發(fā)布時間：2020-12-07 10:25

　　目的:本項目擬以廣泛存在于環(huán)境介質(zhì)中的氯代有機磷阻燃劑（TCEP及TCIPP）為研究對象,以斑馬魚為模式生物,探討TCEP及TCIPP對斑馬魚仔魚早期神經(jīng)發(fā)育的影響,以揭示TCEP及TCIPP對斑馬魚的神經(jīng)毒性作用及潛在的分子機制。方法:將斑馬魚胚胎（受精后2小時[hpf]內(nèi)）暴露于不同濃度的TCEP及TCIPP（0,100,500及2500μg/L）直至120 h,同時選用典型的神經(jīng)毒性物質(zhì)毒死蜱（CPF,100μg/L）作為陽性對照。實驗過程中對斑馬魚仔魚72 hpf孵化率、96 h死亡率以及畸形率等生長發(fā)育指標進行測定,同時對斑馬魚仔魚在光暗交替刺激下的自主運動行為、乙酰膽堿含量和乙酰膽堿酯酶活性、中樞神經(jīng)發(fā)育相關(guān)的基因（主要包括:α1-tubulin、mbp、syn2α、gfap、shha、ache及gap43）和蛋白等指標進行測定,綜合評價TCEP和TCIPP對斑馬魚早期神經(jīng)發(fā)育的影響,并與CPF進行對比研究。結(jié)果:我們的結(jié)果表明:陽性對照CPF能誘導(dǎo)斑馬魚仔魚出現(xiàn)典型的發(fā)育毒性,主要表現(xiàn)為:與對照組相比,孵化率（81.4±5.62%）和存活率（82.7±4.25%）均顯著降... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要縮略詞
第1章 前言
第2章 材料
    2.1 實驗主要試劑
    2.2 實驗主要儀器
    2.3 主要溶液的配制
        2.3.1 30%丙烯酰胺
        2.3.2 1.0M Tris-Cl（pH6.8）
        2.3.3 1.5M Tris-CI（pH8.8）
        2.3.4 10%過硫酸氨（10%APS,m/v）
        2.3.5 5×Tris-Gly電泳緩沖液
        2.3.6 BCA工作液
    2.4 斑馬魚
第3章 實驗方法
    3.1 斑馬魚的飼養(yǎng)和胚胎暴露
    3.2 斑馬魚仔魚的運動行為測定
    3.3 斑馬魚仔魚的神經(jīng)遞質(zhì)含量測定
    3.4 仔魚的AChE活性測定
    3.5 中樞神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄分析
        3.5.1 總RNA的提取
        3.5.2 cDNA合成和熒光定量PCR檢測
    3.6 中樞神經(jīng)發(fā)育相關(guān)蛋白質(zhì)提取和 Western blot 實驗
        3.6.1 蛋白質(zhì)的提取與測定
        3.6.2 免疫印跡試驗檢測與神經(jīng)發(fā)育有關(guān)蛋白的表達
    3.7 TCEP和 TCIPP在暴露溶液中的濃度測定
    3.8 統(tǒng)計分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 暴露溶液中TCEP和 TCIPP的定量
    4.2 TCEP及 TCIPP處理后斑馬魚仔魚的發(fā)育毒性指標
    4.3 斑馬魚仔魚的運動行為分析
    4.4 神經(jīng)遞質(zhì)含量和AchE活性檢測
    4.5 與神經(jīng)發(fā)育有關(guān)的基因的表達
    4.6 與神經(jīng)發(fā)育有關(guān)的蛋白質(zhì)的表達
第5章 討論
第6章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項目


【參考文獻】：
期刊論文
[1]有機磷酸酯阻燃劑的環(huán)境暴露與遷移轉(zhuǎn)化研究進展[J]. 高小中,許宜平,王子健.  生態(tài)毒理學(xué)報. 2015(02)
[2]東江表層沉積物中的有機磷系阻燃劑[J]. 阮偉,譚曉欣,羅孝俊,麥碧嫻.  中國環(huán)境科學(xué). 2014(09)
[3]氣相色譜/質(zhì)譜法檢測灰塵、土壤和沉積物中有機磷酸酯[J]. 鹿建霞,季雯,馬盛韜,于志強,王昭,李寒,任國發(fā),傅家謨.  分析化學(xué). 2014(06)
[4]固相萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法測定水中6種有機磷酸酯類阻燃劑和增塑劑[J]. 秦宏兵,范苓,顧海東.  分析科學(xué)學(xué)報. 2014(02)



本文編號：2903090