發(fā)布時(shí)間：2020-11-06 06:17

　　 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(Burkholderia gladioli)一種廣泛存在的細(xì)菌,其中部分菌株產(chǎn)米酵菌酸和毒黃素。我國(guó)在上世紀(jì)70-80年代椰毒假單胞菌(曾用名)食物中毒較為普遍和嚴(yán)重時(shí)期對(duì)該菌的報(bào)道和研究較多,之后相關(guān)研究鮮見(jiàn),但至今無(wú)法杜絕該類細(xì)菌食物中毒事件的發(fā)生且死亡率居高不下。采用現(xiàn)代手段對(duì)該菌進(jìn)行深入研究具有理論和實(shí)際價(jià)值。本研究以酵米面食物中毒事件高發(fā)地區(qū)—云南省文山州和紅河州所采土樣、黃白玉米面以及吊漿粑為主要研究材料,運(yùn)用GB/T 4789.29─2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗(yàn)》改良的分離方法對(duì)研究材料進(jìn)行分離,以食品及環(huán)境樣品中初步分離的13株疑似唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(Burkholderia gladioli)為研究對(duì)象,通過(guò)比較生理生化檢測(cè)法、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)法和recA序列分析法,得到快速準(zhǔn)確鑒定唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(B.gladioli)的方法。結(jié)果表明,13株疑似菌株經(jīng)MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鑒定為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(B.gladioli),而VITEK 2 COMPACT生理生化法鑒定8株(62%)為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌,其他5株為棲稻假單胞菌(Pseudomonas oryzihabitans)。在B.gladioli的鑒定方法中,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法鑒定結(jié)果一致且準(zhǔn)確,而VITEK 2 COMPACT生化檢測(cè)法存在缺陷。相比傳統(tǒng)生理生化鑒定方法,MALDI-TOF-MS法和recA序列分析法在唐菖蒲伯克霍爾德氏菌鑒定中更為快速、準(zhǔn)確。本研究采用近幾年發(fā)展較快的分型方法多位點(diǎn)序列分型(MLST)對(duì)分離株進(jìn)行分型,來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室13株分離株的6對(duì)管家基因的alleles被檢測(cè)出來(lái),其中g(shù)yrB突變率最高,13株菌種有5株菌有新的alleles,突變率達(dá)到38.5%,而atpD與gltB相對(duì)比較保守,未發(fā)現(xiàn)新的管家基因型。經(jīng)過(guò)6對(duì)基因的多基因聯(lián)合建樹,證明6對(duì)管家基因能夠?qū)⒉�克霍爾德氏屬中的致病菌株與環(huán)境分離株區(qū)分開來(lái)。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠毒性試驗(yàn)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)米酵菌酸進(jìn)行測(cè)定。采用分光光度法對(duì)毒黃素進(jìn)行粗測(cè)。菌株中兩種毒素的產(chǎn)量與菌株的來(lái)源無(wú)關(guān),但可以看出分離株均有較強(qiáng)的產(chǎn)毒能力。實(shí)驗(yàn)對(duì)食物中毒案例中分離得到的B.gladioliYD-2和B.gladioliCICC10574進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,這兩種菌株的生長(zhǎng)情況很類似,在37℃培養(yǎng)時(shí),菌株于pH5.05時(shí)生長(zhǎng)最為旺盛,而在pH為4和pH為7時(shí),菌株生長(zhǎng)十分緩慢。在12~32h進(jìn)入對(duì)數(shù)期。
【學(xué)位單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R155.5
【部分圖文】：

米酵菌酸結(jié)構(gòu)式Fig1-1BongkrekicAcidStructure

毒黃素結(jié)構(gòu)式Fig1-2ToxoflavinStructure

不同種類樣品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌檢出率比較
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本文編號(hào)：2872763