達(dá)情況。結(jié)果:1、精子數(shù)目、睪丸和雄激素依賴性器官的臟器系數(shù):與空白組相比,模型組大鼠在附睪精子數(shù)目,睪丸和雄激素依賴性器官(附睪、提肛肌、精囊腺和前列腺)的臟器系數(shù)間存在顯著性差異(P0.05);經(jīng)過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非水溶液灌胃以后,其附睪精子數(shù)目及雄激素依賴性器官的臟器系數(shù)均有所提高,其中以九香蟲水提液50 mg/kg、100 mg/kg劑量灌胃干預(yù)組和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)組在大鼠附睪精子數(shù)目,雄激素依賴性器官(精囊腺+前列腺以及提肛肌)的臟器系數(shù)方面具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2、大鼠交配行為:與空白組相比,模型組大鼠在交配行為四個(gè)階段的潛伏期明顯延長(P0.05),同時(shí)其交配行為四個(gè)階段的次數(shù)顯著降低(P0.05);經(jīng)不同劑量九香蟲水提液灌胃干預(yù)后,錳損傷大鼠在交配行為四個(gè)階段的潛伏期顯著縮短同時(shí)次數(shù)明顯增加,其中以九香蟲水提液低、中劑量灌胃干預(yù)組和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)組最為顯著(P0.05)。3、大鼠睪丸和附睪組織形態(tài):與空白組相比,模型組大鼠睪丸間質(zhì)組織與生精小管之間明顯疏離,生精小管內(nèi)部結(jié)構(gòu)出現(xiàn)較明顯破壞,生精小管內(nèi)觀察到較少精子細(xì)胞的存在,各級生精細(xì)胞排列紊亂、層數(shù)明顯減少,生精小管內(nèi)部可見部分生精細(xì)胞空泡化改變。經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,睪丸生精小管的基膜較完整,睪丸間質(zhì)組織與生精小管之間的間隙明顯縮小,生精小管管腔中各級生精細(xì)胞排列緊密有序,可看到管腔中較多精子細(xì)胞的存在。與空白組相比,模型組大鼠錳暴露后,附睪的輸出小管中存在的精子數(shù)量明顯減少。經(jīng)過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,錳暴露大鼠附睪輸出小管內(nèi)的精子數(shù)量顯著增加,接近空白組。電鏡結(jié)果表明,模型組大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多處擴(kuò)張,經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非干預(yù)后,擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯好轉(zhuǎn),接近正常組。4、大鼠血漿睪酮、黃體生成素和卵泡刺激素水平:與空白組相比,模型組錳暴露大鼠血漿睪酮水平顯著降低(P0.05)。通過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,大鼠血漿中的睪酮水平顯著升高(P0.05)。其中以九香蟲水提液低劑量灌胃干預(yù)組效果最好。與空白組相比,模型組大鼠血漿中的黃體生成素和卵泡刺激素水平顯著升高(P0.05),通過九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,大鼠血漿中的黃體生成素和卵泡刺激素水平顯著降低(P0.05),接近空白組。其中以九香蟲水提液低劑量組效果較好。5、大鼠睪酮合成通路相關(guān)基因表達(dá):與空白組相比,模型組錳暴露大鼠睪酮合成通路的相關(guān)基因star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05),經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,star、cyp11a1和hsd3β1 mRNA的表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。6、大鼠睪酮合成通路相關(guān)蛋白表達(dá):與空白組相比,模型組錳暴露大鼠睪酮合成通路的相關(guān)蛋白StAR、CYP11A1和HSD3β1蛋白表達(dá)量顯著下降;經(jīng)九香蟲水提液和枸櫞酸西地那非灌胃干預(yù)后,StAR、CYP11A1和HSD3β1蛋白的表達(dá)顯著增加(P0.05),這點(diǎn)可以通過大鼠血漿睪酮水平反映出來。結(jié)論:1.九香蟲水提液可以改善錳暴露大鼠的生殖能力及交配行為。2.九香蟲水提液對錳暴露大鼠睪丸曲細(xì)精管、附睪輸出小管和睪丸間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)具有改善作用,有利于大鼠生精微環(huán)境的改善。3.九香蟲水提液改善錳暴露大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的可能干預(yù)機(jī)制為:通過增加錳暴露大鼠睪酮合成通路中的相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),提高了大鼠血漿睪酮水平,降低了黃體生成素和卵泡刺激素水平,維持大鼠體內(nèi)生殖內(nèi)分泌激素的動(dòng)態(tài)平衡,改善大鼠的生精狀態(tài)。
【圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 王涌從圖 1 和圖 2 中我們可觀察到大鼠睪丸組織顯微結(jié)構(gòu)形態(tài)的變化：空白組大鼠的睪丸組織結(jié)構(gòu)完整，生精小管內(nèi)部分布著排列有序的各級生精細(xì)胞，管腔中分布著較多的精子細(xì)胞，睪丸間質(zhì)組織中具有豐富的毛細(xì)血管以及圍繞毛細(xì)血管周圍呈簇狀分布的間質(zhì)細(xì)胞（圖 1A、2A 圖標(biāo)所示）。與空白組相比較，模型組（圖 1B、2B）錳暴露大鼠睪丸生精小管和間質(zhì)組織之間的間隙明顯增寬，生精小管管腔內(nèi)部的精子細(xì)胞較少，生精小管內(nèi)部可見部分生精細(xì)胞呈空泡化改變。與模型組相比較，經(jīng)不同劑量九香蟲干預(yù)后，睪丸組織的生精小管內(nèi)分布著排列有序的各級生精細(xì)胞，管腔中分布著較多的精子細(xì)胞，睪丸生精小管和間質(zhì)組織之間的間隙明顯縮小，接近正常組（見圖 1C、2C）。

圖 2 九香蟲對錳暴露雄性大鼠睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響（HE 40×，比例尺=20 um）注：A 空白組; B 模型組;（C-E）九香蟲低、中、高劑量組；F 陽性組.2.3.2 光鏡下大鼠附睪組織顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)評估從圖 3 和圖 4 中我們可觀察到大鼠附睪組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化：空白組中可觀察到大鼠精子均勻的分布于附睪的輸出小管內(nèi)，充滿于附睪輸出小管。從圖 4A 中可以看出，附睪管內(nèi)的內(nèi)層黏膜上皮完整、光滑，，主細(xì)胞緊密排布在一起。與空白組相比，模型組的附睪輸出小管內(nèi)，精子淡染，精子的密度減少，并且相對集中的分布于附睪輸出小管一側(cè)。經(jīng)不同劑量九香蟲和枸櫞酸西地那非干預(yù)后，附睪輸出小管中的精子密度得到顯著改善，分布也較均勻（見圖 3C、4C）。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2590587