發(fā)布時間：2020-10-28 03:08

　　 目的脂類代謝異常常表現(xiàn)為血中膽固醇、甘油三酯、載脂蛋白含量改變,與動脈粥樣硬化、高脂血癥、糖尿病的發(fā)生均有一定關系,體內脂類代謝受胰島素、胰高血糖素、飲食營養(yǎng)、體內生化酶活性的復雜調控。鄰苯二甲酸二乙基己酯(Diethyl hexylphthalate,DEHP)和雙酚A(BisphenolA,BPA)均是化工行業(yè)常用的原材料。研究顯示,二者具有內分泌干擾作用,對機體多個組織、器官或系統(tǒng)造成危害,增加內分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)疾病的患病風險。因DEHP和BPA工業(yè)制品在生活中的廣泛應用,在孕婦及兒童體內也能檢測到兩種物質及其代謝產物,其對健康影響應得到重視。肝臟作為體內重要代謝器官,是各種化學物的首要靶點和代謝場所,因此,研究化學物對肝臟的損害及其相應機制,意義重大。鑒于此,本研究建立初斷乳大鼠DEHP和BPA混合接觸動物模型,動態(tài)觀察脂代謝指標變化情況,并從肝臟氧化應激角度探討脂代謝異常的機制,并觀察混合染毒與單獨染毒的毒性差異,為更好地保護人群健康提供毒理學依據(jù)。方法4周齡無特定病原體級(SPF)健康SD雄性大鼠96只,按照體重隨機分成四組,每組24只。分別為陰性對照組、DEHP750 mg/kg組、BPA100 mg/kg組和DEHP 750 mg/kg+BPA 100 mg/kg組,用玉米油配制成相應濃度,陰性對照組給予溶劑玉米油,以5 ml/kg容積連續(xù)灌胃染毒6周,每周7 d,1次/天。分別在染毒后第1周、第3周、第6周每組處理8只動物。分離血清檢測血脂水平和脂代謝酶活性,取肝臟進行總脂酶、氧化應激指標檢測、組織病理學觀察、PPARγ、SOD3和GPx mRNA表達檢測。在整個實驗期間觀察大鼠的生長發(fā)育等情況變化。生化試劑盒測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(L DL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)含量;肝臟中總脂酶:脂蛋白脂酶(LPL)和肝酯酶(HL);肝臟氧化應激指標:丙二醛(MDA)、過氧化氫(H2O2)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)水平。ELISA試劑盒測定血清激素敏感性脂肪酶(HSL)和卵磷脂膽固醇轉移酶(LCAT)。RT-PCR法檢測脂代謝關鍵基因PPARy以及抗氧化基因SOD3和GPx的表達。結果1.一般狀況:從第2周開始,DEHP組和混合染毒組大鼠體質量增長均顯著低于對照組;大鼠肝臟臟器系數(shù)在三個階段DEHP組和混合染毒組顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2.病理檢測:染毒第6周DEHP組出現(xiàn)肝細胞壞死,BPA組肝細胞胞漿呈空泡樣變,混合染毒組出現(xiàn)嚴重的炎細胞浸潤。3.血清學指標:TC含量第1周在BPA組和混合染毒組升高,第6周3個劑量組均增加;TG含量第1周和第3周DEHP組、混合染毒組降低,第6周僅DEHP組降低;LDL-C含量第1周BPA組及混合染毒組降低、第6周混合染毒組增加;HDL-C含量第1周混合染毒組降低、第3周DEHP組和混合染毒組降低、第6周3個劑量組降低(p0.05)。HSL含量第1周和第6周3個劑量組均下降;LCAT含量第3周BPA組和混合組降低,第6周3個劑量組均下降(p0.05)。4.肝臟總脂酶及關鍵基因表達:LPL活性第3周DEHP組和BPA組增加,第6周3個劑量組均下降;HL活性第1周混合組降低,并低于兩單獨染毒組,第3周和第6周DEHP組和混合組降低,且混合組低于BPA組(p0.05)。PPARγ mRNA表達水平第3周混合染毒組、第6周DEHP組和混合染毒組均下降,且第3周混合染毒組低于兩單獨染毒組(p0.05)。5.肝臟氧化應激及相關基因水平:MDA含量第6周BPA組和混合染毒組升高;H202含量第6周3個劑量組均升高;GSH含量第1周混合染毒組、第3周和第6周混合染毒組、DEHP組均升高;SOD活性第3周DEHP組和混合染毒組、第6周3個劑量組均顯著降低;GSH-Px活性第1周混合組升高、第3周和第6周3個劑量組均顯著降低;CAT活性第6周DEHP組和混合組升高(p0.05)。SOD3 mRNA第3周和第6周DEHP組和混合染毒組下降,且混合染毒組低于BPA組;GPx mRNA第6周3個劑量組下降(p0.05)。6.血脂水平與氧化應激關系:TC含量在第1周、第3周、第6周分別與MDA含量、H202含量及GSH含量呈正相關,第6周則與SOD和GSH-Px活性呈負相關;TG含量在3個階段與GSH含量均呈負相關,但與GSH-Px活性第1周正相關、第3周負相關;LDL含量第1周與GSH-Px、GSH呈負相關,第3周與GSH呈正相關,第6周與CAT呈負相關;HDL含量第1周與MDA、GSH-Px呈負相關,第3周與SOD呈正相關,與GSH呈負相關,第6周與GSH-Px、SOD呈正相關,與GSH呈負相關。結論1.DEHP和BPA單獨及混合染毒干擾大鼠的正常發(fā)育,大鼠肝臟出現(xiàn)肝細胞壞死、胞漿空泡樣變、炎細胞浸潤等病變。2.DEHP和BPA致大鼠體內血脂水平異常,脂代謝關鍵基因PPARγ表達受到抑制,血清和肝臟脂代謝相關酶活性降低;肝臟過氧化物增多,抗氧化酶活性下降,抗氧化基因SOD3和GPx受到抑制。3.混合染毒組DEHP和BPA有交互作用,較單獨染毒組血脂指標和氧化應激指標均不同程度出現(xiàn)增強或減弱。4.DEHP和BPA對大鼠脂代謝的影響,與其抑制SOD3、GPx基因表達致氧化應激紊亂有關。
【學位單位】：沈陽醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

