發(fā)布時間：2024-05-21 05:22

　　目的探討含SH2結構域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(src-homology domain 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)對體外活化肝星狀細胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影響。方法通過反復感染AD293細胞,擴增攜帶野生型SHP2(PTPN11)基因并表達綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重組腺病毒Ad-SHP2、攜帶靶向SHP2的RNA干擾序列[短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)]并表達GFP的重組腺病毒Ad-shRNA/SHP2及僅表達GFP的對照空病毒Ad-GFP;體外培養(yǎng)人肝星狀細胞系LX-2,將重組腺病毒Ad-SHP2、Ad-shRNA/SHP2及對照空病毒Ad-GFP分別轉(zhuǎn)染LX-2細胞;應用實時熒光定量PCR技術檢測活化HSC的SHP2 mRNA表達;應用Western blot技術檢測活化HSC的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表達;采用末段脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的脫氧三磷酸尿苷缺口末段標記(terminal ...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
引言
第1章 實驗研究
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 重組腺病毒
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要試劑配制
        1.1.5 主要實驗儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 腺病毒擴增及滴度測定
        1.2.3 腺病毒轉(zhuǎn)染體外活化HSC
        1.2.4 Westernblot實驗檢測體外活化HSC的 SHP2、Bax、Bcl-2 蛋白表達
        1.2.5 實時熒光定量PCR技術檢測體外活化HSC的 SHP2表達
        1.2.6 TUNEL法檢測體外活化HSC凋亡
        1.2.7 膜聯(lián)蛋白-V及碘化丙啶雙標記流式細胞術檢測體外活化HSC凋亡
        1.2.8 統(tǒng)計學方法
    1.3 實驗結果
        1.3.1 腺病毒擴增
        1.3.2 腺病毒滴度
        1.3.3 腺病毒轉(zhuǎn)染HSC的轉(zhuǎn)染效率
        1.3.4 體外活化肝星狀細胞的SHP2過表達及低表達模型成功構建
        1.3.5 TUNEL法檢測體外活化HSC凋亡
        1.3.6 膜聯(lián)蛋白-V及碘化丙啶雙標記流式細胞術檢測HSC凋亡
        1.3.7 SHP2表達變化對體外活化HSCBax表達的影響
        1.3.8 SHP2表達變化對體外活化HSCBcl-2 表達的影響
    1.4 討論
        1.4.1 SHP2對腫瘤細胞凋亡的影響
        1.4.2 SHP2表達變化對體外活化肝星狀細胞凋亡的影響
        1.4.3 SHP2影響體外活化肝星狀細胞凋亡的可能機制
    1.5 結論
    參考文獻
第2章 綜述 SHP2與肝臟疾病研究進展
    2.1 SHP2的結構及活性調(diào)節(jié)
    2.2 SHP2的生物學功能及參與的信號傳導通路
        2.2.1 SHP2的生物學功能
        2.2.2 SHP2參與的信號傳導通路
    2.3 SHP2與肝細胞癌
    2.4 SHP2與非腫瘤性肝臟疾病
    2.5 結語
    參考文獻
結論
致謝
導師簡介
作者簡介
學位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3979664