發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 06:35

　　目的通過體外PC12細(xì)胞實(shí)驗(yàn),探討錳染毒對神經(jīng)細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響及該信號(hào)通路在錳致神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激、凋亡過程中的作用。02575125μM Mn SOPC12方法采用0,25,75,125μM硫酸錳（Mn SO4）分別對PC12細(xì)胞進(jìn)行染毒24小時(shí)后,在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用CCK8法測定其存活率,Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒檢測其凋亡率,南京建成試劑盒檢測其SOD、GSH-Px、CAT及MDA水平,Western Blot法測定其PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白Akt、Fox O3的相對表達(dá)量表達(dá)及其磷酸化水平,熒光實(shí)時(shí)定量PCR法測定其Bcl-2、Bax、Caspase-3 m RNA相對表達(dá)水平。此外,采用濃度為50μM的PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002提前處理PC12細(xì)胞1小時(shí)后Mn SO4染毒,染錳劑量、時(shí)間、檢測指標(biāo)同上述染毒實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:（1）隨著染錳劑量的增加,PC12細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT活力降低,MDA含量升高。高劑量組SOD、GSH-Px活力分別為（219.308±6.602）U/ml、（189.3... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
個(gè)人簡歷
英文縮略詞
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要儀器與試劑
        2.1.1 儀器
        2.1.2 試劑
    2.2 PC12細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)
        2.2.1 PC12細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 PC12細(xì)胞錳染毒劑量及時(shí)間的選定
        2.2.3 CCK-8 法檢測PC12細(xì)胞存活率
        2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)FCM檢測PC12細(xì)胞凋亡率
    2.3 PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激水平測定
        2.3.1 羥胺法檢測PC12細(xì)胞內(nèi)SOD水平
        2.3.2 比色法檢測PC12細(xì)胞內(nèi)GSH-PX水平
        2.3.3 可見光法檢測PC12細(xì)胞內(nèi)CAT水平
        2.3.4 TBA法檢測PC12細(xì)胞內(nèi)MDA水平
    2.4 Western Blot實(shí)驗(yàn)
    2.5 RT-PCR檢測PC12細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)
    2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法
3 結(jié)果
    3.1 不同硫酸錳濃度處理對PC12細(xì)胞存活率的影響
    3.2 不同硫酸錳染毒時(shí)間對PC12細(xì)胞存活率的影響
    3.3 硫酸錳對PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
    3.4 硫酸錳對PC12細(xì)胞凋亡率的影響
    3.5 硫酸錳對PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響
    3.6 硫酸錳對PC12細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響
        3.6.1 硫酸錳對PC12細(xì)胞Akt及其磷酸化蛋白表達(dá)量的影響
        3.6.2 硫酸錳對PC12細(xì)胞Fox O3及其磷酸化蛋白表達(dá)量的影響
    3.7 硫酸錳對PC12細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.7.1 硫酸錳對PC12細(xì)胞Bcl-2 基因mRNA表達(dá)的影響
        3.7.2 硫酸錳對PC12細(xì)胞Bax基因m RNA表達(dá)的影響
        3.7.3 硫酸錳對PC12細(xì)胞Caspase-3 基因m RNA表達(dá)的影響
    3.8 PC12細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)量與氧化應(yīng)激、凋亡指標(biāo)的的相關(guān)關(guān)系
    3.9 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制實(shí)驗(yàn)
        3.9.1 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞凋亡率的影響
        3.9.2 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
        3.9.3 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響
        3.9.4 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響
            3.9.4.1 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞Akt及其磷酸化蛋白表達(dá)量的影響
            3.9.4.2 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞FoxO3及其磷酸化蛋白表達(dá)量的影響
        3.9.5 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響
            3.9.5.1 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞Bcl-2 基因m RNA表達(dá)的影響
            3.9.5.2 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞Bax基因mRNA表達(dá)的影響
            3.9.5.3 PI3K/Akt信號(hào)通路抑制后錳對PC12細(xì)胞Caspase-3 基因mRNA表達(dá)的影響
4 討論
4染毒對PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響">    4.1 MnSO₄染毒對PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響
4染毒對PC12細(xì)胞凋亡的影響">    4.2 MnSO₄染毒對PC12細(xì)胞凋亡的影響
4染毒對PC12細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響及該信號(hào)通路在錳致PC12細(xì)胞毒性中的作用">    4.3 MnSO₄染毒對PC12細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路的影響及該信號(hào)通路在錳致PC12細(xì)胞毒性中的作用
5 結(jié)論
    5.1 研究結(jié)論
    5.2 研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 研究的不足及展望
參考文獻(xiàn)
綜述 錳對信號(hào)通路的影響
    參考文獻(xiàn)
致謝
研究生期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：2897164