實驗結果??ＤＥＨＰ與ＢＰＡ混合染毒對大鼠體重和臟器系數(shù)的影響??（一）各組大鼠一般情況??染毒期間，對照組活動正常，毛發(fā)光澤較好，染毒第４周后，ＤＥＨＰ毒組大鼠毛發(fā)出現(xiàn)蓬松，對灌胃有抵觸行為，并出現(xiàn)體重增長緩慢（二）各組大鼠體質量的變化??ＤＥＨＰ組和混合染毒組大鼠體重增長均從第２周起低于對照組，差意義（產〇．〇５），而ＢＰＡ組與對照組相比未出現(xiàn)明顯差異，且混合第１？４周顯著低于ＢＰＡ組，差異具有統(tǒng)計學意義（ｐ＜〇．〇５）（圖１）４５０?ｎ??

對照組肝小葉結構正常，肝細胞排列整齊，圍繞中央靜脈呈放射狀排列；ＤＥＨＰ??組肝小葉結構不清，出現(xiàn)明顯的肝細胞壞死；ＢＰＡ組肝細胞胞漿空亮，可見彌漫??性肝細胞呈空泡樣變；混合染毒組肝索紊亂，出現(xiàn)嚴重的炎細胞浸潤，見圖２。??？Ｌ—１?，?ｖ?？?，?．?Ｉ??鱗廳：Ｖ：?義?忽??ＤＥＨＰ?，?ＤＥＨＰ??ＩＨｂ９??１９??

氧化應激指標??脂代謝指標ＧＳＨ－Ｐｘ?ＳＯＤ?ＣＡＴ?ＧＳＨＴＣ?－０．７３４＊＊?－０．３９５＊?０．１７７?０．５４３＊＊ＴＧ?０．２０１?０．２８９?０．１１８?－０．６２５＊＊ＬＤＬ?０．１５３?－０．３１３?－０．３７０＊?０．２５６ＨＤＬ?０．３８０＊?０．５２５＊＊?０．００６?－０．７０７＊＊ｆｔ：?＞＜０．０５，?＂ｐ＜０．０ｌ〇??六、ＤＥＨＰ和ＢＰＡ混合染毒對大鼠肝臟ＰＰＡＲ的影響??（一）各組大鼠肝臟ＰＰＡＲｙｍＲＮＡ表達比較??與對照組相比，ＰＰＡＲｙ?ｍＲＮＡ表達水平第３周混合染和混合染毒組均下降，且第３周混合染毒組低于其余兩染有統(tǒng)計學意義（ｐ＜〇．〇５）。??－ＣｏｎｔｒｏｌＢＰ
【參考文獻】

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本文編號：2859486