發(fā)布時(shí)間：2024-06-06 04:20

　　目的:探討17β-雌二醇(17β-estraial,E2)對大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)RhoA/ROCK通路的影響。方法:體外分離培養(yǎng)Sprague-Dawley(SD)大鼠結(jié)腸SMCs。細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法觀察ROCK1、雌激素受體(ER)α與α肌動(dòng)蛋白(α-SMA)共表達(dá)。不同濃度和不同時(shí)間E2刺激后,以反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR、Western blot檢測RhoA、ROCK1表達(dá)。不同濃度ROCK抑制劑Y27632刺激后,Western blot檢測E2對其下游蛋白表達(dá)情況。觀察ER阻斷劑ICI182780、牛血清白蛋白結(jié)合的E2(BSA-E2)、ERα激動(dòng)劑PPT及ERβ激動(dòng)劑DPN在E2影響RhoA、ROCK1表達(dá)的作用。構(gòu)建ERα、ERβ的siRNA,觀察E2刺激對轉(zhuǎn)染后SMC中RhoA、ROCK1表達(dá)的影響。結(jié)果:細(xì)胞免疫熒光示結(jié)腸SMC上ROCK1與α-SMA共表達(dá)。50 nmol/L E2刺激24 h可顯著抑制大鼠結(jié)腸SMC上RhoA、ROCK1表達(dá)(P <0.05)。Y27632可濃度依賴性抑制下游蛋白pMYPT1...

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siRNA轉(zhuǎn)染SMC48h后予E2刺激，ERαsiRNA組RhoA、ROCK1蛋白及mRNA表達(dá)高于對照組（圖6B),ERβsiRNA組與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖2不同濃度E2刺激24h對大鼠結(jié)腸SMC中RhoA、ROCK1表達(dá)的影響

圖1大鼠結(jié)腸SMC中ROCK1、ERα的表達(dá)3討論

胃腸道動(dòng)力障礙性疾病是臨床常見病、多發(fā)病，大量臨床研究顯示女性發(fā)病率高于男性，提示女性激素在胃腸動(dòng)力的抑制性調(diào)節(jié)中有重要作用[17-19]。多項(xiàng)研究證實(shí)雌激素可松弛膀胱、子宮、尿道等部位平滑肌[20-21]，但對結(jié)腸平滑肌收縮的直接作用鮮有研究。圖4不同濃度ROCK抑制劑Y27....

圖350nmol/LE2刺激不同時(shí)間對大鼠結(jié)腸SMC中RhoA、ROCK表達(dá)的影響圖5鑒定E2抑制RhoA/ROCK通路的受體類型

本文編號：3990295